梨輪紋病生防菌株的篩選及其防治作用的研究

1、梨輪紋病生防菌株的篩選及其防治作用的研究    英文題名 Screening of Biocontrol Strain and Study of the Control Effect on Pear Ring Rot  關(guān)鍵詞 梨輪紋病; 拮抗細(xì)菌; 16SrDNA分子鑒定; 生物防治; 枯草芽孢桿菌; 英文關(guān)鍵詞 pear ring rot; antagonistic strains; sequence anlaysis of 16SrDNA; biological control; Bacillus subtilis; 中文摘要 梨輪紋病在

2、我國(guó)大部分梨果產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生危害,利用生物防治控制梨輪紋病能有效減少化學(xué)藥劑的使用數(shù)量和緩解病菌的抗藥性,本文以梨輪紋病為靶標(biāo)病原菌,開(kāi)展了如下研究?jī)?nèi)容： 從南京、高郵和儀征3地梨園分別采集梨樹(shù)根際土壤、病果、病葉和健葉樣品共60份,通過(guò)系列稀釋分離法,平板培養(yǎng)獲得527個(gè)細(xì)菌分離物。以梨輪紋病菌(Pnysalospora pinicola Nose)為指示菌,采用平板對(duì)峙法初篩獲得24個(gè)對(duì)梨輪紋病菌有較強(qiáng)拮抗作用的細(xì)菌分離物,其抑菌帶寬大于10mm,并且菌抑制效果穩(wěn)定.選取平板試驗(yàn)中拮抗帶寬大于6mm的132株細(xì)菌進(jìn)行室內(nèi)梨果的活體生防試驗(yàn),結(jié)果表明：在24株平板抑制效果較強(qiáng)的菌株中有18株防

3、效在40%以上,6株防效為20%-40%；108株抑制效果中等的菌株中有3株的防效在40%以上,100株為20%-40%,5株的防效在20%以下。 結(jié)合生理生化試驗(yàn)和16SrDNA分子測(cè)定,對(duì)室內(nèi)梨果活體試驗(yàn)中防治效果在40%以上的21株拮抗細(xì)菌進(jìn)行鑒定。通過(guò)形態(tài)觀察、生理生化測(cè)定結(jié)果表明：它們是革蘭氏陽(yáng)性桿菌,有芽孢,屬于芽孢桿菌屬。16SrDNA分子測(cè)序結(jié)果表明：它們與枯草芽孢桿菌模式菌株的. 英文摘要 Pear ring rot is an important plant disease which has occurred in most areas in China. The use

4、 of biological control can effectively reduce the use of chemicals agents and relief the resistance of pathogenic. The studies carried out as follows, Sixty samples were collected from soil, diseased  摘要 7-8 ABSTRACT 8-9 上篇 文獻(xiàn)綜述 10-29     第一章 梨輪紋病概述及其研究進(jìn)展 11-17    

5、     1 梨輪紋病的發(fā)生和危害 11         2 病害癥狀 11-12             2.1 枝干癥狀 11-12             2.2 果實(shí)癥狀 12        

6、     2.3 葉片癥狀 12         3 梨輪紋病的病原真菌 12         4 梨輪紋病病原真菌的生物學(xué)特性 12-13             4.1 菌絲生長(zhǎng)和分生孢子器形成條件 13         &#

7、160;   4.2 孢子萌發(fā)對(duì)溫度和水分的要求條件 13         5 梨輪紋病的發(fā)病規(guī)律 13-15             5.1 侵染來(lái)源 13             5.2 傳播和擴(kuò)散 13       

8、0;     5.3 侵染枝干的過(guò)程和發(fā)病誘因 13-14             5.4 侵染果實(shí)的過(guò)程和果腐流行因素 14             5.5 梨輪紋病的流行 14-15         6 梨輪紋病的防治 15-17    

9、;         6.1 加強(qiáng)栽培管理 15             6.2 清除菌源 15             6.3 藥劑防治 15-17     第二章 生物防治在植物病害防治中的應(yīng)用 17-24      

10、   1 生物防治的重要性 17         2 生物防治在植物病害防治中的應(yīng)用 17-24             2.1 生防細(xì)菌的開(kāi)發(fā)利用 18-21                 2.1.1 芽孢桿菌(Bacillus) 18-20 &

11、#160;               2.1.2 假單胞菌(Pseudomonas) 20                 2.1.3 放射性土壤桿菌(Agrobacterium) 20-21          

12、60;  2.2 生防放線菌的開(kāi)發(fā)利用 21-22             2.3 生防真菌的開(kāi)發(fā)利用 22-24     第三章 芽孢桿菌生防機(jī)理的研究以及微生物化學(xué)藥劑協(xié)同控病技術(shù) 24-29         1 芽孢桿菌的生防機(jī)理 24-27            

13、; 1.1 抗生作用 24-25             1.2 溶菌作用 25             1.3 空間和營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng) 25-26             1.4 誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性 26-27      

14、60;  2 微生物化學(xué)協(xié)同控制病害 27-29 下篇研究?jī)?nèi)容 29-62     第一章 梨輪紋病拮抗細(xì)菌的分離純化和室內(nèi)拮抗試驗(yàn) 31-37         1 材料和方法 32-37             1.1 材料 32             &

15、#160;   1.1.1 樣品 32                 1.1.2 病原菌 32                 1.1.3 培養(yǎng)基 32           &#

16、160; 1.2 方法 32-33                 1.2.1 樣品的采集 32                 1.2.2 細(xì)菌的分離純化 32-33            

17、;     1.2.3 篩選指標(biāo)的確定 33                 1.2.4 拮抗細(xì)菌的篩選 33             2 結(jié)果與分析 33-35            &#

18、160;    2.1 分離結(jié)果的分析 33                 2.2 篩選結(jié)果 33-34                 2.3 篩選結(jié)果的分析 34-35         

19、;    3 討論 35-37     第二章 拮抗細(xì)菌對(duì)輪紋病菌在梨活體上危害的控制作用 37-42         1 材料與方法 38-42             1.1 材料 38               

20、  1.1.1 供試?yán)嫫贩N 38                 1.1.2 供試菌株 38                 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 38             1

21、.2 方法 38-39                 1.2.1 接種梨輪紋病菌 38                 1.2.2 接種拮抗細(xì)菌 38             &

22、#160;   1.2.3 梨果的保存 38                 1.2.4 測(cè)定方法 38-39             2 結(jié)果與分析 39-41              

23、   2.1 對(duì)室內(nèi)梨活體生防試驗(yàn)和平板拮抗試驗(yàn)結(jié)果的分析 39-40                 2.2 對(duì)始病時(shí)間的分析 40                 2.3 對(duì)病斑直徑和腐爛率的分析 40-41      

24、60;      3 討論 41-42     第三章 梨輪紋病拮抗細(xì)菌的分類鑒定 42-52         1 材料和方法 42-47             1.1 材料 43-44             

25、60;   1.1.1 供試菌株 43                 1.1.2 生理生化測(cè)定試劑 43                 1.1.3 DNA提取試劑 43          

26、;       1.1.4 瓊脂糖凝膠電泳試劑 43-44                 1.1.5 培養(yǎng)基及培養(yǎng)液 44             1.2 方法 44-47         

27、0;       1.2.1 形態(tài)及生理生化測(cè)定 44-45                 1.2.2 基因組DNA的提取 45-46                 1.2.3 PCR擴(kuò)增16SrDNA序列 46-47  &#

28、160;              1.2.4 DNA濃度的確定 47                 1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47         2 結(jié)果 47-50      

29、       2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47             2.2 生理生化特征 47-48             2.3 拮抗細(xì)菌Nt4的16SrDNA全序列結(jié)果 48-49           

30、0; 2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62         1 材料與方法 53-57             1.1 材料 53-55     

31、60;           1.1.1 供試?yán)婀贩N 53                 1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54                 1.1.3 供試?yán)孑喖y病致病菌

32、菌株 54                 1.1.4 供試生防菌菌株 54                 1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 54              

33、60;  1.1.6 菌粉的制備 54                 1.1.7 懸浮液的制備 54                 1.1.8 復(fù)配劑的制備 54           &

34、#160;     1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55             1.2 方法 55-57                 1.2.1 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56        

35、         1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57         2 結(jié)果與分析 57-60             2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-58             2.2 不同梨

36、品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59             2.3 田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果 59-60         3 討論 60-62 參考文獻(xiàn) 62-73                 1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47  &

37、#160;      2 結(jié)果 47-50             2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47             2.2 生理生化特征 47-48             2.3 拮抗細(xì)菌Nt4的16SrDN

38、A全序列結(jié)果 48-49             2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62         1 材料與方法 53-57      

39、       1.1 材料 53-55                 1.1.1 供試?yán)婀贩N 53                 1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54      

40、;           1.1.3 供試?yán)孑喖y病致病菌菌株 54                 1.1.4 供試生防菌菌株 54                 1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 54 

41、0;               1.1.6 菌粉的制備 54                 1.1.7 懸浮液的制備 54                

42、1.1.8 復(fù)配劑的制備 54                 1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55             1.2 方法 55-57                 1.2.1

43、 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56                 1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57         2 結(jié)果與分析 57-60             2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-

44、58             2.2 不同梨品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59             2.3 田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果 59-60         3 討論 60-62 參考文獻(xiàn) 62-73        

45、60;        1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47         2 結(jié)果 47-50             2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47             2.2 生理生化特征 47-48  &#

46、160;          2.3 拮抗細(xì)菌Nt4的16SrDNA全序列結(jié)果 48-49             2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62  

47、0;      1 材料與方法 53-57             1.1 材料 53-55                 1.1.1 供試?yán)婀贩N 53            

48、     1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54                 1.1.3 供試?yán)孑喖y病致病菌菌株 54                 1.1.4 供試生防菌菌株 54      &#

49、160;          1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 54                 1.1.6 菌粉的制備 54                 1.1.7 懸浮液的制備 54   &#

50、160;             1.1.8 復(fù)配劑的制備 54                 1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55             1.2 方法 55-57    &

51、#160;            1.2.1 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56                 1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57         2 結(jié)果與分析 57-60    &

52、#160;        2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-58             2.2 不同梨品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59             2.3 田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果 59-60      

53、60;  3 討論 60-62 參考文獻(xiàn) 62-73                 1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47         2 結(jié)果 47-50             2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47   

54、60;         2.2 生理生化特征 47-48             2.3 拮抗細(xì)菌Nt4的16SrDNA全序列結(jié)果 48-49             2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論

55、 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62         1 材料與方法 53-57             1.1 材料 53-55                 1.1.1

56、 供試?yán)婀贩N 53                 1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54                 1.1.3 供試?yán)孑喖y病致病菌菌株 54           

57、60;     1.1.4 供試生防菌菌株 54                 1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 54                 1.1.6 菌粉的制備 54        &#

58、160;        1.1.7 懸浮液的制備 54                 1.1.8 復(fù)配劑的制備 54                 1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55    

59、0;        1.2 方法 55-57                 1.2.1 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56                 1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57

60、         2 結(jié)果與分析 57-60             2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-58             2.2 不同梨品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59        

61、     2.3 田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果 59-60         3 討論 60-62 參考文獻(xiàn) 62-73                 1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47         2 結(jié)果 47-50    

62、0;        2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47             2.2 生理生化特征 47-48             2.3 拮抗細(xì)菌Nt4的16SrDNA全序列結(jié)果 48-49          &#

63、160;  2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62         1 材料與方法 53-57             1.1 材料 53-55    &

64、#160;            1.1.1 供試?yán)婀贩N 53                 1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54                 1.1.3 供

65、試?yán)孑喖y病致病菌菌株 54                 1.1.4 供試生防菌菌株 54                 1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 54             &

66、#160;   1.1.6 菌粉的制備 54                 1.1.7 懸浮液的制備 54                 1.1.8 復(fù)配劑的制備 54          

67、;       1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55             1.2 方法 55-57                 1.2.1 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56      

68、0;          1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57         2 結(jié)果與分析 57-60             2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-58            

69、 2.2 不同梨品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59             2.3 田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果 59-60         3 討論 60-62 參考文獻(xiàn) 62-73                 1.2.5 16SrDNA序列測(cè)定及分析 47

70、         2 結(jié)果 47-50             2.1 培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征 47             2.2 生理生化特征 47-48             2.3 拮抗細(xì)菌Nt

71、4的16SrDNA全序列結(jié)果 48-49             2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建 49-50         3 討論 50-52     第四章 不同梨果品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作以及田間小區(qū)試驗(yàn) 52-62         1 材料與方法 53-57    

72、0;        1.1 材料 53-55                 1.1.1 供試?yán)婀贩N 53                 1.1.2 供試田間試驗(yàn)梨樹(shù)品種 53-54    

73、60;            1.1.3 供試?yán)孑喖y病致病菌菌株 54                 1.1.4 供試生防菌菌株 54                 1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器

74、 54                 1.1.6 菌粉的制備 54                 1.1.7 懸浮液的制備 54               

75、;  1.1.8 復(fù)配劑的制備 54                 1.1.9 噴藥時(shí)間 54-55             1.2 方法 55-57               

76、0; 1.2.1 室內(nèi)不同梨品種、輪紋病菌以及芽孢桿菌之間的互作處理方法 55-56                 1.2.2 田間小區(qū)試驗(yàn)方法 56-57         2 結(jié)果與分析 57-60             2.1 不同梨品種與不同生防拮抗菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 57-58             2.2 不同梨品種與不同梨輪紋致病真菌間的互作反應(yīng)結(jié)果 58-59             2.3 田間小