花生殼中總黃酮和木犀草素提取工藝研究

1、花生殼 (Peanut hull 是豆科一年生草本植物花生 (Arachis hypogeae L. 的干燥果殼 , 我國(guó)有豐富的資源。 花生殼作中草藥 , 其標(biāo)準(zhǔn)已收載于 1996年版云南省藥 品標(biāo)準(zhǔn) 1。在花生殼的有效組分總黃酮中 , 以木犀草素含量最高。 研究 2-6證明 , 花生殼提取物中總黃酮不僅具 有降血脂和降血壓的作用 , 同時(shí)還有抗氧化、 鎮(zhèn)咳平喘、 抗菌消炎及增強(qiáng)免疫和抗腫瘤的作用。 為更好地開發(fā)和 利用花生殼資源 , 本文采用正交試驗(yàn)法 7-8研究花生殼的 有效成分總黃酮及木犀草素的提取工藝。1實(shí)驗(yàn)部分1.1材料與儀器花生殼 (產(chǎn)地 :安徽 ; 蘆丁 (中檢所 , 批號(hào) 1

2、00080-200306 ; 木 犀 草 素 對(duì) 照 品 (中 檢 所 , 批 號(hào) 111520-200201 ; 甲醇(色譜純 , 乙醇、 亞硝酸鈉、 硝酸鋁、 氫氧 化鈉、 磷酸 (分析純 , 重蒸水 (自制 。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申生科技有限公司 ; 真空干燥箱 (ZK-82A 型 , 上海實(shí)驗(yàn)儀器廠 ; 高效液相色譜儀 (SPD-10Avp , LC-10Atvp , 日本島津 ; 紫外 -可見分 光 光 度 計(jì)(6010型 , 安捷侖科技有限公司 ; 電子天平 (G258型 , 德國(guó)梅特勒公司 。1.2實(shí)驗(yàn)方法 1.2.1藥材預(yù)處理將花生殼用冷水洗凈 , 于 60 干燥 4h , 粉碎

3、成粗 粉 , 備用。1.2.2提取物溶液的制備藥材粗粉 溶媒浸濕 回流提取 趁熱抽濾 濾 液減壓濃縮 乙醇溶解定容。1.2.3提取物中總黃酮的含量測(cè)定 9-10 樣品配置對(duì)照品溶液配置 :精密稱取在 80 減壓干燥至恒重 的蘆丁對(duì)照品 10mg , 置 100mL 容量瓶中 , 加 75%乙醇80mL , 置水浴微熱使溶解 , 放冷 , 加 75%乙醇至刻度 , 搖勻 , 作對(duì)照品溶液。供試 品 溶 液 配 置 :精 密 量 取 提 取 物 溶 液 2mL , 置25mL 容量瓶中 , 加 75%乙醇稀釋并定容 , 搖勻 , 過濾 , 取續(xù)濾液 , 作供試品溶液。 樣品測(cè)定量 取 供 試 品

4、溶 液 2mL , 置 10mL 于 容 量 瓶 中 , 補(bǔ)75%乙醇 3mL , 加 5%亞硝酸鈉溶液 0.3mL , 搖 勻 , 放 置6min 后 分 別 加 10%硝 酸 鋁 溶 液 0.3mL , 搖 勻 , 放 置 6min , 再分別加 4%氫氧化鈉試液 4mL , 再加水至刻度 , 搖勻 , 放置 10min 。按照分光光度法在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度值 , 代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量。1.2.4提取物中木犀草素含量的測(cè)定 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色 譜 柱 ODS (Luna (2 5m , 4.6mm ×250mm ; 流 動(dòng) 相 :甲醇 -0.4%磷酸水

5、溶液 (60 40 ; 流速 :1mL/min ; 檢測(cè) 波長(zhǎng) :350nm ; 進(jìn)樣量 :20L 。 樣品配置對(duì)照品溶液配置 :精密稱取木犀草素對(duì)照品適量 , 用流動(dòng)相溶解并稀釋 , 制成 20g/mL 的溶液 , 作為對(duì)照 品溶液。供試品溶液配置 :精密量取提取物濃縮液 1mL , 置10mL 容量瓶中 , 加流動(dòng)相稀釋并定容 , 搖勻 , 過濾 , 取續(xù)濾液 , 作為供試品溶液。 樣品測(cè)定花生殼中總黃酮和木犀草素提取工藝研究黃守正 1, 胡容峰 2(1. 安徽醫(yī)藥科技實(shí)業(yè)有限公司 , 安徽 合肥 230001; 2. 安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 , 安徽 合肥 230038摘要 :研究花生殼中總

6、黃酮和木犀草素的提取工藝。 經(jīng)正交試驗(yàn) , 以提取物中總黃酮和木犀草素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo) , 優(yōu)選提取工藝。 確立以 75%乙醇為溶劑 , 料液比 1 10, 每次提取 2h , 提取 3次為優(yōu)選工藝 , 花生殼中總黃酮和木犀草素均可有效提取。該工藝簡(jiǎn)捷、 經(jīng)濟(jì)、 可行 , 適合工業(yè)化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞 :花生殼 ; 總黃酮 ; 木犀草素 ; 正交試驗(yàn) 中圖分類號(hào) :S565.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 :A文章編號(hào) :1008-553X (2008 02-0028-03收稿日期 :2008-01-30作者簡(jiǎn)介 :黃守正 (1976- , 男 , 工程師 , 主要從事化學(xué)品新劑型與新工藝研究 , 1396667755

7、7, szh_0551 。安 徽 化 工ANHUI CHEM ICAL INDUSTRY第 34卷 , 第 2期 2008年 4月Vol.34, No.2Apr.200828黃守正 , 等 :花生殼中總黃酮和木犀草素提取工藝研究分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液 20L , 注入液相 色譜儀 , 記錄色譜圖 , 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。2結(jié)果與討論2.1乙醇提取工藝的研究2.1.1正交試驗(yàn)方案(三水平四因素 設(shè)計(jì) 以乙醇濃度、 料液比、 提取時(shí)間和提取次數(shù)作因素 , 分別考察三個(gè)梯度水平。通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) , 以總黃酮 和木犀草素提取量作為評(píng)價(jià)指標(biāo) , 權(quán)重指標(biāo)分別取 0.2、 0.8, 進(jìn)行綜合

8、評(píng)價(jià)?？傇u(píng)價(jià)值 =0.2×總黃酮 +木犀草素 ×0.8, 優(yōu)選提取工藝。試驗(yàn)因素與水平見表 1。2.1.2正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 :因素試驗(yàn)中 A>D>C>B , 即乙醇濃度 >提取次數(shù) >提取時(shí)間 >料液比 ; 水平試驗(yàn)中A :K 2>K 3>K 1, B :K 3 K 2 K 1, C :K 3 K 2>K 1, D :K 3 K 2>K 1。結(jié)合方差顯著性分析 :因素 B 的各水平對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響無顯著性差異 , 因素 C 影響相對(duì)較小。從能耗與經(jīng) 濟(jì)角度優(yōu)選 B 2和 C 2, 由此得出

9、優(yōu)選方案為 A 2B 2C 2D 3。 即 :75%乙醇 , 10倍量料液比 , 每次提取 2h , 提取 3次。2.2總黃酮含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線精 密 吸 取 蘆 丁 對(duì) 照 品 溶 液 1mL 、 2mL 、 3mL 、 4mL 、5mL , 分別置于 10mL 容量瓶中 , 依次補(bǔ)加 75%乙醇 4、 3、 2、 1、 0mL , 再 加 5%亞 硝 酸 鈉 溶 液 0.3mL , 搖 勻 , 放 置 6min 后 分 別 加 10%硝 酸 鋁 溶 液 0.3mL , 搖 勻 , 放 置 6min , 再分別加 4%氫氧化鈉試液 4mL , 再加水至刻度 , 搖勻 ,

10、放置 10min , 按照分光光度法在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度值。 以吸收度值為縱坐標(biāo) , 濃度為橫坐標(biāo) , 得回 歸方程 :A=12.682C-0.0329, r=0.9996。 結(jié)果表明 , 蘆丁在1050g/mL 的濃度范圍內(nèi)與吸收度顯良好線性關(guān)系。 2.2.2重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次提取物供試溶液 6份各 1mL , 按標(biāo)準(zhǔn)曲 線測(cè)定方法依法配置并測(cè)定 , 結(jié)果供試溶液含量的 RSD 為 1.87%, 表明本方法精密度良好。2.2.3回收率試驗(yàn)取已測(cè)定含量的提取物供試溶液 , 按高、 中、 低濃度 各平行配置 3份 , 分別加入適量對(duì)照品溶液 , 依法測(cè)定 , 結(jié)果供試溶液的高、中、

11、低濃度的平均加樣回收率為99.23%, RSD 為 1.67%, 表明本方法的準(zhǔn)確度高。2.2.4穩(wěn)定性考察取供試溶液 1mL 依法顯色放置 10min 后 , 在室溫 條件下分別在 0h 、 1h 、 2h 、 4h 、 8h 測(cè)定吸收度 A 值 , RSD 為 1.98%, 表明供試液在室溫條件下 8h 內(nèi)穩(wěn)定。 2.3木犀草素含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 2.3.1專屬性試驗(yàn)分別取木犀草素對(duì)照品溶液和供試品溶液 , 按照色 譜條件進(jìn)樣 , 記錄色譜圖 , 見圖 1。圖 1表明 , 供試品溶 液中木犀草素與其它成分有效分離 , 專屬性強(qiáng)。2.3.2線性范圍精密稱取木犀草素對(duì)照品適量 , 用甲醇超聲溶

12、解并稀 釋 制 成 50g/mL 的 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 , 精 密 量 取 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液1mL 、 2mL 、 3mL 、 4mL 、 5mL 、 6mL 置于 10mL 容量瓶中 , 用流動(dòng)相稀釋并定容 , 搖勻 , 按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定 , 以 木犀草素峰面積 A 為縱坐標(biāo) , 進(jìn)樣濃度 C (g/mL 為橫 坐標(biāo) , 得回歸方程為 :A =55754C +8559.5, r=0.9998。結(jié) 果木犀草素濃度在 530g/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次提取物濃縮液樣品 5份 , 依法配置并測(cè) 定 , 結(jié)果供試品溶液含量的 RSD%為 1.22%。表 3方差分析表

13、方差來源離差平方和自由度均方F A C D誤差 2.340.611.350.0222221.170.310.680.0011173168注 :F 0.05(2, 2 =19.00F 0.01(2, 2 =99.0表 2L 9(34正交試驗(yàn)表因素試驗(yàn)A B C D 123456789111222333123123123123231312123312231K 1K 2K 3K 1/3K 2/3K 3/3Q S12.9316.6015.414.315.535.14226.702.3414.7915.0415.104.935.015.03224.380.0213.9115.2715.764.645.0

14、95.25224.970.6113.3515.5916.004.455.205.33225.711.3510.2313.4314.2216.4514.6315.3415.2114.6714.381.632.432.633.272.932.943.122.762.323.354.634.955.915.275.425.545.144.73提取量 (mg/g 總黃酮 木犀草素 總評(píng)價(jià)值G= y=44.94CT=( y 2/9=224.36Q=1/3( Ki 2S=Q-CT表 1因素水平表因素 水平ABCD乙醇濃度 (%料液比時(shí)間 (h 次數(shù)1235075951 81 101 2012312329總

15、第 152期 2008年第 2期 (第 34卷 安 徽 化 工圖 1色譜圖A-木犀草素對(duì)照品 ; B-木犀草素提取物樣品Study on Technology of Extracting Totall Flavonoid and Luteolin from Peanut HullsHUANG Shou-zheng 1, HU Rong-feng 2(1.Anhui Industrial Company of Medical Science and Technology , Hefei 230001, China ; 2.Dept. of Pharmaceutics , Anhui Colleg

16、e of Traditional Chinese Medicine , Hefei 230038, China Abstract :To study the optinum technology of extraction totall flavonoid and luteolin from peanut hulls. To optinum technology of extraction with the content of totall flavonoid and luteolin in the extract as reference by orthogonality experime

17、nts. The optimum condition with ethanol extraction was as follows , 75%ethanol solution as solvent , ratio of liquid to solid 10:1, extraction time was two hours , extraction number of times was third , and the highest content of totall flavonoid and luteolin in the extract was obtained. The method

18、is simple , economical and is reliable for the industrial production.Key words :peanut hull ; totall flavonoid ; luteolin ; orthogonality experiments2.3.4回收率試驗(yàn)取已測(cè)定含量的提取物濃縮液 , 按高、中、 低濃度各 平行配置 3份 , 分別加入適量的對(duì)照品溶液 , 依法測(cè)定 , 結(jié)果供試品溶液的高、 中、 低濃度的平均加樣回收率為98.9%, RSD 為 2.08%。2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液 , 室溫條件下分別在 0h 、 1h 、

19、 2h 、 4h 、8h 、 12h 測(cè)定 , 以峰面積計(jì) , RSD 為 1.15%, 結(jié)果表明供試 品溶液在室溫條件下 12h 內(nèi)穩(wěn)定。3結(jié)語文獻(xiàn) 11-14報(bào)道提取花生殼有效成分的方法有溶劑 法、 超聲法、 微波法及超臨界 CO 2法等 , 其中溶劑提取法 報(bào)道較多 , 多以甲醇、 丙酮和乙酸乙酯為提取溶劑。 本文通過上述溶劑預(yù)試與乙醇對(duì)比 , 結(jié)果在總黃酮提取率上 無顯著性差異 , 因此 , 本文在綜合工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備、 成本及 安全性等因素下 , 選擇乙醇作提取溶劑。在正交試驗(yàn)設(shè) 計(jì)評(píng)價(jià)值中因總黃酮含量是木犀草素的 45倍 , 故采用 權(quán)重指標(biāo) 0.2和 0.8進(jìn)行平衡。參 考 文 獻(xiàn)1云南省衛(wèi)生廳 . 云南省藥品標(biāo)準(zhǔn) 花生殼 . 滇 Q/WS796, 1985.2廣東從化溫泉干部療養(yǎng)院 . 花生殼制劑降膽固醇 35例的療效分析 J. 新醫(yī)學(xué) , 1974(9 .3崔廣陶 . 花生殼治療高血壓病 40例 J. 新醫(yī)學(xué) , 1976, 7(8 :404. 4詹沛鑫 , 李慶生 . 花生殼提取物的抗氧 化 活 性 研 究 J. 四 川 輕化工學(xué)院學(xué)報(bào) , 2000, 13(2 :37-39.