千斤拔異戊烯基黃酮研究

1、千斤拔異戊烯基黃酮研究李 華1，李鳳嵐1，馬小軍1，2基金項目 廣西科學研究與技術開發(fā)計劃項目(0718009-2C) 通訊作者 *馬小軍，Tel（Tax）E-mail：xjma作者簡介 李華， 在讀博士，研究方向為植物化學，TelE-mail：lixian78101（1中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所, 北京 100094；2廣西藥用植物園，廣西 南寧 530023）摘要：目的：為進一步明確蔓性千斤拔的化學成分，特別是異戊烯基取代的黃酮類化合物。方法：采用硅膠、ODS反相硅膠和Sephadex LH-20凝膠柱層析，結合結晶

2、及重結晶等常規(guī)手段對該植物的醇提物進行系統(tǒng)的化學成分分離純化，并應用現(xiàn)代波譜學技術（包括MS、1H-NMR 和13C-NMR）結合其理化性質(zhì)對得到的單體化學物進行結構鑒定。結果：從蔓性千斤拔根75乙醇提取物中得到一系列化合物，鑒定結果表明，這些化合物分別為蔓性千斤拔素 A (1)（132 mg），auriculasin (2)（76 mg），6-C-prenylluteolin (3)（7 mg）、erythrinin B (4)（6 mg）、8-(1,1-dimethylallyl)genistein (5)（23 mg）、5,7,3',4'-tetrahydroxy-6,8

3、-diprenylisoflavone (6)（123 mg）、osajin (7)（3 mg），6, 8-diprenyleriodictyol (8)（1 mg）、蔓性千斤拔素 D (9)（11 mg）、dorsmanins(10)（9 mg）、flemichin D (11)（66 mg）、lupinifolin (12)（2 mg），eriosematin (13)（8 mg）等13個異戊烯基取代的黃酮類化合物。結論：以上化合物均屬于異戊烯基取代的黃酮類化合物，其中化合物17屬異黃酮，812屬二氫黃酮，13屬查耳酮?；衔?，7，8，10，12，13為首次從該植物中分離得到，其中3，8

4、，10，12，13為首次從千斤拔屬植物中分離得到。關鍵詞：蔓性千斤拔；化學成分；黃酮；異戊烯基黃酮Prenylated flavones from roots of Flemingia philippinensisHua Li 1 , Feng-lan Li 1 and Xiao-jun Ma 1,2*1Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100094, China2Guangxi Botan

5、ical Garden of Medicinal Plant, Nanning 530023, ChinaAbstract Objective: To investigate the compounds in the root of Flemingia philippinensis Merr.et Rolfe (Leguminosea), especially for the the prenylated flavonoids. Method: Silica gel column chromatography, ODS-silica gel, Sephadex LH-20 and recrys

6、tallization were emplayed to separated and purified the compounds from the residue extracted with 75% EtOH for dried roots of F. philippinensis. The structures of compounds were identified on the basis of spectral data (MS, 1H NMR and 13C NMR) and chemical evidence. Resluts: Thirteen prenylated flav

7、ones were identified as follows: flemiphilippinin A (1)，auriculasin (2)，6-C-prenylluteolin (3), erythrinin B (4), 8-(1,1-dimethylallyl)genistein (5), 5,7,3',4'-tetrahydroxy-6,8-diprenylflavanone (6), osajin (7), 6, 8-diprenyleriodictyol (8), flemiphilippinin D (9), dorsmanins(10), flemichin

8、D (11), lupinifolin (12), eriosematin (13). Conclusion: The compounds 3, 7, 8, 10, 12, 13 were isolated from the F. philippinensis for the first timeThe compounds 3, 8, 10, 12, 13 were isolated from the Flemingia genus for the first timeKey words Flemingia philippinensis; chemical constituents; flav

9、one；prenylated flavone 千斤拔（Flemingia philippinensis Merr.et Rolfe），即蔓性千斤拔，為豆科千斤拔屬植物，在我國主要分布于西南、中南和東南部地區(qū)，民間主要用以祛風除濕，消炎止痛，慢性腎炎，及治療一些婦科疾病1,2，現(xiàn)代藥理學研究表明其具有抗炎抗氧化，類激素作用3,4。蔓性千斤拔已被收入中華人民共和國藥典2005版附錄，該藥材及其中成藥“婦科千斤片”被收入地方藥典。目前報道千斤拔主要含有黃酮類化合物4-7，為了進一步明確該植物的化學成分，本研究對千斤拔根的化學成分進行了分離、純化及鑒定，得到12個異戊烯基取代的黃酮類物質(zhì)，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)

10、鑒定為蔓性千斤拔素 A (1), auriculasin (2), 6-C-prenylluteolin (3), erythrinin B (4), 8-(1,1-dimethylallyl) genistein (5), 5,7,3',4'-tetrahydroxy-6,8-diprenylflavanone (6)，osajin(7)，flemichin D（8），蔓性千斤拔素D（9），dorsmanins（10），lupinifolin（11），eriosematin（12）?；衔?，7，10，11，12為首次從該種植物中分離得到，其中3，10，11，12為首次從千斤

11、拔屬植物中分離得到。1 儀器與材料熔點用XT4-IOOX顯微熔點儀測定，溫度計未校正；NMR用Bruker DRX-500（Switzerland）（1H , 500 MHz；13C，125MHz）核磁共振儀測定；EI MS由Auto Spec-ultima 質(zhì)譜儀測定，電離電壓為70 eV；Sephadex LH-20為GE公司產(chǎn)品；ODS 反向硅膠為默克產(chǎn)品；柱層析硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品；薄層層析硅膠板為煙臺芝罘區(qū)黃務產(chǎn)品；溶劑均為分析純。實驗藥材于2006年4月采自廣西藥用植物園，由中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥用植物研究所生物技術中心馬小軍研究員鑒定為Flemingia philip

12、pinensis的根，標本儲存在中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥用植物研究所標本館。2 提取分離千斤拔根干樣品35 kg經(jīng)粉碎后, 75乙醇10倍體積回流提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮后得浸膏800 g，浸膏混懸于適量水中，石油醚脫脂，濃縮后得石油醚部位53 g（A部分），剩余部分濃縮得浸膏723 g，硅膠柱層析粗分，氯仿-甲醇梯度洗脫（1:0-20:1-10:1-5:1-0:1, v/v）得到B1(28 g), B2(18 g), B3(12 g)，B4(36 g)和B5(211g)五部分。采用硅膠、ODS和Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，結合結晶及重結晶等方法分別從A

13、部位得到化合物13（8 mg）,從B1 部位得到化合物1（132 mg），2（76 mg），3（7 mg）、4（6 mg）、5（23 mg）、6（123 mg）、7（3 mg），8（1mg）、9（11 mg）、10（9 mg）、11（66 mg）、12（2 mg）。3 結構鑒定化合物1 黃色針狀結晶（氯仿甲醇）。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 7.90(1H, s, H-2), 7.00(1H, s, H-2), 6.77(1H, d, J =8.0 Hz, H-5), 6.84(1H, d, J =8.0 Hz, H-6), 6.73(1H, s, H-4), 1.53(

14、6H, s, Me-6×2), 3.35(2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.23(1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.67(3H, s, Me-4), 1.80(3H, s, Me-4), 5.95(1H, dd, J =10.5, 17.5 Hz, H-2), 5.12 (1H, d, J =17.5 Hz, H trans -3), 5.07 (1H, d, J =10.5 Hz, Hcis -3), 1.39(6H, s, Me-4×2), 12.89(1H, br s, OH-5), 5.73(1H, br s, OH-3), 6.

15、43(1H, br s, OH-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻5報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為蔓性千斤拔素A。本研究首次報道了該化合物的13C-NMR (CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)，見表1?；衔?2 黃色針狀結晶（氯仿甲醇）。EI MS m/z: 420（M+）, 406, 405, 378, 377, 350, 349, 215。1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) : 8.05(1H, s, H-2), 7.07 (1H, d, J =2.0 Hz, H-2), 6.81(1H, d, J =8.0 Hz, H-5), 6.84(1H, dd, J =2.0, 8.0 Hz, H-

16、6), 6.69(1H, d, J =10.0 Hz, H-4), 5.65(1H, d, J =10.0 Hz, H-5), 1.45(6H, s, Me-6×2), 3.30(2H, m, H-1), 5.18(1H, m, H-2), 1.65(3H, s, Me-4), 1.78(3H, s, Me-4)。13C-NMR (CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻8報道一致，故鑒定該化合物為auriculasin。化合物 3 白色針狀結晶（甲醇水）。1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) : 8.00(1H, s, H-2), 6.36(1H, s,

17、H-8), 7.00 (1H, d, J =2.0 Hz, H-2), 6.80 (1H, d, J =8.0 Hz, H-5), 6.83(1H, dd, J =2.0, 8.0 Hz, H-6), 3.30(2H, d, J =6.5 Hz, H-1), 5.22(1H, m, H-2), 1.65(3H, s, Me-4), 1.77(3H, s, Me-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻9報道一致，故鑒定該化合物為6-C-prenylluteolin。 化合物4 白色針狀結晶（甲醇水）。1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) : 8.01(1H, s, H-2), 6.36(1H, s, H

18、-8), 7.35(1H, dd, J =2.0, 8.5 Hz, H-2, 6), 6.83(1H, dd, J =2.0, 8.5 Hz, H-3, 5), 3.31(2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.22(1H, m, H-2), 1.65(3H, s, Me-4), 1.77(3H, s, Me-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻5報道一致，故鑒定該化合物為erythrinin B。化合物5 微黃色片狀結晶（甲醇水）。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 7.91(1H, s, H-2), 6.32(1H, s, H-6), 7.42(1H, dd, J =8.5 H

19、z, H-2, 6), 6.90(1H, dd, J =8.5 Hz, H-3, 5), 6.45(1H, dd, J =11.5, 17.5 Hz, H-2), 5.12 (1H, d, J =17.5 Hz, H trans -3), 5.07 (1H, d, J =11.5 Hz, Hcis -3), 1.64(6H, s, Me-4×2) 。13C-NMR(CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻7報道一致，故鑒定該化合物為8-(1,1-dimethylallyl) genistein?；衔?6 黃色固體粉末（甲醇水）。ESI MS m/z: 421 MH。

20、1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 7.91(1H, s, H-2), 7.02 (1H, s, H-2), 6.85(1H, d, J =8.0 Hz, H-5), 6.82(1H, dd, J =1.5, 8.0 Hz, H-6), 3.48(2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.25(1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.71(3H, s, Me-4), 1.83(3H, s, Me-4), 3.46(2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.22(1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.77(3H, s, Me-4),

21、1.84(3H, s, Me-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻6報道一致，故鑒定該化合物為5,7,3',4'-tetrahydroxy-6,8-diprenylflavanone?；衔?7 白色針狀結晶（甲醇水）。ESI-MS m/z: 403 MH。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 7.86 (1H, s, H-2), 7.37 (2H, d, J =8.5 Hz, H-2, 6), 6.87 (2H, d, J =8.5 Hz, H-3, 5), 6.69 (1H, d, J =10.0 Hz, H-4), 5.59 (1H, d, J =10.0 Hz, H-5)

22、, 1.48 (6H, s, 6-CH3× 2), 3.35 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.24 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.68 (3H, s, 4-CH3), 1.81 (3H, s, 5-CH3)。13C-NMR(CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以上與文獻10報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為osajin?；衔?8白色針狀結晶（甲醇水）。ESI-MS m/z: 423 MH。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 5.33 (1H, dd, J =13.0, 3.0 Hz, H-2), 2.80 (1H

23、, dd, J =17.5, 3.0 Hz, Hcis-3), 3.05 (1H, dd, J =17.5, 13.0 Hz, Htrans-3), 7.20(2H, m, H-2, 6), 6.84 (1H, d, J 8.0 Hz, H-5), 3.32 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.21 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.54 (3H, s, 4-CH3), 1.73 (3H, s, 5-CH3), 3.39 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.33 (1H, m, H-2), 1.73(3H, s, 4-CH3), 1.79

24、 (3H, s, 5 -CH3), 12.00、6.02、5.97和5.18分別為4個羥基氫信號。以上與文獻11報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為6, 8-diprenyleriodictyol?；衔? 白色粉末狀固體（甲醇水）。ESI-MS m/z: 423 MH。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 5.52 (1H, dd, J =13.0, 3.0 Hz, H-2), 2.85 (1H, dd, J =17.0, 3.0 Hz, Hcis-3), 3.13 (1H, dd, J =17.0, 13.0 Hz, Htrans-3), 6.43 (2H, s, H-3,

25、5), 7.09 (1H, d, J 9.0 Hz, H-6), 3.29 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.15 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.70 (3H, s, 4-CH3), 1.76 (3H, s, 5-CH3), 3.36 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.23 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.72 (3H, s, 4-CH3), 1.82 (3H, s, 5 -CH3), 12.34、6.41、6.32和5.00分別為4個羥基氫信號。13C-NMR (CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以

26、上與文獻6報道的數(shù)據(jù)基本一致，故確定該化合物為蔓性千斤拔素D?；衔?10 黃色片狀結晶（甲醇水）。ESI MS m/z: 421 MH。1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) : 5.52 (1H, dd, J =3.0 , 12.5 Hz, H-2), 2.79 (1H, dd, J =17.0, 3.0 Hz, Hcis-3)和3.00 (1H, dd, J =17.0, 12.5 Hz, Htrans-3)提示該化合物為二氫黃酮。分子中除了含1個異戊烯基 3.21 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1)和5.14 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.6

27、0 (3H, s, 4-CH3), 1.66 (3H, s, 5-CH3)外，另外1個C-6位取代的異戊烯基與C-7位羥基成吡喃環(huán) 6.63 (1H, d, J =10.0 Hz, H-4), 5.49 (1H, d, J =10.0 Hz, H-5), 1.43 (3H, s, 6-CH3)和1.45 (3H, s, 6-CH3)。 6.98 (1H, br s, H-2), 6.89 (1H, d, J =8.0Hz, H-5 )和6.87 (1H, d, J =8.0 Hz, H-6)分別為B環(huán)3個質(zhì)子，與文獻7報道的數(shù)據(jù)略有出入，其B環(huán)質(zhì)子分別為 7.06 (1H, br s, H-6

28、), 6.88 (1H, br s, H-2, 5)，而13C-NMR(CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)（見表1）與文獻12報道的dorsmanins I 一致，故鑒定該化合物為dorsmanins I，并對其B環(huán)3個質(zhì)子信號歸屬進行了修正?；衔?11 黃色無定形固體（甲醇-水）。EI MS m/z: 422（M+）, 407, 404, 379, 378, 349。1H NMR（500 MHz, CDC13）: 5.55（1H, dd, J 3.0, 13.0 Hz，H-2）, 2.86（1H, dd, J 3.0, 17.0 Hz, H-3），3.07（1H, dd, J 13.0,

29、17.0 Hz, H-3）, 6.43（1H, d, J 2.0 Hz, H-3）, 6.41（1H, s, H-5）, 7.13（1H, d, J 8.0 Hz, H-6）, 6.63（1H, d, J =10.0 Hz, H-4）, 5.52（1H, d, J =10.0 Hz, H-5）, 1.44（6H, s, CH3-6×2）, 3.22（2H, d, J =7.0 Hz, H-1）, 5.11（1H, t, J =7.0 Hz, H-2）, 1.66（3H, s, CH3-4, 5）。13C-NMR (CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻6報道的f

30、lemichin D一致，故確定該化合物為flemichin D?；衔?12 黃色針晶（甲醇-水）。ESI MS m/z: 405 MH。1 H NMR(500 MHz，CDC13): 5.33(1H, dd, J 3.0, 12.5 Hz, H-2）, 2.80(1H, dd, J 3.0, 17.0 Hz, H-3), 3.03(1H, dd, J 12.5, 17.0 Hz, H-3), 6.87(2H, dd, J 3.0, 8.0 Hz, H-3,5)和7.32(2H, dd, J 3.0, 8.0 Hz, H-2, 6), 6.64(1H, d, J =10.0 Hz, H-4)

31、, 5.50(1H, d, J =10.0 Hz, H-5), 1.45(6H, s, CH3-6×2), 3.20(2H, d, J =7.0 Hz，H-1)，5.15(1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.45(3H, s, CH3-4), 1.47(3H, s, CH3-5)。13C NMR(125 MHz, CDCl3)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻13報道的lupinifolin一致，故確定該化合物為lupinifolin。化合物 13 黃色片狀結晶(乙酸乙酯)。EI MS m/z: 312(M), 297, 269, 241, 215, 187。1H-NMR (

32、CDCl3, 500 MHz) : 7.73 (1H, d, J =6.0 Hz, H-2), 6.19 (1H, d, J =6.0 Hz, H-3), 6.65 (1H, d, J=10.0Hz, H-4), 5.57 (1H, d, J =10.0 Hz, H-5), 1.46 (6H, s, 6-CH3× 2), 3.32 (2H, d, J =7.0 Hz, H-1), 5.22 (1H, t, J =7.0 Hz, H-2), 1.68 (3H, s, 4-CH3), 1.80 (3H, s, 5 -CH3)。結合13C-NMR給出19個信號，說明該化合物為異戊烯基取代的

33、色原酮。13C-NMR (CDCl3, 125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。以上與文獻14報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為eriosematin。表1 部分化合物的碳譜數(shù)據(jù) (125 MHz)Table 1. the 13C-NMR data of part compounds (125 MHz)C1257891012132152.9152.3151.6152.278.577.678.478.5155.03123.8118.0123.2123.443.342.043.243.0111.24181.6183.0181.3180.2196.5196.5196.4196.8182.05150.6158.

34、9161.2159.4159.0159.5156.6156.5150.66105.7102.6101.6112.5107.5107.9108.7102.8112.97156.9160.7161.7157.2162.6157.2160.0160.1157.28112.8107.0109.9100.5106.3106.9102.8108.7106.09158.7155.1159.2150.6157.8162.2159.3159.4159.010102.8114.2106.9105.5102.4102.8102.7102.6100.91112.8124.3123.0123.7131.6116.913

35、1.1130.62115.5125.3115.6130.2113.0155.5115.4127.63144.0146.7130.3115.6143.8104.3143.9115.54144.7147.3155.9155.3144.0157.1143.8156.15116.5116.8130.3115.6115.4107.8113.4115.56121.3123.8115.6130.2119.0128.1118.9127.6141.021.821.32149.0121.8121.53113.7134.6134.34111.7129.027.9115.217.817.8115.6115.5127.

36、25143.8116.227.9122.325.825.7126.0126.0115.0681.979.778.278.278.277.9(Me×2)-627.928.928.228.328.328.2121.422.621.321.221.921.521.421.22122.7122.3121.5121.5121.7122.5122.4121.93131.6132.6131.7134.0135.2131.8131.1131.6417.918.617.917.817.917.817.817.9525.726.425.825.825.825.725.725.8141.62147.031

37、11.8(Me×2)-428.4 圖1. 化合物1-13結構式Figure 1. the structures of compunds 1-13參考文獻：1 Jiang Su New Medical College, Encyclopedia of Chinese Materia Medica (中藥大辭典). Shanghai Science and Technology Publisher, Shanghai, 1977; 212.2 Editorial Committee of Chinese flora , Chinese Academy of Sciences. Chin

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