致倦庫(kù)蚊酯酶活性與敵百蟲敏感度對(duì)比實(shí)驗(yàn).

1、致倦庫(kù)蚊酯酶活性與敵百蟲敏感度對(duì)比實(shí)驗(yàn)摘 要 目的：快速敏感檢測(cè)致倦庫(kù)蚊對(duì)敵百蟲的抗性。方法：采 用酯酶活性測(cè)定技術(shù)及生物測(cè)定法。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)室馴化的致倦庫(kù)蚊對(duì)敵百蟲抗 性明顯低于野外采集的，對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。結(jié)論：在進(jìn)行大規(guī)模現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查敵 百蟲抗性時(shí)，酯酶活性測(cè)定技術(shù)優(yōu)于生物測(cè)定法。關(guān)鍵詞抗性致倦庫(kù)蚊敵百蟲The Control Test of Esterase of C.fatigans and the Susceptibility of DipterexZou Ya-d ing(Guizhou Provin cial In stitute of Parasitic Diseases,Guiy

2、a ng 550004)Abstract Solve the resitanee of the high-speed and sensitive Dipterex in sce ne.The esterase activity determ in ati on tech no logy and the method of bioassay of aetivati on. The result showed that the an ti-Dipterex of C.fatiga ns in laboratoy was obviously lower than that of the field

3、ones;The control result of test was the same.The esterase activity determ in ati on tech no logy was better tha n the bioassay for liv ing in vestigati on of an ti-dipterex in the large scale.Key words Resista neeC.fatiga nsDipterex利用致倦庫(kù)蚊體內(nèi)羧酸酯酶活力的高低，來判斷其對(duì)殺蟲劑敵百蟲的抗性 程度，是一種快速準(zhǔn)確的方法。在有機(jī)磷殺蟲劑廣泛用于害蟲防制并產(chǎn)生抗藥

4、性的情況下，為尋找可行的現(xiàn)場(chǎng)快速實(shí)用方法，我們對(duì)致倦庫(kù)蚊進(jìn)行酯酶活性 及敵百蟲敏感度的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以便建立快速敏感的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)方法。1材料與方法1.1 蚊蟲來源蚊蟲為蚊房?jī)?nèi)馴化飼養(yǎng)的及在玉屏、獨(dú)山兩縣野外采集的致倦 庫(kù)蚊，在蚊房?jī)?nèi)產(chǎn)卵并飼養(yǎng)繁殖的后代供試。1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、a -乙酸萘酯、固蘭鹽B冰醋 酸、丙酮、敵百蟲等。1.3 方法1.3.1 濾紙法 500ml搪瓷盆3個(gè)，A盆加pH6.5的磷酸鹽緩沖液100ml，底 物10ml; B盆加蒸餾水100ml，固蘭鹽B300mg C盆加配好的固定液 200ml。用 吸管捕捉未吸血雌蚊，每次處理 810只，用乙醚麻醉，逐個(gè)排列于

5、平板玻璃上，用微量注射器在蚊體側(cè)滴注蒸餾水 15卩l(xiāng)，用圓頭玻棒將蚊蟲磨碎均勻 后，立即將玻棒同吸附水分輕壓在濾紙上。將做好的濾紙放入A盆中90秒取出，用潔凈濾紙吸去多余水份，然后放入 B盆中1分鐘取出，再放入C盆中數(shù)分鐘，取出待水分蒸發(fā)，根據(jù)顏色深淺判斷酯酶活力高低。我們將蚊蟲體液顯 示無色和淡色者定為低酯酶活力組，紫色和深紫色者定為高酯酶活力組（表1）。1.3.2 光電比色法 用單個(gè)未吸血成蚊，加3ml 0.04M pH7.0磷酸鹽緩沖液，在勻漿器中充分研磨。上述酶原中加1ml 3x10-4M a -乙酸荼酯，2225°C保溫5分鐘，加入0.5ml顯色劑，待顯色穩(wěn)定后，以每分鐘

6、3 500轉(zhuǎn)離心1分鐘， 取出上清液用721型分光光度計(jì)，在波長(zhǎng)600um范圍內(nèi)測(cè)出每只雌蚊的光密度 （0.D/雌蚊），結(jié)果見表2。1.3.3 生物測(cè)定法 選擇發(fā)育良好、體態(tài)整齊、大小均勻的W齡幼蟲作測(cè)試材料，以丙酮作溶劑配成所需系列濃度藥液，加入200ml脫氯清水中，每一濃度中吸入蚊幼蟲50100條，24小時(shí)后檢查死亡數(shù)，計(jì)算死亡率，并用 Abbott 公式校正，再以機(jī)率分析法求出半數(shù)致死濃度（LC5。），結(jié)果見表3。2結(jié)果根據(jù)酯酶活性的大小在蚊蟲總數(shù)中的百分率與抗性的規(guī)律性關(guān)系（表1），以高酯酶活力組（獨(dú)山縣）致倦庫(kù)蚊所占百分率最高，為79.0%，玉屏縣為 61.7%（兩縣均超過50%）,

7、實(shí)驗(yàn)室為45.2%（均按紫色、深紫色百分率合計(jì)），說 明獨(dú)山、玉屏兩縣致倦庫(kù)蚊對(duì)敵百蟲的抗性高于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。2說明，獨(dú)山縣每只雌蚊光密度百分率0.7的所占比例最高，為64.2%;玉屏縣為51.0%（兩縣 均超50%）;實(shí)驗(yàn)室所占比例最低，僅為13.5%。兩種方法對(duì)敵百蟲抗性的結(jié)果 一致。表3結(jié)果顯示，獨(dú)山縣致倦庫(kù)蚊 LGo為2.09ppm,玉屏縣為1.38ppm,實(shí) 驗(yàn)室為0.21ppm,分別是上海昆蟲研究所 SEN敏感）品系（0.097ppm）的21.5 倍、14.2倍和2.2倍。表1濾紙法酯酶活性測(cè)定結(jié)果地 占 八、低酯酶活力組咼酯酶活力組實(shí) 驗(yàn) 蚊 數(shù)無色百分 率（%）淡紫 色百分 率（

8、%）合計(jì)（%）紫色百分 率（%）深紫 色百分 率（%）合計(jì)（%）實(shí)驗(yàn) 室128.36746.554.86343.821.445.2144玉屏 縣004638.371.0359.22.52.561.7120獨(dú)山 縣41.84319.221.014564.73214.379.0224表2光電比色法光密度百分率地點(diǎn)每只雌蚊光密度百分率（）< 0.30.31 0.7> 0.7實(shí)驗(yàn)室086.513.5玉屏縣5.044.051.0獨(dú)山縣0.635.264.2表3不同地區(qū)致倦庫(kù)蚊幼蟲對(duì)敵百蟲的敏感度地點(diǎn)LGo(ppm)Y=a+bx95刑信限2X實(shí)驗(yàn)室0.21-0.17+2.23x0.17 0.251.04玉屏縣1.38-0.11+1.68x0.87 1.380.33獨(dú)山縣2.09-1.84+2.06x1.71 2.561.293討論三種方法測(cè)定結(jié)果一致，均說明獨(dú)山縣致倦庫(kù)蚊對(duì)敵百蟲的抗性高，玉屏 縣次之，實(shí)驗(yàn)室的最低。比較 3種方法，濾紙法較光電比色法和生物測(cè)定法簡(jiǎn) 單、快速，每人每天可以完成 200個(gè)以上的蚊媒測(cè)定，是一種用于現(xiàn)場(chǎng)蚊媒抗 性初篩較為實(shí)用的方法。光電比色法所需儀器較復(fù)雜、精密，實(shí)驗(yàn)溫度要嚴(yán)格 掌握，但結(jié)