教學(xué)課件-培養(yǎng)基的制備與滅菌

1、培養(yǎng)基的制備和滅菌培養(yǎng)基的制備和滅菌 加熱滅菌加熱滅菌 干熱滅菌干熱滅菌 濕熱滅菌濕熱滅菌 過濾除菌過濾除菌 輻射滅菌輻射滅菌 放射線輻照滅菌放射線輻照滅菌 紫外線滅菌紫外線滅菌 化學(xué)藥品滅菌化學(xué)藥品滅菌滅菌方法v 干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。v 細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細胞內(nèi)含水量越大，則蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。v 因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160170），時間要長（12h），但干熱滅菌溫度不能超過但干熱滅菌溫度不能超過180180，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒

2、，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。干熱滅菌干熱滅菌v 高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能溢出，而增加了閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100100的溫度的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達

3、到滅菌的目的。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。 v 在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二是濕熱的穿透力比質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二是濕熱的穿透力比干熱大，三是濕熱的蒸氣有潛熱存在。這種潛熱，能迅速干熱大，三是濕熱的蒸氣有潛熱存在。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。濕熱滅菌濕熱滅菌因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨因為空氣的膨脹

4、壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸氣中含有空氣脹壓，所以，當(dāng)水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸氣的時，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。溫度低于飽和蒸氣的溫度。v一般培養(yǎng)基用0.1Mpa0.1Mpa，121.5,15121.5,1530min30min可達到可達到徹底滅菌的目的。徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。濕熱滅菌v不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細菌過濾器進行除菌。一般可用細菌過濾器進行除菌。過濾除菌v紫外線滅菌是用紫外線燈進行的。波長為紫外線滅菌是用

5、紫外線燈進行的。波長為200-200-300nm300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm260nm的殺菌的殺菌力最強力最強。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機理主要與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機理主要是因為它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和是因為它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNADNA鏈的鏈的交聯(lián)，從而交聯(lián)，從而抑制了抑制了DNADNA的復(fù)制的復(fù)制。另一方面，由于輻。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成射能使空氣中的氧電離成OO，再使，再使O O2 2氧化生成臭氧化生成臭氧

6、（氧（O O3 3）或使水（）或使水（H H2 2O O）氧化生成過氧化氫（）氧化生成過氧化氫（H H2 2O O2 2）。O O3 3和和H H2 2O O2 2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無菌室，接種箱，手術(shù)室內(nèi)的空氣及以，只適用于無菌室，接種箱，手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過1.2m1.2m為宜。為宜。紫外線滅菌v為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外燈以前；可為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外燈以前；可在無菌室內(nèi)在無菌室內(nèi)( (或接種箱內(nèi)或接種箱內(nèi)) )噴灑噴灑3%3%5%5%石炭酸溶液，石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細菌。無菌室內(nèi)的桌面、凳子面也可以殺死一部分細菌。無菌室內(nèi)的桌面、凳子可用可用2%2%3%3%的來蘇爾擦洗，然后再開紫外燈照射，的來蘇爾擦洗，然后再開紫外燈照射，即可增強殺菌效果，達到滅菌目的。即可增強殺菌效果，達到滅菌目的。紫外線滅菌紫外線滅菌v 微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、