實(shí)驗(yàn)四植物基因組DNA的提取(共2頁(yè))

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上實(shí)驗(yàn)四植物基因組DNA的提取實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)從植物組織中提取DNA的方法。實(shí)驗(yàn)原理 利用液氮對(duì)植物組織進(jìn)行研磨，從而破碎細(xì)胞。細(xì)胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀。實(shí)驗(yàn)材料: 新鮮植物葉片【儀器、材料與試劑】（）儀器1低溫離心機(jī)2恒溫水浴器3臺(tái)式離心機(jī)4紫外分光光度計(jì)5.液氮灌（二）材料l。三羥甲基氨基甲烷（Tris）2乙二胺四乙酸（EDTA）3氯化鈉（NaCl）4-巰基乙醇5氯化鉀（KCI）6異丙醇7乙醇8.陶瓷研缽9吸頭、小指管（三）試

2、劑（三）試劑1細(xì)胞提取液100 mmolL Tris.HCl (pH 8.0)5 mmolL EDTA (pH 8.0)500 mmolL NaCl1.25 SDS1 molL 巰基乙醇25 molL KCI3，TE（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)二質(zhì)粒DNA的提取及酶切）實(shí)驗(yàn)步驟1. 取4g新鮮葉片，在液氮中研磨成粉末狀（越細(xì)越好）。2. 轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，加入16ml TENbf，充分混勻。65水浴保溫20min。3. 從水浴中取出離心管，加入5ml 5 mol/L KCl溶液，混勻，水浴20min。4. 4000r/min 離心 20 min。5. 將上清液轉(zhuǎn)移到另一50ml離心管中。6. 加等體積酚氯仿

3、混勻，12000rmin 離心5min，取上清。7. 加等體積氯仿，混勻，12000rmin 離心5min，取上清。8. 加入0.61倍體積的異丙醇（沉淀DNA），混勻。放置時(shí)間9. 離心獲得沉淀，70乙醇洗3次。風(fēng)干沉淀。10. 加入3ml TE緩沖液，溶解DNA。11. 取3ml DNA溶液測(cè)定DNA在260nm和280nm的OD值，并分析DNA的純度和含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果注意事項(xiàng)1.盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類(lèi)物質(zhì) 多，必須用10 mM的-ME處理。葉片磨得越細(xì)越好。 2.移液器的使用。3.由于植物細(xì)胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應(yīng)迅速，以免組織解凍，導(dǎo)致細(xì)胞裂解，釋放出DNA酶，使DNA降解。4.研缽預(yù)凍，粉