實(shí)驗(yàn)四醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白

1、實(shí)驗(yàn)三 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解電泳技術(shù)的一般原理。、了解電泳技術(shù)的一般原理。2、掌握醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白的原理、掌握醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白的原理和方法。和方法。3、了解常用的蛋白分離的方法。、了解常用的蛋白分離的方法。實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳背景知識(shí)背景知識(shí) 電泳技術(shù)，是指在電場(chǎng)作用下，帶電顆粒在由于所帶的電荷不同以及分子大小差異而有不同的遷移行為從而彼此分離開(kāi)來(lái)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳帶電性質(zhì)決定帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的移動(dòng)速度。 v/E=(d/t)/(V/l)=(dl)/Vtl樣品本身

2、：帶電量，分子大小，形狀樣品本身：帶電量，分子大小，形狀l電場(chǎng)強(qiáng)度：電壓電場(chǎng)強(qiáng)度：電壓l緩沖液：成分，緩沖液：成分， pH ，離子強(qiáng)度，離子強(qiáng)度l支持介質(zhì)：電滲作用，吸附作用支持介質(zhì)：電滲作用，吸附作用l溫度溫度移動(dòng)方向：泳動(dòng)度：影響的因素：實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳l電泳技術(shù)主要用于分離各種有機(jī)物（如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、脂類、核苷酸、核酸等）和無(wú)機(jī)鹽；也可用于分析某種物質(zhì)純度，還可用于分子量的測(cè)定。l電泳技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳常見(jiàn)電泳類型常見(jiàn)電泳類型紙電泳薄膜電泳薄層電泳凝膠電泳等電點(diǎn)聚焦電泳掌握各個(gè)電泳的原理及優(yōu)缺點(diǎn)，進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)四

3、 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)原理 醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種 區(qū)帶電泳技術(shù)。醋酸纖維素薄膜是纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸 酯。該膜具有均一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，滲透性強(qiáng)，對(duì)分子移動(dòng)阻力小，厚度為120 m 。廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床中各種生物分子的分離分析中，如血清蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、類固醇及同工酶等。 作為區(qū)帶電泳的支持物，它具有操作簡(jiǎn)便、快速、樣品需要量少，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。不足之處是分辨率比聚丙烯酰胺凝膠電泳低，薄膜厚度小不適于做樣品制備用。實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 血清蛋白中含有清蛋白、 1球蛋白、 2球蛋白、球蛋白、 球蛋白等。各種蛋白質(zhì)由于立體構(gòu)象、分子量、等電點(diǎn)及形狀不同，在電場(chǎng)中的遷移速度不同。血清蛋白的PI均小于8.6，在pH=8.6的巴比妥緩沖液中，都帶負(fù)電荷，電泳時(shí)向正極移動(dòng)。由于遷移率不同而被分離。 pH pI 纖維狀纖維狀（2）電場(chǎng)強(qiáng)度：）電場(chǎng)強(qiáng)度：X越大，越大，V越大越大（3）緩沖液：）緩沖液：pH 決定決定Q，(pH-PI)越大，越大，Q越多，越多，V越大；成分：性質(zhì)穩(wěn)定，不易電解。離子強(qiáng)度：越大；成分：性質(zhì)穩(wěn)定，不易電解。離子強(qiáng)度：0.02-0.2M。I越大，樣品電流減小