牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體纖維粘連蛋白的免疫組織化學(xué)研究與定量分析

1、    牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體纖維粘連蛋白的 免疫組織化學(xué)研究與定量分析        【摘要】目的研究纖維粘連蛋白在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體內(nèi)的表達(dá)，探討其分布與功能間的關(guān)系。方法免疫組織化學(xué)染色與像定量分析。結(jié)果纖維粘連蛋白免疫反應(yīng)(-IR)普遍存在于牙髓、前期牙本質(zhì)和成熟牙本質(zhì)的牙本質(zhì)小管與成牙本質(zhì)細(xì)胞突起，以成牙本質(zhì)細(xì)胞層，牙髓血管與神經(jīng)周圍最為豐富。冠髓和冠部牙本質(zhì)纖維粘連蛋白的積分光密度分別為：0.49±0.33，0.50±0.29；線密度分別為：

2、38.44±20.7，19.34±18.72；體密度分別為：24.56±10.8，44.52±28.5。結(jié)論纖維粘連蛋白-IR不僅見于牙髓與前期牙本質(zhì)，而且也見于成熟牙本質(zhì)的牙本質(zhì)小管與成牙質(zhì)細(xì)胞突起，它對(duì)維持牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體各結(jié)構(gòu)的正常位置，形態(tài)和防止炎癥擴(kuò)散可能發(fā)揮了重要作用。【關(guān)鍵詞】人前磨牙；牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體；纖維粘連蛋白；免疫組織化學(xué)；像定量分析【中分類號(hào)】R322.4+.1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】0529-1356-(2000)03-280 IMMUNOHISTOCHEMICAL AND QUANTITATIVE STUDY OFFIBR

3、ONECTIN IN DENTAL PULP-DENTIN COMPLEX OFHUMAN PRERMOLARSZHU Shi-zhu?, ZHU Yi, YAO Jiang-jiang, MENG Yang, WANG Ji(Department of Oral Anatomy and Physiology, Hubei Medical University, Wuhan 430071, China)【Abstract】ObjectiveExpression of fibronectin in dental pulp-dentin complex was studied to explore

4、 to relation between distribution and function. MethodsImmunohistochemistry and quantitative image analysis were used. ResultsFibronectin existed in dental pulp and predentin, and also in space between the wall of dentinal tubule and process of odontoblast in mature dentin. They were mostly distribu

5、ted in odontoblast layer and round blood vessels and nerves. In the crown pulp, integral optical density, length density and volume density were 0.49±0.33，38.44±20.7 and 24.56±10.8 respectively. In the crown dentin, the integral optical density, length density and volume density were

6、0.50±0.29，19.34±18.72 and 44.52±28.5 respectively. ConclusionFibronectin usually appeared in dental pulp and predentin, and also in space between the wall of dentinal tubule and process of odontoblast in mature dentin, suggesting that it played an important role in network arrangement

7、 of fibronectin which maintained normal form and position of pulp cells and other structures in dental pulp-dentin complex, and also in limitation of diffusion of pulpitis.【Key words】Human premolars; Dental pulp-dentin complex; Fibronectin; Immunohistochemistry; Quantitative image analysis纖維粘連蛋白(fib

8、ronectin,FN)是細(xì)胞外間質(zhì)的重要成分，在細(xì)胞粘連、遷移、組織損傷后修復(fù)和腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。80年代以來，許多學(xué)者研究了纖維粘連蛋白在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中的分布，但在前期牙本質(zhì)和成熟牙本質(zhì)中是否存在纖維粘連蛋白，至今還有爭(zhēng)論，其定量分析更為鮮見。牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體是牙組織中唯一具有生物活性的結(jié)構(gòu)，弄清楚它的纖維粘連蛋白分布，有利于了解牙組織內(nèi)各結(jié)構(gòu)的位置關(guān)系，也有利于認(rèn)識(shí)牙病發(fā)生，發(fā)展的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，因此我們對(duì)牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體纖維粘連蛋白的表達(dá)、表達(dá)部位及其定量進(jìn)行了研究。材料和方法1.樣品收集、包埋、切片收集正畸或修復(fù)拔出的健康人前磨牙60顆，年齡1145歲，男女各半，無疾病

9、和齲齒史。拔下的牙迅速截去根尖1/3，用4%多聚甲醛液固定24h，于4mol/L甲酸0.5mol/L甲酸鈉液中脫鈣24周，石蠟包埋，切片5m。2.SP法免疫組織化學(xué)切片脫蠟入水，滴加復(fù)合消化酶(博士德公司提供)，10min；3%過氧化氫10min；正常羊血清，10min；兔抗人纖維粘連蛋白多克隆抗體(Sigma公司產(chǎn)品，工作濃度1200)，60min；羊抗兔生物素標(biāo)記的第二抗體(美國Matrix公司產(chǎn)品)，20min；鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶液(美國Matrix公司產(chǎn)品)，20min，以上每步均在37下進(jìn)行，各步之間用PBS液清洗。然后滴加DAB及H2O2底物液，在顯微鏡下控制顯色。自來

10、水沖洗，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。對(duì)照片用PBS代替兔抗人纖維粘連蛋白多克隆抗體，其他步驟同上。陰性為淺黃色或無色，陽性為棕黃色。3.像定量分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理免疫組織化學(xué)切片輸入MPIAS-500多媒體彩色病理分析系統(tǒng)，在0.199m象素點(diǎn)長(zhǎng)，1.109×104m2測(cè)量窗下進(jìn)行定量分析。在冠部牙髓中央?yún)^(qū)，周圍區(qū)，前期牙本質(zhì)，近髓1/3成熟牙本質(zhì)，中1/3成熟牙本質(zhì)，近釉1/3成熟牙本質(zhì)各取5個(gè)視野，每個(gè)視野框取10個(gè)小窗口進(jìn)行纖維粘連蛋白-IR體密度和線密度的測(cè)定，同時(shí)在每個(gè)視野中各選10個(gè)IR陽性點(diǎn)進(jìn)行積分光密度的測(cè)定。所得數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，用SAS軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果和討

11、論1.纖維粘連蛋白-IR物在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體內(nèi)的分布在牙髓中央?yún)^(qū)，纖維粘連蛋白-IR以條索狀和網(wǎng)狀兩種形式存在，條索狀者一般纖維粗大，數(shù)量少，多局限于中軸部分，沿血管和神經(jīng)分布，動(dòng)脈周圍多于靜脈。網(wǎng)狀者一般較條索狀纖維細(xì)小，數(shù)量多，廣泛存在于中軸以外的基質(zhì)中。從中軸向周邊，纖維由粗變細(xì)，和致密(1)。在多細(xì)胞區(qū)纖維粘連蛋白-IR物略為增粗，呈細(xì)條索網(wǎng)，經(jīng)成纖維細(xì)胞之間至乏細(xì)胞區(qū)。在乏細(xì)胞區(qū)纖維粘連蛋白-IR物更為細(xì)小，無方向性，彼此交織成網(wǎng)，并向成牙本質(zhì)細(xì)胞層延伸。在成牙本質(zhì)細(xì)胞層，纖維粘連蛋白-IR物匯集成束，經(jīng)成牙本質(zhì)細(xì)胞之間到達(dá)前期牙本質(zhì)(2)。前期牙本質(zhì)內(nèi)的纖維粘連蛋白-IR物尤為豐富

12、，纖維粗大密集，著色深；在成熟牙本質(zhì)內(nèi)，纖維粘連蛋白-IR物僅見于牙本質(zhì)小管與成牙本質(zhì)細(xì)胞突起之間的間隙內(nèi)，通過小管側(cè)支與相鄰牙本質(zhì)小管內(nèi)的纖維粘連蛋白-IR物相連。其他成熟牙本質(zhì)內(nèi)未見纖維粘連蛋白陽性反應(yīng)(3)。用PBS液代替一抗的對(duì)照片中未見纖維粘連蛋白的陽性反應(yīng)物。2.牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體內(nèi)纖維粘連蛋白-IR物的定量分析像定量分析牙髓和牙本質(zhì)內(nèi)纖維粘連蛋白-IR物的積分光密度，體密度，線密度與統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表。附表冠部牙髓和牙本質(zhì)內(nèi)纖維粘連蛋白-IR物的積分光密度，體密度，線密度均值(<"0 (881 bytes)" src="/med/cano/201003