實(shí)驗(yàn)二-葉綠體中色素的提取和分離

1、葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握提取和分離葉綠體色素的方法，探究葉綠體中掌握提取和分離葉綠體色素的方法，探究葉綠體中色素的種類(lèi)。色素的種類(lèi)。實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離新鮮的綠色葉片新鮮的綠色葉片( (如菠菜葉片如菠菜葉片) )。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 葉綠體中含有兩大類(lèi)色素（葉綠素和類(lèi)胡葉綠體中含有兩大類(lèi)色素（葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素），它們?nèi)苡谟袡C(jī)溶劑，因此可選用蘿卜素），它們?nèi)苡谟袡C(jī)溶劑，因此可選用乙醇或丙酮進(jìn)行提取。乙醇或丙酮進(jìn)行提取。 層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑，層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑，葉葉綠體內(nèi)的色素在層

2、析液中的溶解度各不相同綠體內(nèi)的色素在層析液中的溶解度各不相同，溶解度越高，在濾紙上的擴(kuò)散速度越快，反溶解度越高，在濾紙上的擴(kuò)散速度越快，反之則慢，可以將葉綠體中的色素分離開(kāi)來(lái)。之則慢，可以將葉綠體中的色素分離開(kāi)來(lái)。因此采用因此采用紙層析法紙層析法進(jìn)行分離。進(jìn)行分離。葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離 實(shí)驗(yàn)材料用具： 1、材料：新鮮的綠色葉片(如菠菜葉片)。 2、儀器：干燥的定性濾紙，燒杯(100mL)，研缽 玻璃漏斗，尼龍布（或棉花），毛細(xì)吸管，剪刀，小試管，培養(yǎng)皿蓋，藥勺，量筒(10mL)，天平，鑷子，鉛筆，尺子。 3、藥品：丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程： 1、提

3、取葉綠素的步驟 ：（1）稱(chēng)：用天平稱(chēng)量5g除去葉柄的葉片（2）剪：越細(xì)越好，盡量去除葉脈等部分（3）加藥品：加少量二氧化硅，碳酸鈣和丙酮（約5mL）快速充分研磨。（4）磨：研磨要領(lǐng)是要用力壓快速研磨。（5）過(guò)濾：用紗布（或棉花）、漏斗和試管，最后提取液置于試管中待用，及時(shí)用棉塞（或塞子）將試管塞嚴(yán) . 1、約5克的菠菜緑葉，剪碎，放入研缽中。2、研缽中加入少許二氧化硅和碳酸鈣，再加入10mL無(wú)水乙醇。3、迅速研磨。 4、將研磨液迅速倒入玻璃漏斗中進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾液收集到燒杯或試管中。2、分離色素的步驟 制備濾紙條：將預(yù)備在試驗(yàn)桌上的濾紙條一端剪去兩個(gè)角作標(biāo)記，在距離這一端1cm處用鉛筆畫(huà)一條細(xì)

4、的橫線。畫(huà)濾液細(xì)線：沿鉛筆線輕輕均勻地畫(huà)一道線，每次劃完盡量吹干，用提取液反復(fù)劃好幾次，不要弄破紙條。層析分離葉綠體中的色素：將3mL層析液倒入燒杯中，注意將紙條畫(huà)有濾液細(xì)線的一端置于燒杯中的層析液中，注意注意千萬(wàn)不要將濾液細(xì)線浸沒(méi)在層析液中。 （干燥后）觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 四條色素帶，顏色從上往下分別是橙黃色、黃色、藍(lán)綠色和黃綠色，四種色素分別是胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b葉綠體中色素的提取和分離葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果問(wèn)題討論： 1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？ 2、 將濾液放在試管中，為什么要及時(shí)用棉塞將試管塞嚴(yán)？3、 畫(huà)濾液細(xì)線時(shí)重復(fù)畫(huà)幾次的目的是什么？

5、1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？ 二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速；碳酸鈣的作用是保護(hù)葉綠素不分解 2、 將濾液放在試管中，為什么要及時(shí)用棉塞將試管塞嚴(yán)？ 濾液含有丙酮，丙酮有毒，防止揮發(fā) 3、 畫(huà)濾液細(xì)線時(shí)重復(fù)畫(huà)幾次的目的是什么？ 增加色素的含量，使分離后的色素帶更加清晰問(wèn)題討論： 問(wèn)題討論： 4. 為什么不能讓濾液細(xì)線觸及層析液？ 5.觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果有什么現(xiàn)象？濾紙條上出現(xiàn)了幾條色素帶？每條色素帶的顏色和排序如何？ 。 問(wèn)題討論： 4. 為什么不能讓濾液細(xì)線觸及層析液？ 層析液會(huì)溶解色素使色素?zé)o法分離；5.觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果有什么現(xiàn)象？濾紙條上出現(xiàn)了幾條色素帶？每條色素帶的顏色和排序

6、如何？ 濾紙條上將分離出四條色素帶，顏色從上往下分別是橙黃色、黃色、藍(lán)綠色和黃綠色，四種色素分別是胡蘿卜素（最快）、葉黃素、葉綠素a（最多）和葉綠素b（最慢）。 實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵:1.選材時(shí)應(yīng)注意選擇選材時(shí)應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠鮮嫩、色濃綠、無(wú)漿汁、無(wú)漿汁的葉片的葉片.(如菠菜葉如菠菜葉)2.畫(huà)濾液細(xì)線時(shí)應(yīng)以畫(huà)濾液細(xì)線時(shí)應(yīng)以細(xì)、齊、直細(xì)、齊、直為標(biāo)準(zhǔn)，重復(fù)為標(biāo)準(zhǔn)，重復(fù)畫(huà)線時(shí)必須等上次畫(huà)線干燥后再進(jìn)行，重畫(huà)線時(shí)必須等上次畫(huà)線干燥后再進(jìn)行，重復(fù)復(fù)2-3次。次。3.層析時(shí)不要讓濾液細(xì)線觸及層析液層析時(shí)不要讓濾液細(xì)線觸及層析液。 隨堂演練 ：1.通過(guò)紙層析分離葉綠體色素，結(jié)果在濾紙條上出現(xiàn)四條色素帶，從上到下

7、依次為（ ）A.胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素bB.胡蘿卜素、葉綠素a、葉綠素b、葉黃素C.葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素D.葉黃素、葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素 2.下列關(guān)于“葉綠體色素提取和分離”的實(shí)驗(yàn)描述中，不屬于實(shí)驗(yàn)要求的是 （ ）A.提取高等植物葉綠體中的色素 B.用紙層析法分離色素C.了解各種色素的吸收光譜 D.驗(yàn)證葉綠體中所含色素的種類(lèi) 3.用紙層析法將色素進(jìn)行分離,在濾紙條上出現(xiàn)的最窄的一條色素帶的顏色是 （ ）A.黃色 B.橙黃色 C.黃綠色 D.藍(lán)綠色 4.提取葉綠體中的色素時(shí)要加丙酮，其原因是 （ ） A.讓色素溶解 B.防止葉綠素被破壞 C.便于將葉片研磨成勻

8、漿 D.促使葉綠體中色素分離 5.在葉綠體色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，在濾紙條上擴(kuò)散速度最快的色素是（ ） A.葉綠素a B.葉綠素b C.胡蘿卜素 D.葉黃素能力提高練習(xí)： (1)在圓形濾紙的中央，點(diǎn)上葉綠體色素的提取液進(jìn)行層析，隨著層析液從濾紙的中央向四周擴(kuò)散，形成四個(gè)色素環(huán)帶，排在最里圈的色素是（ ） A.橙黃色 B.黃綠色 C.藍(lán)綠色 D.黃色 (2)在做“葉綠體中色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)時(shí)，向研缽中加入SiO2的目的是： ， 加入CaC03的目的是 在盛有層析液的燒杯上蓋上培養(yǎng)皿蓋的是 在濾紙條上擴(kuò)散速度最慢的色素帶是其顏色是 (3)某同學(xué)在做“葉綠體中色素的提取分離”實(shí)驗(yàn)時(shí)，操作情況如下所述，結(jié)果實(shí)驗(yàn)失敗，請(qǐng)指出其錯(cuò)誤所在: 將5克新鮮完整的菠菜葉，放在研缽中，加入丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。 (原因是沒(méi)有去除粗葉脈和將葉剪碎，這樣降低了葉綠素的提取率 ） 用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，