醫(yī)學生物化學實驗-教案

1、醫(yī)學生物化學實驗教案第 1 次課 2學時實驗項目 3，5-二硝基水楊酸法（DNS法）測定還原糖 實驗性質(zhì)設計性實驗教學目的和要求1、了解糖的還原性2、掌握還原糖定量測定的原理和方法。3、熟悉分光光度計的使用方法。教學重點與難點重點:繪制標準曲線的方法，分光光度計的使用原理和使用方法。難點：標準曲線的應用。實驗材料1.試劑（1）1mg/mL葡萄糖標準溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL，即含葡萄糖為1.0mg/mL。（2）3，5-二硝基水楊酸試劑：稱取6.3 g 3，5-二硝基水楊酸并量取262 mL 2mol/L NaOH加到酒石酸鉀納的熱溶液

2、中（182 g酒石酸鉀納溶于500 mL水中），再加5 g結晶酚和5 g亞硫酸氫鈉溶于其中，攪拌溶解，冷卻后定容到1000 mL貯于棕色瓶中。（3）未知濃度還原糖。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉。3. 器材 分光光度計，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。實驗內(nèi)容一、實驗原理：在NaOH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關系，利用比色法可測定樣品中的含糖量。黃色 桔紅色二、實驗步驟：1.取7支具塞刻度試管編號，按表1分別加入濃度為1

3、mg/mL的葡萄糖標準液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應液。表1 葡萄糖標準曲線制作管 號1mg/ml葡萄糖標準液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD-540nm)100.50.5020.10.40.50.130.20.30.50.240.30.20.50.350.40.10.50.460.500.50.57（未知濃度還原糖）0.500.50.5將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計上進行比色。調(diào)波長540nm，用1號管調(diào)零點，分別測出26號管的光密度值。2.繪制標曲以光密度值為縱

4、坐標，葡萄糖含量(mg)為橫坐標，在坐標紙上繪出標準曲線（電腦Excel完成最好）。計算7號管還原糖的百分含量。三、結果與計算：計算出7號管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數(shù)，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。 查曲線所得葡萄糖毫克數(shù)×提取液總體積/測定時取用體積還原糖(%) =×100% 樣品毫克數(shù)教學過程中師生活動設計 糖的還原性，具有還原性的糖結構有何特點？提綱、板書設計 實驗原理及反應方程式，實驗步驟中表1及計算公式作業(yè) 1、 為什么要設置空白對照？2、 標準曲線的定義？主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013

5、2生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析1、 讓學生理解糖定量測定的原理及方法；2、 強調(diào)標準曲線的繪制要點；3、 需要和學生一起推導還原糖濃度的公式 醫(yī)學生物化學實驗教案第 2次課 2學時實驗項目 糖的呈色反應和還原糖檢驗實驗性質(zhì)驗證性實驗教學目的和要求1.了解糖類某些顏色反應的原理2.學習應用糖的顏色反應鑒別糖類的方法教學重 點與難點重點：顏色反應鑒別糖的方法難點：鑒別糖的反應原理實驗材料1、儀器：試管及試管架、滴管、移液管及恒溫水浴鍋2、試劑：莫氏試劑、塞氏試劑、托倫試劑；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液實驗內(nèi)

6、容一、實驗原理：萘酚反應：糖在濃無機鹽作用下，脫水生成糠醛衍生物，后者在濃硫酸的作用下能與萘酚生成紫紅色物質(zhì)，在糖液面與濃硫酸液面間出現(xiàn)紫色環(huán)。但一些非糖物質(zhì)對此反應也呈陽性間苯二酚反應：在酸作用下，酮糖脫水生成羥甲基醛，后者可與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)。此反應是酮糖的特異反應。醛糖在同樣條件下呈色反應慢。托倫反應：戊糖在濃酸作用下脫水生成糠醛，后者可與間苯三酚結合生成櫻桃紅色物質(zhì)。本反應常用來鑒定戊糖，戊糖此反應最快，可以和其他糖類區(qū)分。二、操作步驟： 萘酚反應：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。另外取1支試管，只加2

7、滴莫氏試劑作為空白對照，傾斜4支試管，沿各試管壁緩慢加入濃硫酸約1.5 mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動。試管 中液體分成兩層，濃硫酸在試液下面。在兩液分界處有紫紅色環(huán)出現(xiàn)。觀察、記錄各管顏色。間苯二酚反應：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液各0.5 mL。再向各管分別加入塞氏試劑2.5 mL，混勻。將3支試管同時置于沸水浴中，注意觀察顏色的變化及變化時間。托倫反應：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1%葡萄糖溶液各0.1 mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。將3支試管同時置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏變化的時間。教學過程中師生活

8、動設計觀察和記錄各管顏色及顏色變化的時間后，說出各管顏色變化的原因。提綱、板書設計原理及操作步驟作業(yè)1.簡述萘酚反應原理。2.可用何種顏色反應鑒別酮糖存在。主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析1、讓學生掌握糖顯色反應的原理；2、給學生強調(diào)注意觀察各管顏色變化的時間醫(yī)學生物化學實驗教案第 3次課 2學時實驗項目 蛋白質(zhì)等電點和沉淀反應實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求1.了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。2.學習測定蛋白質(zhì)等電點的方法。3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關系及沉淀蛋白質(zhì)的方法以及其實用意義。教學重點與難點重

9、點：學習測定蛋白質(zhì)等電點的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。難點：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。實驗材料（一）材料新鮮雞蛋（二）試劑1、0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL2、1.00mol/L醋酸溶液100mL3、0.10mol/L醋酸溶液300mL4、0.01mol/L醋酸溶液50mL5、蛋白質(zhì)溶液500mL 5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液（新鮮雞蛋清:水=1:9）6、pH4.7醋酸醋酸鈉的緩沖溶液100mL7、3%硝酸銀溶液10mL8、5%三氯乙酸溶液50mL9、95%乙醇250mL10、飽和硫酸銨溶液250mL11、硫酸銨結晶粉末10000m

10、L12、0.1mol/L鹽酸溶液300mL13、0.1mol/L氫氧化鈉溶液300mL14、0.05mol/L碳酸鈉溶液300mL15、甲基紅溶液20mL（三）器具水浴鍋、溫度計、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實驗內(nèi)容1.實驗原理：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH值。蛋白質(zhì)的沉淀反應可分為兩類。（1） 可逆的沉淀反應 此時蛋白質(zhì)分子的結構尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白

11、質(zhì)時，常利用此類反應。（2） 不可逆沉淀反應 此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結構發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機酸的反應都屬于此類。蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。二、實驗步驟：（一）酪蛋白等電點的測定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。試管號蒸餾水（mL）0.01 mol/L蠟酸（mL）0.1 mol/L蠟酸(mL)1.0 mol/L蠟酸(mL)18.40.6-28.7-0.338.0-1.

12、047.4-1.6 （2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL， 加一管，搖勻一管。此時1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點。（二）蛋白質(zhì)的沉淀及變性1、蛋白質(zhì)的鹽析 無機鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。加蛋白質(zhì)溶液5mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則

13、析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。此時析出沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。2、重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)：重金屬離子與蛋白質(zhì)結合成不溶于水的復合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液12滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？3、 某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。4、有機溶劑沉淀蛋

14、白質(zhì) 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點NaCl，混勻。5、 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號。依下表順序加入試劑： 試劑（mL）管號蛋白質(zhì)溶液0.1mol/L氫氧化鈉溶液0.1mol/L鹽酸溶液95%乙醇pH4.7緩沖溶液123111111111 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻向各管內(nèi)加入水8mL，然后在第2，3號管中各加一滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1mol/L鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。教學過

15、程中師生活動設計 蛋白質(zhì)沉淀原理，什么是蛋白質(zhì)變性？根據(jù)性質(zhì)推測其應用提綱、板書設計 原理及簡要操作步驟作業(yè) 1.什么是等電點？2.臨床上為什么可以用蛋清或牛乳解救誤服金屬鹽的病人？主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、 通過原理分析，幫助學生理解“沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀”；2、 重點區(qū)別：“可逆沉淀”與“不可逆沉淀”醫(yī)學生物化學實驗教案 第 4 次課 2學時實驗項目 蛋白質(zhì)和氨基酸顯色反應 實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求1.學習和了解常用的幾種鑒定

16、蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。2.了解蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應原理。教學重 點與難點重點：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應原理。難點：鑒定蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。實驗材料試劑：0.5%醋酸鉛1mL、10%NaOH、1%CuSO4器具：水浴鍋、溫度計、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實驗內(nèi)容一、實驗原理：1.雙縮脲反應(biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應稱為雙縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。2.苯環(huán)的黃色反應 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 3.醋酸鉛反應（半胱氨酸和胱氨酸）

17、R-SH+2NaOHR-OH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實驗步驟：1.雙縮脲反應(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。觀察現(xiàn)象，記錄。2.苯環(huán)的黃色反應 向6個試管中按下表加試劑，觀察現(xiàn)象并記錄。雞蛋清溶液（蛋清:水=1:9）管號123456材料雞蛋清液指甲頭發(fā)0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸（滴）4少許少許444濃硝酸（滴）22020444現(xiàn)象逐滴加10% NaOH后現(xiàn)象變化3.醋酸鉛反應0.5%醋酸

18、鉛1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三樣試劑混勻加熱，觀察現(xiàn)象。然后冷卻至2030，加10滴濃HCL，再將濕潤的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時觀察試紙顏色變化。教學過程中師生活動設計 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應顏色與什么相關？提綱、板書設計 原理及簡要操作步驟作業(yè) 1.在實驗室如何區(qū)分核酸和蛋白質(zhì)？2.黃色反應中為何會出現(xiàn)深淺不一的黃色？主要參考資料1生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、 實驗過程中讓學生重點觀察顏色變化的過程；2、 醋酸鉛反應的每一步都要記錄現(xiàn)象醫(yī)學生物化學實驗

19、教案 第 5次課 2學時實驗項目 糖的薄層層析 實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求1.了解薄層層析的基本原理。2.熟悉薄層層析的操作過程。教學重 點與難點重點：掌握薄層層析的吸附原理。難點：掌握分配系數(shù)，Rf值。實驗材料四種糖樣品、染色液、擴展劑、層析缸、層析板等實驗內(nèi)容一、實驗原理：薄層層析(簡稱TLC)是在吸附層析基礎上發(fā)展起來的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進行的，故稱薄層層析。為了使所要分析的樣品各組分得到分離，必須選擇合適的吸附劑。硅膠、氧化鋁和聚酰胺是廣泛采用的吸附劑，在吸附劑或支持劑中添加合適的粘合劑后再涂布，可使薄層緊貼在玻璃板上。糖是多羥基化合物

20、在硅膠G薄層上展層時，被吸附的強弱有差異，同時在展開劑中溶解性質(zhì)也有差異。吸附力主要與糖的相對分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關，一般為三糖二糖單糖，醛糖酮糖脫氧糖。經(jīng)過適當?shù)娜軇┱归_后，糖在薄板上的移動速度是戊糖己糖雙糖三糖。薄層層析與其他方法比有明顯的優(yōu)點：層析時間短、樣品用量范圍大(1g-0.5g)、觀察結果方便、可以分離多種化合物等，其靈敏度比紙層析高10-100倍，顯色方法甚至可以用腐蝕性顯色劑。而且薄層層析法操作方便，設備簡單，所以薄層層析法目前應用范圍相當廣泛。二、實驗步驟：1點樣 選取制備好的薄板一塊，在距底邊1.5cm 的直線上均勻選4個點。用毛細管分別點上不同的糖樣品于4個點，樣品量控制

21、在5-10g，斑點直徑不超過3mm。點樣完畢，立即用電熱吹風機吹干樣點。2展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當展層溶劑到達離薄板頂端約1cm 處時取出薄板，在溶劑前沿處作一記號，于80下烘干5min。3顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。三、實驗結果：（1）記下各斑點的位置、顏色，計算Rf值。（2）鑒定混合糖中糖的種類，并繪出層析圖譜。教學過程中師生活動設計 還有哪些層板方法？提綱、板書設計 原理及簡要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關？主要參考資料1生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，20102生

22、物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、 點樣是本實驗的關鍵，教師在指導學生操作時，強調(diào)點樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點樣點要集中；2、 放展板時，點樣點不要浸如展層溶液中醫(yī)學生物化學實驗教案 第 6次課 2學時實驗項目 酶的特性 實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求掌握酶促反應速度的幾個主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。教學重 點與難點重點：唾液淀粉酶催化的酶促反應；淀粉水解程度的判斷。難點：酶活性的影響因素。實驗材料儀器：水浴鍋、電爐、白瓷板、試管、量筒、漏斗、脫脂棉。試劑：0.2%、0.5%淀粉液、0.3%NaCl、0.85%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、

23、1%Na2SO4、pH=5.0、pH=8.0、pH=6.8緩沖溶液。實驗內(nèi)容一、實驗原理：溫度與酶促反應速度關系密切。溫度降低時，酶促反應速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應速度逐漸加快。在某一溫度時反應速度達到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。溫度繼續(xù)升高，反應速度反而下降。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37左右。 pH值也會影響酶促反應速度。因為酶本身是蛋白質(zhì)，pH不僅影響酶蛋白分子某些基團的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結合。當酶促反應速度達到最大值時的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。不同的酶最適pH值不盡相同，人體多數(shù)酶的最適pH值在7.0左右。例如唾液淀粉酶的最適pH

24、值為6.8。 凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應速度的物質(zhì)都稱為酶的激活劑。例如Cl-是唾液淀粉酶的激活劑。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘顯現(xiàn)的顏色不同來判斷：淀粉(藍色)紅色糊精(紅色)無色糊精(不顯色)麥芽糖(不顯色)葡萄糖(不顯色) 二、實驗步驟：1.制備稀釋50倍的唾液淀粉酶：用蒸餾水漱口清除食物殘渣，再含一口蒸餾水一分鐘后使其流入量筒并稀釋50倍，混勻備用。2.溫度對酶促反應速度影響實驗 （1）取試管3支，編號，各管按下表依次加入各種試劑。

25、 溫度對酶促反應速度影響實驗加樣表管號 1 2 3 0.1淀粉溶液（mL） 1.5 1.5 1.5稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 1搖勻水浴溫度 37 0 37（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KI-I2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結果3.pH對酶促反應速度的影響實驗（1）取試管3支，編號，按下表依次加入各種試劑。 pH對酶促反應速度影響實驗加樣表管號 1 2 30.2淀粉液（mL） 2 2 2PH 5.0緩沖液（mL） 3 PH 6.8緩沖液（mL） 3 PH 8.0緩沖液（mL） 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37水浴5分鐘后，取2號管中混合液1滴

26、于點滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取2號管的混合液1滴于點滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，直至變成棕黃色時，向所有試管內(nèi)依次滴加2滴KI-I2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結果。4.激活劑和抑制劑對酶促反應速度的影響（1）取試管4支，編號，按下表依次加入各種試劑。激活劑和抑制劑對酶促反應速度影響實驗加樣表管號 1 2 3 40.1淀粉液（mL） 1.5 1.5 1.5 1.51NaCl溶液（mL） 2 1Na2SO4溶液（mL） 2 1CUSO4溶液（mL） 2 蒸餾水（mL） 2稀釋唾液酶（mL） 0.5 0.5 0.5

27、 0.5（2）混勻后，將各管置于37水浴8分鐘后，取1號管中混合液1滴于點滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取1號管的混合液1滴于點滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，直至變成棕黃色時，向所有試管依次滴加1滴KI-I2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結果。教學過程中師生活動設計 隨著淀粉水解，為什么與碘有顏色反應變化？提綱、板書設計 原理及簡要操作步驟作業(yè) 1在作離子對酶活的影響時3、4號管有何作用？2.在激活劑和抑制劑對酶促反應速度的影響實驗中如何證明Cl-是唾液淀粉酶的激活劑？3.酶的抑制劑與變性劑有何區(qū)別？主要參考資料1生物化

28、學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，20102生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、對照實驗要注意同步性；2、不同人的唾液淀粉酶活性不盡相同，讓學生注意到樣本差異；3、重點分析激活劑和抑制劑對酶促反應速度的影響醫(yī)學生物化學實驗教案 第 7次課 2學時實驗項目 Folin-酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度 實驗性質(zhì)綜合性實驗 教學目的和要求1. 學習會用Folin-酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的方法。2. 鞏固分光光度計的使用。教學重點與難點1、 重點：分光光度計的使用2、 難點：標準曲線的繪制實驗材料試劑：標準蛋白溶液，F(xiàn)olin-酚試劑，樣品液蛋白質(zhì)器材：分光光度計、恒溫水

29、浴鍋、試管、移液管實驗內(nèi)容一、實驗原理Folin-酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin-酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結合生成復合物。Folin-酚試劑中的磷鉬酸鹽-磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。二、實驗步驟1.曲線的測定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標準蛋白質(zhì)溶液（濃度

30、為250mg/ml）。用水補足到1.0毫升，然后每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫（2025）放置 10分鐘。再逐管加入0.5毫升試劑乙（Folin-酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然后在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照，于700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質(zhì)的量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪制出標準曲線。2.樣品的測定：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20250微克），按上述方法進行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。通常樣品的測定也可與標準曲線的測定放在一起，同時進行。即在標準曲線測定的各試

31、管后面，再增加3個試管。如上表中的8、9、10試管。根據(jù)所測樣品的吸光度值，在標準曲線上查出相應的蛋白質(zhì)量，從而計算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度。教學過程中師生活動設計 測定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 簡述Folin-酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測定方法的優(yōu)點。主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析1、 強調(diào)Folin-酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理；2、 鞏固分光光度計的使用醫(yī)學生物化學實驗教案 第 8 次課 2學時實驗項目 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的

32、和要求1.了解電泳技術的一般原理。2.掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作。教學重 點與難點重點：掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作方法。難點：電泳技術的原理。實驗材料器材：DYY-6型常壓電泳儀、醋酸纖維薄膜（2 cm×8cm）、.培養(yǎng)皿、蓋玻片、濾紙、鑷子。試劑：1 巴比妥緩沖液（pH8.6，離子強度0.07）：巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，用蒸餾水定容至1000mL。2 染色液：氨基黑10B 0.25g，用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重復使用）。3漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。4透明液（僅在定量分析時使用）：無水乙醇7份，冰醋酸3份，混

33、勻。實驗內(nèi)容一、實驗原理：電泳是帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象。醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是一種區(qū)帶電泳技術，將血清樣品點樣于醋纖膜上，在pH86的緩沖液中電泳時，血清蛋白質(zhì)均帶負電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。 影響電泳遷移率的外界因素：電場強度、溶液的pH值、溶液的離子強度和電滲現(xiàn)象。影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點所帶凈電荷的量、質(zhì)點的大小和形狀。本實驗以醋酸纖維素為電泳支持物，它是纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯，將它溶于有機溶劑（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等

34、）后，涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的結構，厚度約為120 m，有很強的通透性，對分子移動阻力很小。醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡便、分辨力高，對樣品無拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點。本實驗中用于電泳分離各種血清蛋白。血清中含有清蛋白、-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白和各種脂蛋白等，各種蛋白質(zhì)在電場中的遷移速度不同。正常人血清在pH8.6的緩沖體系中電泳，染色后可顯示5條區(qū)帶。其中清蛋白的泳動速度最快，其余依次為1-、2-、-及-球蛋白。二、實驗步驟：1）預處理；2）點樣：3）電泳；4）染色；5）漂洗，吸干。1.預處理：用鑷子取醋酸纖維薄膜2張，識別出光澤面與粗糙面，將粗糙

35、面朝上放在電泳槽中的緩沖液中浸泡20min。 2.點樣：事先用點樣器在濾紙上點幾個樣，熟悉一下點樣器的用法。然后把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層濾紙內(nèi)用手指快速捋一下，以吸干表面多余的液體，隨即將粗糙面朝上平鋪在玻璃板上。注意，切勿將膜條長時間放在濾紙上，以免膜條中的緩沖液過度吸出。用蓋玻片蘸一點血清，使血清均勻地分布在蓋玻片切面。將蓋玻片在膜條一端23cm處輕輕地垂直落下并隨即提起，這樣即在膜條上點上了細條狀的血清樣品，每張膜點一個樣。（要求：輕、勻、直、細）3電泳：預先要在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個電極槽內(nèi)的液面等高，做好濾紙橋。用鑷子將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上，要平直。膜條光面朝上，

36、點樣端靠近負極、且懸空（可用鑷子再將膜條兩端壓服帖一些）。蓋嚴電泳室，檢查一下電泳槽和穩(wěn)壓電源是否已經(jīng)連接好。通電，調(diào)節(jié)電壓至110V，電泳時間約為30min。4染色：電泳完畢后，關上電源開關，用鑷子將薄膜條取下并放在裝有染色液的培養(yǎng)皿中浸泡34min（注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)）。5漂洗：將膜條從染色液中取出，在培養(yǎng)皿的邊緣上瀝去表面多余的染色液，依次放入裝有漂洗液的培養(yǎng)皿（共有2套）中漂洗2次（未漂洗時注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)），至色帶清晰的電泳圖譜。三、分析結果：實驗采用小牛血清故出現(xiàn)三條色帶：清蛋白；1球蛋白；2球蛋白，且清蛋白顏色最深。（本實驗由于時間有限，授課時間

37、安排首先由教師簡單講解實驗步驟并向?qū)W生演示操作方法后指導學生操作，在電泳的30min里教師給學生詳盡講解實驗原理，操作步驟及其注意事項。）教學過程中師生活動設計 蛋白質(zhì)顆粒為什么能電泳？依據(jù)什么性質(zhì)？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè)1.電泳時，醋酸纖維薄膜點樣的一端應靠近哪一極？為什么？2.血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條區(qū)帶？主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析1、需要強調(diào)點樣方法，避免點樣過多，重復點樣等；2、重點講解遷移速率的因素；3、結合血清電泳在醫(yī)學檢驗領域的應用，便于學生更好

38、的理解醫(yī)學生物化學實驗教案 第 9次課 2學時實驗項目 血清ALT活性測定 實驗性質(zhì)綜合性實驗 教學目的和要求掌握血清谷丙轉氨酶活性測定的基本原理、具體操作方法了解其臨床意義。教學重 點與難點重點：血清谷丙轉氨酶活性測定的原理。難點：血清谷丙轉氨酶活性測定的方法。實驗材料試劑：0.1mol/L磷酸鹽緩沖溶液、0.4mol/L氫氧化鈉溶液、1mol/L氫氧化鈉溶液、ALT底物液、2，4-二硝基苯肼溶液、丙酮酸標準液。材料：分光光度計、恒溫水浴鍋、試管、移液管、容量瓶、量筒。實驗內(nèi)容一、實驗原理：丙酮酸可與2，4-二硝基苯肼在酸性溶液中反應形成相應的2，4-二硝基苯腙，呈黃色，后者在堿性條件下呈紅

39、棕色。通過測定其在520nm波長處的光吸收來了解丙酮酸的生成量，借此測定血清ALT的活力，故該類方法又稱比色測定法。該法雖然也有缺點，但操作簡便，不需要特殊儀器和試劑，故在臨床上被廣泛應用。該法的單位定義是：每lmL血清在pH7.4，37保溫條件下與底物作用30分鐘，每生成2.5g丙酮酸為一個單位。人血清的丙氨酸氨基轉移酶正常值為240U。二、實驗步驟：1.酶活反應體系的配制試劑測定管（1）測定對照管（2）標準管（3）標準對照管（4）ALT底物（mL）0.50.50.537度保溫5min（預熱，可略）血清（mL）0.20.2-丙酮酸標液（200ug/ml)-0.2-磷酸buffer（mL）-0

40、.2混勻，37度保溫30min2,4-二硝基苯肼（mL）0.50.50.50.5混勻，37度保溫20minALT底物（mL）-0.50.50.50.4mol/NaOH（mL）5.05.05.05.02.反應后吸光值的讀取以dH2O為空白對照測四管的A值3.酶活性的計算公式：教學過程中師生活動設計 什么是酶的比活力？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 混浴各管后，為何要在10min后，30min內(nèi)測其吸光值？主要參考資料1 生物化學實驗，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析1、 原理講解要結合血清ALT活性測定在醫(yī)學檢驗領域的應用；2

41、、 整個實驗過程中加樣和操作過程需規(guī)范，否則數(shù)據(jù)差距較大；3、 幫助學生推導酶活性的計算公式醫(yī)學生物化學實驗教案 第 10次課 2學時實驗項目 維生素C含量測定實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求學習測定VC含量的原理和方法掌握微量滴定管使用方法教學重 點與難點重點：滴定操作難點：計算方法實驗材料試劑：辣椒勻漿（樣品VC）、標準VC，2，6-二氯酚靛酚溶液。器材：容量瓶，微量滴定管、小三角瓶、1草酸、2草酸、移液管。實驗內(nèi)容一、實驗原理：氧化型2，6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉紅色，在中性或堿性溶液中呈藍色，還原型2，6-二氯酚靛酚無色。當用此染料滴定含有Vc的酸性溶液時，在Vc未全部氧化前，滴

42、下的染料立即被還原成無色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液顯示粉紅色，此時即為滴定終點，表示溶液中的Vc剛剛被氧化完全。因此，從滴定時2，6一二氯酚靛酚標準液的消耗量，可以計算出被檢物質(zhì)中Vc的含量。二、實驗步驟：1辣椒勻漿的稀釋取辣椒勻漿7mL（計為5.0g），裝入小容量瓶，用2草酸稀釋定容至50mL刻度線。2標準VC的滴定 吸取標準VC（0.1mg/mL）1.0ml置于錐形瓶中，加9mL 1草酸混勻，用裝有2，6-二氯酚靛酚的微量滴定管滴定至淡紅色（保持5s不褪去）為終點，記下所用體積V標3樣品VC的滴定 從1中取10mL，放入錐形瓶，用2，6-二氯酚靛酚滴定，方法同上

43、，作兩次平行實驗。取消耗體積的平均值，記下體積V樣三、樣品VC濃度的計算：經(jīng)草酸稀釋后的辣椒勻漿中VC濃度為：每100g純辣椒中含VC的mg數(shù)為：注意：整個實驗要迅速，以防VC氧化。教學過程中師生活動設計 VC作用及缺乏癥提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 本實驗中為何用草酸稀釋VC，而不用純水？主要參考資料1生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，20102生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、滴定前要提醒檢查滴定管的氣密性，裝溶液后還要排氣泡，微量滴定管需正確使用；2、結果計算較復雜，幫助推導和理解醫(yī)學生物化學實驗教案 第 11次課 2學時實驗項目

44、 血清膽固醇的測定實驗性質(zhì)設計性實驗 教學目的和要求1.學習測定膽固醇的原理2.掌握化學比色法測定膽固醇的方法教學重 點與難點重點：血清中膽固醇測定的原理難點：膽固醇測定方法實驗材料儀器：離心機、離心管、試管、刻度吸量管、722型分光光度計。試劑：10%三氯化鐵溶液、磷硫鐵試劑、膽固醇標準儲存液、膽固醇標準溶液實驗內(nèi)容一、實驗原理： 本實驗采用化學比色法測定總膽固醇（包括游離型膽固醇和膽固醇酯）。血清經(jīng)無水乙醇處理后，蛋白質(zhì)沉淀出來，膽固醇則溶于其中。在乙醇提取液中加磷硫鐵試劑、膽固醇試劑產(chǎn)生紫紅色化合物，顏色深淺與膽固醇總量成正比，可用分光光度計法測定。二、實驗步驟：（1）吸取0.1mL血清

45、置于干燥的離心管內(nèi)，先加無水乙醇0.4mL，搖勻后再加無水乙醇2.0 mL，搖勻，10 min后離心（3000r/min 5 min），取上清備用。（2）取3支干燥試管，編號，分別加入無水乙醇1.0 mL（空白管）、膽固醇標準溶液1.0 mL（標準管）、上述乙醇提取液1.0 mL(樣品管)，各管皆加入磷硫鐵試劑1.0 mL，搖勻，10 min后分別轉移至0.5 cm比色皿愉，用722型分光光度計在560 nm波長下比色。三、結果計算： 血清膽固醇含量（mg/mL）=A2/A1*0.08/0.04=A2/A1*2式中： A1為標準溶液的吸光度；A2為樣品液的吸光度人血清膽固醇的正常含量為2.8-

46、5.7 mmol/L教學過程中師生活動設計思考人體內(nèi)膽固醇的生理作用及正常含量提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 計算公式中0.08和0.04各代表什么意義主要參考資料1生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，20102生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析1、重點講解血清膽固醇的測定原理；2、再次復習分光光度計使用要熟練醫(yī)學生物化學實驗教案 第 12次課 2學時實驗項目 牛奶中提取酪蛋白實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求1.學習從牛乳中制備酪蛋白的方法。2.了解從牛奶中制取酪蛋白的原理。教學重點與難點重點：從牛奶中制取酪蛋白的原理難點：加乙醇和水的目的實

47、驗材料鮮牛奶、恒溫水浴鍋、臺式離心機、抽濾裝置。試劑：95%乙醇；無水乙醚；0.2mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液實驗內(nèi)容一、實驗原理：牛乳中的主要蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為3.5g/100mL。酪蛋白是含磷蛋白質(zhì)的混合物，相對密度1.251.31，不溶于水、醇、有機溶劑，等電點為4.7。利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH值調(diào)至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂質(zhì)雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。二、實驗步驟：1.將5mL牛奶置試管或小燒杯中，在水浴中加熱至40，在攪拌下漫漫加入預熱至40（應注意兩種液體都應先預熱至40再用），pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液5ml，用精密pH試紙

48、或酸度計調(diào)pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液進行調(diào)整)。觀察牛奶開始有絮狀沉淀出現(xiàn)后，保溫一定時間使沉淀完全。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心分離8min（8000r/min）或15min（2000r/min），棄去上清液，得到酪蛋白粗制品；2.用蒸餾水洗滌沉淀3次（洗滌時將沉淀顆粒用干凈吸管吹開或用毛細管的封閉一端攪開，充分洗滌），離心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），棄去上清液；3.在沉淀中加入3mL95%的乙醇，攪拌片刻；4.將沉淀攤開在表面皿上，烘干，得酪蛋白精制品；5.稱取所獲酪蛋白的質(zhì)量（g）。4、 實驗結果與計算：計算含量和得率：酪蛋白含量

49、（g/mL）=酪蛋白（g）/50mL×100%；得率=測得含量/理論含量×100%。教學過程中師生活動設計 牛奶中蛋白質(zhì)成份，牛奶的營養(yǎng)提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè)設計另一種方法提取蛋白的方法。主要參考資料1生物化學實驗，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，20102生物化學實驗教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010課后自我總結分析1、 學習離心機的使用；2、 等電點的調(diào)節(jié)直接影響得率，PH要調(diào)節(jié)準確醫(yī)學生物化學實驗教案 第 13次課 2學時實驗項目 卵磷脂的提取與鑒定實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求1.掌握卵磷脂的提取鑒定的原理和方法。2.驗證卵磷脂水解后的產(chǎn)物，鞏固對卵磷脂組成結構的認識。教學重點與難點重點：掌握卵磷脂的提取和鑒定的原理難點：如何去除蛋黃