不同保存液保存小腸的效果評估

1、    不同保存液保存小腸的效果評估         【摘要】目的評價乳酸林格(LR)液、Euro-Collins (EC) 液、高滲枸椽酸鹽嘌呤(HC-A)液和武漢醫(yī)學(xué)院器官1號(MWO-1)液保存豬小腸的效果。方法根據(jù)不同保存液將動物隨機(jī)分成4組，每組又根據(jù)保存時間不同分成3個亞組，供腸保存后行自體移植。結(jié)果小腸保存10小時后移植，術(shù)后3周各組受體的存活率均為100%；保存18小時，LR液組、EC液組、HC-A液組和WMO-1液組受體的存活率分別為60%、100%、80%

2、和100%；保存24小時后，LR液組的移植小腸不能存活，HC-A液組、EC液組和WMO-1液組受體的存活率分別為20%、80%和80%，EC液和WMO-1液保存的小腸組織損傷較輕，腸粘膜的ATP含量及Na+-K+ATP酶的活性高于LR液和HC-A液保存組。結(jié)論研究表明保存豬小腸EC液和WMO-1液優(yōu)于LR液和HC-A液，前者可以有效地保存豬小腸18小時，而LR液和HC-A液只能保存10小時。【關(guān)鍵詞】腸，小器官保存組織生存Evaluation of various solutions for porcine small bowel graft preservationLI Yousheng,

3、LI Jieshou, LI Ning, et al.Institute of General Surgery, Nanjing General Hospital of PLA, Nanjing 210002【Abstract】ObjectiveTo study the effects of four solutions, lactate Ringer (LR) solution, Euro-Collins (EC) solution, hyperosmolar citrate adenine (HC-A) solution, and WMO-1 solution, on porcine sm

4、all bowel graft preservation.MethodsThe animals were given various solutions and randomly divided into 4 groups. And each group was redivided into three subgroups based on preservation time (10 h, 18 h, and 24 h). After preservation, the porcine segmental small bowel autotransplantation was performe

5、d.ResultsAfter the small bowel preservation for 10 h, on postoperative day 21 the recipient survival rate was 100% in all groups. After the small bowel preservation for 18 h, the recipient rate was 60% (LR), 100% (EC), 80% (HC-A)，and 100% (WMO-1). After the small bowel preservaton for 24 h, no anima

6、ls were survived more than 21 days in LR group, in HC-A, EC and WMO-1 groups the recipient survival rate was 20%, 80%, and 80%, respectively. Intestinal mucosal ATP level and Na+-K+ATPase activity were higher in EC and WMO-1 groups than in LR and HC-1 groups.ConclusionSmall bowel grafts could be eff

7、ectively preserved for 10 h by the LR and HC-A, and for 18 h by EC and WMO-1 solutions.【Key words】Intestine, smallOrgan preservationTissue survival本研究通過對比4種保存液保存小腸的效果，從中篩選出適合臨床小腸移植要求的保存液。材料與方法一、實驗動物：白色雜種豬，體重18.522.5 kg，雌雄不限，術(shù)前24小時禁食，自由飲水。二、手術(shù)方法及供腸保存方法：采用自體節(jié)段性小腸移植模型，解剖出供應(yīng)回腸末端的腸系膜動、靜脈，切除待移植的小腸及血管，動脈插管

8、，用4保存液灌洗，灌洗壓力為75.6 mmHg，灌洗時間20分鐘，用液量400500 ml。以5 g/L的甲硝唑溶液灌洗腸腔。經(jīng)上述處理的離體小腸置入不同的保存液中，按設(shè)計要求的時間保存后行自體移植。移植小腸為末端回腸，長約200 cm，行腹壁Thiry-Vella造口。三、保存液及實驗分組：選用的4種液體為乳酸林格(LR)液、Euro-Collins(EC)液、高滲枸櫞酸嘌呤(HC-A)液和武漢醫(yī)學(xué)院器官1 號(WMO-1)液1。LR液、EC液、WMO-1液根據(jù)配方由本院制劑中心配制，HC-A液由上海市中心血站提供。實驗分組見表1。四、觀察指標(biāo)：觀察移植術(shù)后3周受體的存活率。移植術(shù)后自腸造口

9、在內(nèi)鏡直視下采取腸粘膜，行常規(guī)病理組織學(xué)檢查。采用高壓液相色譜法測定腸粘膜內(nèi)的磷酸腺苷含量(ATP，ADP，AMP)，計算磷酸腺苷總量(TAN)，TAN=ATP+ADP+AMP。腸粘膜Na+-K+ATP酶的活性測定采用Zemelman法。表1實驗分組及移植術(shù)后3周受體生存率組別保存10小時保存18小時保存24小時生存率生存率生存率LR液組5/5(100%)3/6(60%)0/5(0%)*EC液組5/5(100%)5/5(100%)4/5(80%)HC-A液組5/5(100%)4/5(80%)1/5(20%)WMO-1液組5/5(100%)5/5(100%)4/5(80%)  

10、;   注：*與EC液組和WMO-1液組相比，P0.05 表2腸粘膜Na+-K+ATP酶活性(mol.mg-1.h-1)組別正常小腸保存10小時保存18小時保存24小時保存后術(shù)后0.5小時保存后術(shù)后0.5小時保存后術(shù)后0.5小時LR液組15.15±3.7112.30±2.478.29±2.0913.74±3.455.79±1.511.29±2.591.15±0.47*EC液組16.16±2.5813.96±1.459.23±3.4713.81±2.956.89

11、77;2.6212.34±3.494.27±1.34HC-A液組14.74±1.8615.30±3.729.79±2.1512.46±1.785.79±1.6911.95±2.962.92±1.39*WMO-1液組13.49±3.9212.46±3.079.34±1.2912.29±3.456.03±1.2712.34±2.455.06±1.27     注：*與EC液組和WMO-1液組相比，P0

12、.05；*與EC液組和WMO-1液組相比，P0.01 結(jié)果有6只動物因血管吻合失敗而摒除在研究之外，每組實驗觀察動物數(shù)均為5只。移植術(shù)后3周受體的存活率見表1，術(shù)后存活率為100%的最長有效保存時間，LR液，HC-A液為10小時，EC液組、WMO-1液為18小時。小腸保存10小時，各組小腸移植術(shù)后組織結(jié)構(gòu)均能恢復(fù)正常。LR液、HC-A液保存18小時后移植，術(shù)后3周移植小腸的粘膜結(jié)構(gòu)不能恢復(fù)正常，而EC液、WMO-1液組的小腸粘膜結(jié)構(gòu)正常。保存24小時后移植，各組移植小腸的組織結(jié)構(gòu)均不能恢復(fù)正常。LR液保存10小時的腸粘膜內(nèi)ATP、TAN的含量分別為(0.89±0.09) nmol/克

13、濕組織和(1.56±0.05) nmol/克濕組織，僅為正常小腸粘膜的52.7%和70.3%(P0.05)；EC液、WMO-1液和HC-A液組的ATP、TAN含量與LR液組相近。LR液保存24小時后，腸粘膜的ATP、TAN含量分別為正常小腸的7.7%和14.0%(P0.01)，而EC液組的ATP、TAN含量分別為LR液組的315.4%和216.3%(P0.01)，HC-A液組為LR液組的107.7%和103.2%(P0.05)，WMO-1液組為LR液組的307.7%和271.0%(P0.01)。低溫保存后小腸粘膜的Na+-K+ATP酶活性與正常小腸無差異，再灌注后則明顯降低，保存24

14、小時后再灌注0.5小時，EC液和WMO-1液組的腸粘膜液中Na+-K+ATP酶活性是LR液組的371.3%和440.0%(P0.01)，是HC-A液組的146.2%和173.3%(P0.05)，見表2。討論低溫保存器官的能量物質(zhì)含量與移植器官的生存能力呈正相關(guān)，本研究也表明腸粘膜的ATP、TAN含量與移植小腸的活力密切相關(guān)。有報道器官低溫保存后其Na+-K+ATP酶活性降低，但本研究結(jié)果表明低溫保存時腸粘膜Na+-K+ATP酶活性與正常小腸相似，而移植術(shù)后0.5小時腸粘膜的Na+-K+ATP酶活性明顯降低，與Helou等2的研究結(jié)果相同，其原因可能是由于腸粘膜Na+-K+ATP酶主要位于絨毛尖

15、端，再灌注時隨著絨毛的壞死脫落，Na+-K+ATP酶活性降低。Todo等的動物實驗表明，UW液保存24小時的小腸組織損傷較LR液、EC液保存小腸為重，花生四烯酸和自由基生成較多3，本研究采用豬為實驗對象，結(jié)果表明，保存10小時，LR液，HC-A液、EC液和WMO-1液的效果相似，而保存時間超過18小時時，LR液和HC-A液的保存效果不如EC液和WMO-1液。WMO-1液含有能量物質(zhì)(ATP)及微量的Ca2+，研制者認(rèn)為ATP可以為保存器官提供能量，微量鈣具有穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用1。本研究的結(jié)果表明，用WMO-1液保存小腸，其粘膜的ATP及TAN含量并不高于EC液組，可能與外源性ATP不能為組織直接

16、利用有關(guān)，這是由于外源性ATP以ATP形式給入不易為組織細(xì)胞所攝取。新研制的保存液(如UW液)均不含有Ca2+，這是由于Ca2+參與細(xì)胞缺血再灌注損傷，WMO-1液中Ca2+能否穩(wěn)定細(xì)胞膜尚需探討。EC液保存小腸組織損傷較輕，保存小腸24小時，腸粘膜的ATP、TAN含量顯著高于LR液和HC-A液。以EC液保存小腸18小時后移植，術(shù)后3周動物的存活率為100%，若將保存時間延長至24小時，則術(shù)后的存活率降至80%。EC液和WMO-1液保存的小腸，其粘膜的Na+-K+ATP酶的活性和ATP、TAN的含量無差異。本課題為國家自然科學(xué)基金資助項目作者單位：李幼生黎介壽李寧江志偉趙允召李南云劉放南210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院全軍普通外科研究所參考文獻(xiàn)1顧湘君，朱文慧，汪素蘭，等. 自制WMO-1號液保存狗腎48、72小時的實驗研究. 中華器官移植雜志，1984，5：15-17.2Helou C, Seguo AC, Dos S, et al. Evaluation of human kidney viability during cold storage. Renal Fail, 1993, 15:85-