通脈活血靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)

1、通脈活血靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)作者：郝娜， 李蘭芳， 張勤增， 張建武， 薛寶娟【關(guān)鍵詞】 丹參酮A；,高效液相色譜；,丹參；,大黃；,槐米；,制首烏；,薄層色譜摘要：目的建立通脈活血靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法建立丹參、槐米、大黃、制首烏的薄層鑒別方法和丹參酮A的含量測(cè)定方法。結(jié)果在薄層(TLC)色譜中檢出丹參、槐米、大黃、制首烏，陰性對(duì)照無(wú)干擾。丹參酮A的線(xiàn)性范圍為0.080 50.402 4 g（r = 0.999 8），平均回收率為101.00%，RSD=1.43%。結(jié)論 定性定量方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，能有效地控制該制劑的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：丹參酮A； 高效液相色譜； 丹參； 大

2、黃； 槐米； 制首烏； 薄層色譜Study on Quality Standard for Tongmai Huoxue Ling Capsules Abstract：ObjectiveThe quality standard for Tongmai Huoxueling capsules were studiedMethodsThe TLC method for identification of Przewalsk Sage Root，Rhubarb，Pagodatree Flower Bud ，F(xiàn)leeceflower Root in these capsules were establ

3、ishedThe tanshinoneA was determined by HPLCResultsPrzewalsk Sage Root， Rhubarb，Pagodatree Flower Bud ，F(xiàn)leeceflower Root could be detected by TLCTanshinoneA showed a linear relationship at the concentration range of 0.080 50.402 4 g(r=0.999 8)The average recovery was 101.00% with RSD=1.43%(n=3)Conclu

4、sionThis method is suitable for the quality control of Compound Tongmai Huoxueling CapsulesKey words：TanshinoneA； HPLC ； Przewalsk Sage Root ； Rhubarb ； Pagodatree Flower Bud ； Fleece flower Root； TLC 通脈活血靈膠囊由丹參、槐米、大黃、制首烏等藥材組成，功能為溫經(jīng)通絡(luò)，活血化瘀。藥理實(shí)驗(yàn)證明具有降低血液粘度，調(diào)節(jié)血脂預(yù)防動(dòng)脈硬化的功效13。在臨床上用于治療高粘血癥有很好的療效4。為了有效地控制其質(zhì)

5、量，我們對(duì)丹參、槐米、大黃、制首烏等進(jìn)行薄層色譜鑒別。處方中丹參為君藥，丹參酮A是通脈活血靈膠囊的主要有效成分之一。本研究在定性鑒別的基礎(chǔ)上，用HPLC法 測(cè)定通脈活血靈膠囊中丹參酮A含量。1 器材1.1 儀器 Aglient 1100 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；UV2100分光光度計(jì)（日本島津）；KQ250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化化工廠）；勻漿器（貝爾德儀器技術(shù)廠）；939薄層制板器（重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）；硅膠G（青島海洋化工廠，化學(xué)純，批號(hào)：81852500）。1.2 藥材丹參酮A（批號(hào)：766200213）、蘆丁（批號(hào)：1

6、00080200306）、丹參對(duì)照藥材、大黃對(duì)照藥材、制首烏對(duì)照藥材均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；通脈活血靈膠囊（河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究室研制）。 2 方法與結(jié)果2.1 定性鑒別2.1.1 丹參鑒別 取通脈活血靈膠囊內(nèi)容物2.5 g，丹參對(duì)照藥材2 g，丹參的陰性提取物2.5 g，分別加入10 ml乙醚，置于具塞試管中振搖，放置1 h，濾過(guò)，濾液水浴揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴? ml使溶解，作為供試品溶液，丹參對(duì)照藥材溶液，丹參陰性供試品溶液。取丹參酮A對(duì)照品加入醋酸乙酯，制成2 mg/ml的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法5實(shí)驗(yàn)。吸取上述4種溶液10 l分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以苯醋酸乙酯（191）為

7、展開(kāi)劑，展距10 cm，取出晾干，日光下檢視，通脈活血靈膠囊供試品色譜與對(duì)照藥材色譜、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同色度的橙紅色斑點(diǎn)，而丹參陰性供試品在相應(yīng)的位置無(wú)此斑點(diǎn)，以此鑒別丹參見(jiàn)圖1。1.陰性對(duì)照 2.丹參對(duì)照藥材 3.樣品溶液 4.丹參酮A 圖1 丹參薄層色譜圖 （略）2.1.2 槐米鑒別 取通脈活血靈膠囊內(nèi)容物2.5 g，槐米的陰性提取物2.5 g，分別加入甲醇50 ml，密塞，超聲提?。?0，30 min，功率80Hz），取出，放冷，濾過(guò)，濾液用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀真空減壓濃縮至干，再分別加入5 ml甲醇溶解，即得供試品溶液，槐米陰性供試品溶液。取蘆丁對(duì)照品加入甲醇，制成0.2 mg/

8、ml的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法5實(shí)驗(yàn)吸取上述3種溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯甲酸水(811)為展開(kāi)劑，展距10 cm，取出，晾干，置于碘蒸氣中熏1 min后取出6。在日光下檢視，通脈活血靈膠囊供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同色度的棕黃色斑點(diǎn)，而槐米陰性供試品在相應(yīng)的位置無(wú)此斑點(diǎn)，以此鑒別槐米見(jiàn)圖2。2.1.3 制首烏及大黃鑒別 取通脈活血靈膠囊內(nèi)容物2.5 g，大黃對(duì)照藥材2 g，大黃的陰性提取物2.5 g，制首烏的陰性提取物2.5 g，分別加甲醇40 ml，浸漬1 h，濾過(guò)，取濾液5 ml，加水10 ml混勻，加鹽酸1 ml，置水浴上加熱30 min，立即

9、冷卻，加入乙醚20 ml提取2次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确? ml使溶解，作為通脈活血靈膠囊供試品溶液，大黃對(duì)照藥材溶液，大黃陰性供試品溶液，制首烏陰性供試品溶液。取制首烏對(duì)照藥材2 g，用95乙醇50 ml超聲提?。?0，30 min，功率80 Hz），濾過(guò)，濾液濃縮至3 ml，作為制首烏對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法5實(shí)驗(yàn)。吸取上述5種溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（1551）的上層液為展開(kāi)劑，展距15 cm，取出晾干，以于紫外365 nm熒光燈下檢視，通脈活血靈膠囊供試品色譜與大黃對(duì)照藥材色譜比較在藍(lán)色背景下顯相同色度的5個(gè)橙黃色斑點(diǎn)，而大黃

10、陰性供試品在相應(yīng)的位置無(wú)此斑點(diǎn)；與制首烏對(duì)照藥材色譜比較在藍(lán)色背景下相應(yīng)位置顯相同色度的2個(gè)橙黃色斑點(diǎn)，而制首烏陰性供試品在相應(yīng)的位置無(wú)此斑點(diǎn)，以此同時(shí)鑒別大黃和制首烏見(jiàn)圖3。1.陰性對(duì)照 2.樣品溶液 3.蘆丁對(duì)照品圖2 蘆丁薄層色譜圖 （略） 1.大黃陰性對(duì)照 2樣品溶液 3 .大黃對(duì)照藥材4.制首烏對(duì)照藥材 5.大黃酚對(duì)照品 6.大黃素對(duì)照品圖3 大黃、制首烏薄層色譜圖 （略） 2.2 丹參酮A的含量測(cè)定2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)7,8色譜柱：SBC18（250 mm 4.6 mm，5m）；流動(dòng)相：甲醇水（82）；使用前以0.45 m微孔濾膜減壓濾過(guò)，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；流

11、速：0.8 ml/min；柱溫：30；理論塔板數(shù)按丹參酮A峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。2.2.2 供試品溶液制備9,10取通脈活血靈膠囊內(nèi)容物1 g，精密稱(chēng)定，置具塞椎形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取25 min，放冷，密塞，再稱(chēng)定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心10 min，取上清液，過(guò)0.45 m微孔濾膜，棄去初濾液取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.2.3 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取丹參酮A對(duì)照品10 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密吸取上述溶液5 ml至25 ml棕色容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻。即得濃度為0.04 mg/ml的

12、丹參酮A對(duì)照品溶液。2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察依次吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液2，4，6，8，10 l進(jìn)樣，以丹參酮A進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積的積分值（Y）為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y= 455 1.3X+ 9.030 3（r = 0.999 8）。結(jié)果表明，丹參酮A在0.080 50.402 4 g線(xiàn)性關(guān)系良好。2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密量取0.04 mg/ml的丹參酮A對(duì)照品溶液5l注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積，RSD=1.53%。2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取0.04 mg/ml的丹參酮A對(duì)照品溶液5 l注入液相色譜儀，分別于0，6，12，24，36 h測(cè)定其峰面積，RSD=1.50

13、%(n=6)。2.2.7 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 取定性鑒別用的丹參酮A陰性供試品，丹參酮A對(duì)照品，取通脈活血靈膠囊供試品，按3.1色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，丹參酮A陰性供試品在丹參酮A保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾峰出現(xiàn)（圖4）。*丹參酮A a丹參酮A對(duì)照品 b通脈活血靈膠囊 c陰性對(duì)照?qǐng)D4 HPLC圖譜（略）2.2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知丹參酮A含量的20040202樣品共6份，準(zhǔn)確加入已知量丹參酮A對(duì)照品，依3.2方法操作并測(cè)定丹參酮A含量，丹參酮A的平均回收率為101.00%，RSD=1.43%(n=6)，表明本法具有良好的回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 回收率測(cè)定結(jié)果（略）2.2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取同

14、一批號(hào)通脈活血靈膠囊6份，按3.2中方法操作，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，測(cè)定丹參酮A的平均含量為0.1938 mg/g，RSD=0.82%(n=6)。2.2.10 樣品測(cè)定取3個(gè)批次通脈活血靈膠囊1 g，精密稱(chēng)定，按3.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣5l測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中丹參酮A的含量，測(cè)得3批樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）3 討論 在槐米TLC鑒別中，我們對(duì)中國(guó)藥典2000版的顯色方法進(jìn)行了改進(jìn)，用碘蒸氣替代三氯化鋁顯色，顯色后蘆丁斑點(diǎn)顏色在24 h內(nèi)穩(wěn)定，顯色效果好。大黃和首烏均為蓼科植物，均含蒽醌類(lèi)化學(xué)成分造成對(duì)大黃或首烏薄層鑒別的干擾，將它們一起進(jìn)行鑒別，陰性無(wú)干擾，結(jié)果穩(wěn)

15、定，重復(fù)性好。丹參酮A對(duì)光、熱敏感，易分解變質(zhì)，丹參超聲提取時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)9，制備過(guò)程中超聲25 min提取即可代替操作繁復(fù)的回流提取測(cè)定法。樣品應(yīng)置于棕色量瓶中，在冰箱中保存。用本法測(cè)定通脈活血靈中丹參酮A的含量，丹參酮A在0.080 50.402 4 g范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系，回歸方程為：Y = 455 1.3X+ 9.030 3，r=0.999 8，平均回收率為101.00%，RSD=1.43%。本研究對(duì)丹參、槐米、大黃、制首烏進(jìn)行薄層色譜鑒別，用HPLC法測(cè)定通脈活血靈膠囊中丹參酮A含量，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為質(zhì)量控制方法。參考文獻(xiàn)：1 李蘭芳，劉赤萍，蘭漫野，等.通脈活血靈膠囊對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的影響J.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999，15（1）:19.2 李蘭芳，張建新，蘭漫野.通脈活血靈膠囊的實(shí)驗(yàn)藥效學(xué)研究J.山西中醫(yī)，15（5）:40.3 李蘭芳，陳靈燕，張建新.通脈活血靈膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥家兔血脂及動(dòng)脈粥樣硬化的影響J.中草藥 ，2000，31（6）:440.4 高福來(lái)，袁曙光，李蘭芳.通脈活血靈治療高粘血癥75例療效觀察J.河北中醫(yī)，1994，16（6）:26.5 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：附錄VIB.6 錢(qián)彥叢，