消毒劑消毒效果驗證方案

1、題 目：消毒劑消毒效果驗證方案文件編號：版本號：A00第 26頁 共26頁 消毒劑消毒效果驗證方案 藥業(yè)有限公司審批起草簽 名部 門職 務日 期審核簽 名部 門職 務日 期終審簽 名部 門職 務日 期批準簽 名部 門職 務日 期文件修訂情況生效日期描 述版本號年 月 日新建企業(yè)，按藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）編制。A00目錄審批2目錄31.概述42.目的43.范圍44.驗證機構(gòu)組成44.1驗證委員會組成44.2驗證小組成員及工作職責55.進度計劃56.培訓57.參考資料67.1驗證依據(jù)67.2驗證所需文件68.驗證準備68.1驗證用培養(yǎng)基和稀釋液的確認68.2所用儀器設備的確認68.

2、3所用菌種的確認68.4菌液的制備68.5消毒劑的配制79.驗證過程79.1消毒劑消毒效果確認79.2消毒劑的有效期確認1010.異常情況處理1011.結(jié)論和建議1012.驗證報告會簽1113.驗證證書1114.再驗證1115.附件111. 概述潔凈區(qū)設施設備長時間放置時，在適宜的溫濕度條件下會導致微生物滋生繁殖，因此需要適當?shù)南敬胧﹣肀Ｕ显O施設備不被污染。75%濃度下的乙醇分子具有很強的滲透力，能穿過細菌表面的膜，進入細菌內(nèi)部，使構(gòu)成細菌生命基礎的蛋白質(zhì)凝固，將細菌殺死。75%乙醇溶液主要用于墻面、天花板、門窗、機器設備、儀器、操作臺、地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒。

3、本次消毒劑效果驗證是指生產(chǎn)過程中使用的消毒劑的消毒效果驗證。生產(chǎn)過程中消毒劑的消毒方式分為兩種：浸泡式/液封消毒和表面擦拭/噴灑消毒。在實驗室內(nèi)對這兩種消毒方式進行模擬（表面擦拭/噴灑消毒時選擇的材質(zhì)應與設施設備表面材質(zhì)相同或相似），根據(jù)實驗結(jié)果判定該種消毒劑的消毒效果。2. 目的本驗證確定75%乙醇溶液的消毒效果并確定消毒劑的有效期和更換周期，確保消毒劑在有效期內(nèi)和更換周期內(nèi)的消毒效果能夠符合要求。3. 范圍本驗證適用于消毒劑75%乙醇溶液消毒效果、有效期和更換周期的確認。4. 驗證機構(gòu)組成公司成立驗證委員會，負責所有驗證工作的領導和組織，負責審批驗證方案和驗證報告、發(fā)放驗證證書。驗證委員會

4、針對每一個具體驗證項目成立專門驗證工作小組，負責該驗證項目的驗證方案起草、實施、組織與協(xié)調(diào)，負責驗證結(jié)果記錄與評定，負責完成驗證報告。4.1 驗證委員會組成姓名部門及職務驗證委員會中職務驗證工作中職責4.2 驗證小組成員及工作職責姓名部門及職務驗證小組中職務驗證工作中職責5. 進度計劃驗證小組提出完整的驗證計劃，經(jīng)驗證委員會批準后實施，整個驗證活動從_年_月_日至_年_月_日。6. 培訓為保證驗證工作順利實施，應對參加本次驗證工作的相關(guān)人員進行培訓，并做好培訓記錄（附件1）7. 參考資料7.1 驗證依據(jù)中國藥典（2015版）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）及其附錄消毒與滅菌效果的評價方法

5、與標準GB15981-19957.2 驗證所需文件消毒劑和清潔劑配制使用操作規(guī)程D級潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔操作規(guī)程潔凈室（區(qū)）表面微生物檢測操作規(guī)程8. 驗證準備8.1 驗證用培養(yǎng)基和稀釋液的確認進行驗證工作前，對驗證中所用到的培養(yǎng)基和稀釋液進行確認，確保驗證所用培養(yǎng)基和稀釋液的準確。確認內(nèi)容包括：品名、批號、生產(chǎn)廠家及適用性檢查情況/有效期至。本次驗證中所用培養(yǎng)基和稀釋液主要包括：胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、0.9%無菌氯化鈉溶液。確認情況見附件2。8.2 所用儀器設備的確認進行驗證工作前，對驗證中所用到的主要儀器設備進行確認，確保驗證所用儀器設備的準確。確認內(nèi)容包

6、括：儀器名稱、儀器型號、儀器編號、生產(chǎn)廠家、檢定情況。本次驗證中所用主要儀器設備主要包括：立式壓力蒸汽滅菌器、電子天平、生物安全柜、生化培養(yǎng)箱等。確認情況見附件2。8.3 所用菌種的確認進行驗證工作前，對驗證中所用到的菌種進行確認，確保驗證所用菌種的準確。確認內(nèi)容包括：名稱、使用代數(shù)、生產(chǎn)廠家及原種代數(shù)、菌種保存情況。本次驗證中所用菌種主要包括：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。確認情況見附件2。8.4 菌液的制備按照下表中所列內(nèi)容進行菌液的制備，菌液制備與使用記錄見附件3。菌種菌液制備方法大腸埃希菌接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的

7、新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基斜面上，置30-35培養(yǎng)1824小時，加入適量0.9%無菌氯化鈉溶液將瓊脂表面的菌苔洗脫，然后用適宜方法吸出菌懸液至無菌試管內(nèi)，加入適量0.9%無菌氯化鈉溶液用計數(shù)法制成每1ml含菌數(shù)約為105-106cfu的菌懸液。同時用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌為不大于100cfu(菌落形成單位)的菌懸液，采用薄膜過濾法測定1ml菌懸液的菌數(shù)。金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基斜面上，2025培養(yǎng)2448小時，加入適量0.9%無菌氯化鈉溶液將瓊脂表面的菌苔洗脫，然后用適宜方法吸出菌懸液至無菌試管內(nèi)，

8、加入適量0.9%無菌氯化鈉溶液用計數(shù)法制成每1ml含菌數(shù)約為105-106cfu的菌懸液。同時用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌為不少于100cfu(菌落形成單位)的菌懸液，采用薄膜過濾法測定1ml菌懸液的菌數(shù)。8.5 消毒劑的配制進行驗證工作前，對驗證中所用到的消毒劑進行配制。75%乙醇按照下述比例量取溶液，置于不銹鋼容器內(nèi)攪拌均勻進行配制：95%乙醇（V/V）：純化水（冷）=3.75:1配制完成后，置于能密封的塑料桶中18-26貯存。消毒劑配制與使用記錄見附件4。9. 驗證過程9.1 消毒劑消毒效果確認9.1.1 定量懸浮試驗定量懸浮試驗是針對通過浸泡或液封方法消毒的的消毒劑。本

9、驗證針對75%乙醇進行連續(xù)三批的試驗。9.1.1.1 試驗組的制備1) 將菌液進行活菌計數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5105-5106cfu/ml的菌懸液。2) 準確吸取75%乙醇4.5 ml加入無菌試管內(nèi)，放入202水浴中。3) 待試管內(nèi)液體溫度與水浴溫度平衡后，向試管內(nèi)加入0.5 ml菌懸液（含菌量為5105-5106cfu/ml），混勻并開始計時。4) 分別于4個不同間隔時間：4min、6min、8min和10min，各取9.1.1.3的菌懸液0.5ml移入稀釋液中混勻。5) 作適當稀釋后，各取1ml混勻液，作平板傾注，每種混勻液接種兩個，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌用胰酪

10、大豆胨瓊脂培養(yǎng)基放3035培養(yǎng)時間不超過3天作活菌計數(shù)，白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，2328培養(yǎng)不超過5天計數(shù)。9.1.1.2 陽性對照以稀釋液代替消毒液，同時按9.1.1.1進行。9.1.1.3 按稀釋度推算出每個樣本存活菌數(shù)（cfu/ml），按下式計算殺滅率：殺滅率=陽性對照存活菌數(shù)試驗組存活菌數(shù)陽性對照存活菌數(shù)100%9.1.1.4 可接受標準三次試驗的殺滅率均99.9判為合格。對枯草芽孢桿菌三次試驗均全部殺滅判為消毒合格。具體試驗記錄、結(jié)果見附錄5。9.1.2 載體定量試驗法表面試驗法是針對通過擦拭或噴灑消毒（75%乙醇）的消毒劑。本驗證針對75%乙醇進行連續(xù)三批的試驗。本公司潔凈

11、區(qū)設施表面材質(zhì)主要是不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗法選用不銹鋼載片和玻璃載片進行驗證試驗。9.1.2.1 染菌載片制備1) 染菌不銹鋼載片制備將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，分別滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌0.1ml的菌液(含菌量約為5105-5106cfu/ml),并均勻涂布于整個載體表面。每種菌種放置4個玻片，涂勻，放37恒溫箱烘干，備用。2) 染菌玻璃載片制備因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進行染菌試驗。進行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（5050），標注清晰。玻璃載片菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片的制備。每種菌

12、平行制備4個染菌玻璃載片。3) 試驗組的制備用消毒劑擦拭制備好的染菌載片，擦拭時間分別為4min、6min、8min、10min，每個擦拭時間點均用消毒劑分別擦拭每個菌種的4個平行染菌載片。作用結(jié)束后，用55的TSA接觸碟取樣。打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，蓋上碟蓋，標明相關(guān)信息。4) 菌液對照組的制備將上述菌懸液用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌為不大于100cfu(菌落形成單位)的菌懸液，采用薄膜過濾法測定1ml菌懸液的菌數(shù)。以此來計算滴加載片的含菌量。5) 陰性對照組的制備用55的TSA接觸碟

13、在已滅菌的載片上（未染菌的載片）按壓取樣，操作同上面3）實驗組的制備中的取樣描述。每種載片需要制備2個陰性對照。陰性對照組不得長菌，若長菌，需對未染菌的載片進行調(diào)查，排除偏差后重新進行試驗。9.1.2.2 培養(yǎng)及計數(shù)將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于3035培養(yǎng)不超過3天計數(shù)；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于2328培養(yǎng)不超過5天計數(shù)。9.1.2.3 結(jié)果計算殺滅率=陽性對照存活菌數(shù)試驗組存活菌數(shù)陽性對照存活菌數(shù)100%9.1.2.4 可接受標準三次試驗的殺滅率均99.9判為合格。對枯草芽孢桿菌三次試驗均全部殺滅判為消毒合格。具體試驗記錄、結(jié)果見附錄6。9

14、.2 消毒劑的有效期確認通過該驗證，確定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，并且消毒效果不會變化，能夠滿足該消毒劑被使用的生產(chǎn)環(huán)境的要求。9.2.1 確認方法將按照8.5所述方法配制好的75%乙醇，存貯在能密封的塑料桶中，并放置在1826的微生物實驗室C級潔凈區(qū)的條件下。然后分別在儲存的第10天、25天、30天及第35天進行取樣后試驗。9.2.2 試驗方法同9.1.1定量懸浮試驗操作。9.2.3 結(jié)果計算殺滅率=陽性對照存活菌數(shù)試驗組存活菌數(shù)陽性對照存活菌數(shù)100%9.2.4 可接受標準所有試驗的殺滅率均99.9判為合格。對枯草芽孢桿菌試驗均全部殺滅判為消毒合格。具體試驗記錄、結(jié)果見附錄7。9.3 消毒

15、劑更換周期確認長期使用單一消毒劑,會使微生物產(chǎn)生抗藥性,消毒效果大大降低。通過本次驗證，確認消毒劑75%乙醇的更換周期。9.3.1 確認方法選擇潔凈區(qū)內(nèi)三個房間，在正常消毒條件下，分別在第10天、25天、30天及第35天的消毒前（陽性對照組）和消毒后（實驗組）進行取樣試驗。在此時間內(nèi)人員正常進出潔凈區(qū)。9.3.2 試驗方法使用55的TSA接觸碟取樣，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，蓋上碟蓋，標明相關(guān)信息。9.3.3 結(jié)果計算殺滅率=陽性對照存活菌數(shù)試驗組存活菌數(shù)陽性對照存活菌數(shù)100%9.3.4 可接受標準所有試驗的殺滅率均

16、99.9判為合格。對枯草芽孢桿菌試驗均全部殺滅判為消毒合格。具體試驗記錄、結(jié)果見附錄8。10. 異常情況處理對驗證過程中發(fā)現(xiàn)的任何異常情況按照偏差處理管理規(guī)程的規(guī)定處理。異常情況統(tǒng)計記錄、偏差調(diào)查評估單、偏差糾正和預防措施跟蹤表和偏差調(diào)查報告分別見附件9、附件10、附件11和附件12。11. 結(jié)論和建議此項中將根據(jù)實際測試的結(jié)果給出方法學驗證的結(jié)論，有異議的將給出建議。結(jié)論包括的內(nèi)容如下：l 是否按驗證方案實施驗證；l 驗證記錄是否完整；l 驗證內(nèi)容是否有遺漏；l 驗證結(jié)果是否達到可接受標準；l 驗證文件是否進行變更并確認相應的的變更記錄；l 驗證過程是否有偏差并確認偏差的處理結(jié)果。12. 驗

17、證報告會簽驗證小組已審閱了上述所有驗證的結(jié)果分析、評價及結(jié)論，確認分析方法符合檢驗項目的要求。驗證小組成員對驗證結(jié)果進行會簽。13. 驗證證書驗證委員會對驗證結(jié)果綜合評審，作出驗證結(jié)論，經(jīng)驗證委員會各成員會簽后，由驗證委員會簽發(fā)驗證證書（附件13）。14. 再驗證再驗證時間按照驗證委員會批準的的效期進行再驗證。如該驗證的試驗方法或試驗相關(guān)試劑發(fā)生改變，需再驗證。再驗證項目及周期作為本證書的附件。 15. 附件 15.1 附件1：培訓記錄15.2 附件2：驗證準備工作確認記錄15.3 附件3：菌液制備與使用記錄15.4 附件4：消毒劑配制與使用記錄15.5 附件5：定量懸浮試驗記錄15.6 附件

18、6：表面試驗法記錄15.7 附件7：消毒劑有效期確認記錄15.8 附件8：潔凈房間清潔消毒記錄15.9 附件9：消毒劑更換周期確認記錄15.10 附件10：異常情況統(tǒng)計記錄15.11 附件11：偏差調(diào)查評估單15.12 附件12：偏差糾正和預防措施跟蹤表15.13 附件13：偏差調(diào)查報告15.14 附件14：驗證證書附件1：培訓記錄培訓名稱培訓人培訓方式培訓時間培訓地點人員簽到姓名部門簽到姓名部門簽到培訓效果評價評定人日期備注附件2：驗證準備工作確認記錄培養(yǎng)基和稀釋液確認品名批號生產(chǎn)廠家適用性檢查情況/有效期至主要儀器設備確認儀器名稱儀器型號儀器編號校驗證書號校驗有效期至所用菌種確認菌種名稱使

19、用代數(shù)生產(chǎn)廠家及原種代數(shù)購進后的保存條件備注確認人/日期復核人/日期附件3：菌液制備與使用記錄菌種名稱:菌種編號:菌液制備方法:1.接種 的新鮮培養(yǎng)物至 培養(yǎng)基中，培養(yǎng) h。操作人/日期： 復核人/日期：2.上述培養(yǎng)物按10倍梯度稀釋法，用0.9無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為 cfu的菌懸液。操作人/日期： 復核人/日期：菌液批號：制備量：使用量：使用目的：使用人/日期： 復核人/日期：剩余菌液銷毀人/日期： 復核人/日期： 附件4：消毒劑配制與領用記錄日期： 年 月消毒劑名稱消毒劑配制批號消毒劑配制 （量取 稱?。?消毒劑原液 （L kg)和純化水（冷） （L kg)，置（不銹鋼容器 塑

20、料桶）內(nèi)，攪拌均勻，即得 消毒劑 （L kg)。配制日期配制人復核人 日 ： 消毒劑過濾： 將0.2um聚四氟濾芯、濾桶、卡箍用純化水沖洗一遍，裝配好后，再正反沖各一次，每次3分鐘，清洗完畢做起泡點試驗；濾芯符合廠家起泡點要求后，向過濾器內(nèi)注入已配制好的消毒劑過濾至消毒劑桶內(nèi)，密封存放。過濾日期過濾人復核人 日 ：有效期至 日 ：消毒劑領用日期領用量用途領用人發(fā)放人月 日月 日月 日月 日月 日月 日月 日月 日月 日月 日附件5：定量懸浮試驗結(jié)果匯總記錄取樣日期取樣人消毒劑名稱接種菌種名稱殺滅時間試驗組存活菌數(shù)平均數(shù)陽性對照存活菌數(shù)殺滅率12大腸埃希菌4min6min8min10min金黃色

21、葡萄球菌4min6min8min10min銅綠假單胞菌4min6min8min10min枯草芽孢桿菌4min6min8min10min白色念珠菌4min6min8min10min備注確認人/日期復核人/日期附件6：載體定量試驗記錄取樣日期取樣人載片名稱接種菌種名稱殺滅時間試驗組存活菌數(shù)平均數(shù)陽性對照存活菌數(shù)殺滅率12大腸埃希菌4min6min8min10min金黃色葡萄球菌4min6min8min10min銅綠假單胞菌4min6min8min10min枯草芽孢桿菌4min6min8min10min白色念珠菌4min6min8min10min備注確認人/日期復核人/日期附件7：消毒劑有效期確認記

22、錄取樣日期間隔天數(shù)取樣人消毒劑名稱接種菌種名稱殺滅時間試驗組存活菌數(shù)平均數(shù)陽性對照存活菌數(shù)殺滅率12大腸埃希菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌備注確認人/日期復核人/日期附件8：潔凈房間清潔消毒記錄序號日期操作內(nèi)容消毒劑名稱操作人復核人備注1清潔 消毒2清潔 消毒3清潔 消毒4清潔 消毒5清潔 消毒6清潔 消毒7清潔 消毒8清潔 消毒9清潔 消毒10清潔 消毒11清潔 消毒12清潔 消毒13清潔 消毒14清潔 消毒15清潔 消毒16清潔 消毒17清潔 消毒18清潔 消毒19清潔 消毒20清潔 消毒21清潔 消毒22清潔 消毒23清潔 消毒24清潔 消毒25清潔 消毒26清潔 消毒27清潔 消毒28清潔 消毒29清潔 消毒30清潔 消毒31清潔 消毒32清潔 消毒33清潔 消毒34清潔 消毒35清潔 消毒36清潔 消毒37清潔 消毒附件9：消毒劑更換周期確認記錄消毒劑名稱取樣日期累計天數(shù)房間名稱消毒前消毒后殺滅率12平均12平均備注確認人/日期復核人/日期附件10：異常情況統(tǒng)計記錄序號異常情況概述偏差編號處理結(jié)果12345678910111213141516確認人/日期復核人/日