含cagA基因幽門螺桿菌感染與胃、十二指腸疾病的相關(guān)性研究

1、    含cagA基因幽門螺桿菌感染與胃、十二指腸疾病的相關(guān)性研究        幽門螺桿菌(Hp)感染是引起胃、十二指腸疾病的重要病因。Hp感染可持續(xù)數(shù)十年甚至終生，但是，Hp感染人群大多無癥狀，只有少數(shù)人可致病，這主要是由于Hp菌株間毒力不同所致。含cagA基因(細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白的基因)的菌株，無論表型和基因型都與無cagA基因的菌株明顯不同，其致病力也存在顯著差異，cagA基因株均為高毒株。我們應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增消化性潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌及淺表性胃炎患者胃粘膜活檢組織

2、中cagA基因，通過比較各組疾病中cagA基因的陽性率來判斷靖江地區(qū)cagA基因株感染是否與嚴(yán)重胃、十二指腸疾病相關(guān)。材料和方法一、臨床資料1997年7月12月間，選擇上述四種疾病并Hp陽性者為研究對象，診斷均經(jīng)病理檢查證實。每 疾病設(shè)一組、30例，共4組，合計120例。Hp陽性標(biāo)準(zhǔn)為尿素酶試驗及尿素酶C(ureC)基因同時陽性。各組患者的一般資料見表1。表14組患者的一般資料組別例數(shù)男(例)女(例)年齡(歲)平均年齡(歲)消化性潰瘍30219197343.1萎縮性胃炎301713187343.3胃癌302010347259.1淺表性胃炎301614167142.7二、研究方法(一)取材：用于

3、PCR和尿素酶試驗的各二塊粘膜標(biāo)本均分別取自胃竇部和胃體中下部。如為癌腫，則取材處距癌變病灶3cm以上。(二)快速尿素酶試驗：采用HpUT SQ-H104型試劑盒(福建三強(qiáng)生化有限公司)。陽性呈淡黃色桔紅色，陰性無顯色反應(yīng)。(三)PCR檢測1、模板DNA制備：采用DNA提取液提取活檢胃粘膜中Hp菌株的DNA，陰性對照DNA模板來自大腸桿菌。2、引物合成：引物設(shè)計參照Lage等1的報告，核苷酸引物由中國科學(xué)院上海植物生理研究所合成。3、PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析：反應(yīng)總體積50l，95°C預(yù)變性10分鐘，循環(huán)擴(kuò)增35個周期，每個周期反應(yīng)溫度為ureC基因94°C×2、55

4、°C×2、72°C×2，cagA基因94°C×1、59°C×1、72°C×1，最后以72°C延伸10分鐘。取PCR產(chǎn)物15l在2%瓊脂糖凝膠中電泳，凝膠用溴乙錠染色，在60V電壓下電泳20分鐘后產(chǎn)物在紫外燈下觀察結(jié)果。PCR分子量標(biāo)記選擇pUC 19 DNA/Msp I Marker,23(生工公司)。實驗時加做陰性對照及空白對照。結(jié)果PCR擴(kuò)增后ureC、cagA基因的特異性，以Hp菌株的DNA為模板，可見294bp、400bp處出現(xiàn)條帶，前者為ureC基因陽性，后者為cagA基因陽

5、性。而以來自大腸桿菌的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增無陽性交叉反應(yīng)，空白對照亦無陽性反應(yīng)。見1。11、3：陰性對照2：uerC陽性4：cagA陽性cagA基因總陽性率72.5%。消化性潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌、淺表性胃炎各組cagA基因的陽性率見表2。表2各組cagA基因的陽性率組別例數(shù)陽性率%(例數(shù))消化性潰瘍3080.0(24/30)萎縮性胃炎3076.7(23/30)胃癌3096.7(29/30)淺表性胃炎3036.7(11/30)卡方檢驗顯示消化性潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌三組cagA基因的陽性率顯著高于淺表性胃炎組(x2=9.7724.30,p0.01)，胃癌組也明顯高于消化性潰瘍、萎縮性胃

6、炎組(x2=4.04、5.19,p0.05)。討論近年來，有關(guān)cagA基因株感染在上消化道疾病中的作用國外報道較多。Cover等2發(fā)現(xiàn)消化性潰瘍患者血清抗CagA(細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白，由cagA基因表達(dá))抗體的陽性率幾乎100%，顯著高于非潰瘍患者。Kuipers等3采用前瞻性方法進(jìn)行長達(dá)1013年的追蹤觀察，發(fā)現(xiàn)CagA抗體陽性組發(fā)生萎縮性胃炎62%，陰性組為32%(P=0.02)。Crab-tree等研究了55例Hp感染的胃癌患者，其中50例(91%)血清抗CagA抗體陽性，而47例Hp感染的非潰瘍性消化不良患者血清抗CagA抗體陽性率為72%，二者差異有顯著性(P0.05)。然而，在亞洲不

7、同地區(qū)新近進(jìn)行的cagA基因株感染與胃、十二指腸疾病的相關(guān)性研究卻顯示了不同的結(jié)果。Maeda等4調(diào)查了日本患者Hp菌株中CagA蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果表明CagA蛋白陽性率為90%(61/68)，結(jié)論認(rèn)為，在日本，大多數(shù)Hp菌株CagA均陽性；潘氏等研究發(fā)現(xiàn)，在中國上海，消化性潰瘍患者cagA基因的陽性率達(dá)98%(47/48)，而慢性胃炎患者cagA基因的陽性率為100%(35/35)；趙志泉等5觀察了南京地區(qū)慢性胃炎與消化性潰瘍患者cagA基因株的感染率，慢性胃炎為56%(28/50)，而消化性潰瘍?yōu)?5%(34/40)，兩者相比較，差異有非常顯著性(P0.01)。本文的研究結(jié)果與趙志泉等的

8、結(jié)果較相近，消化性潰瘍患者cagA基因的陽性率顯著高于淺表性胃炎患者(分別為80.0%、36.7%，P0.01)，而且胃癌、萎縮性胃炎患者cagA基因的陽性率也顯著高于淺表性胃炎患者，胃癌患者cagA基因的陽性率還明顯高于消化性潰瘍、萎縮性胃炎患者(P0.05)，說明靖江地區(qū)cagA基因株感染與嚴(yán)重胃、十二指腸疾病高度相關(guān)。造成這些不同結(jié)論的原因可能為cagA基因存在等位基因的變異，以致Hp表型不同，但確切原因還有待進(jìn)一步研究。作者單位：214500江蘇省靖江市人民醫(yī)院(朱炳良、徐曉鳳、鄭銓、朱燕蘭、朱亞平)；上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院(王莉)參考文獻(xiàn)1.Lage AP,Godfroid E,Fau

9、connier A,et al.Diagnosis of Helicobacter Pylori infection by PCR:comparison with other invasive techniques and detection of cagA gene in gastric biopsy specimens.J Clin Microbiol,1995, 2752-2756.2.Cover TL,Glupczynski Y,Lage AP,et al.Serologic de tection of infection with cagA+ Helicobacter pylori strains.J Clin Microbiol,1995,46:1496-15003.Kuipers EJ.Uyterlinde AM,Penz AS,et al.Long-term sequelae of Helicobacter pylori gastritis.Lancet,1995,345:1525-1528.4.Maeda S,Ogura K,Yoshida H,et al.Major virulence factors,vacA and CagA,are commonly positiv