探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

1、探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化1實(shí)驗(yàn)原理:1 在含糖的液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)液)中酵母菌繁殖很快，迅速形成一個(gè)封閉容器內(nèi)的酵 母菌種群，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)可以測(cè)定封閉容器內(nèi)的酵母菌種群隨時(shí)間而發(fā)生的數(shù)量變化。2養(yǎng)分、空間、溫度和有毒排泄物等是影響種群數(shù)量持續(xù)增長(zhǎng)的限制因素。3 酵母菌計(jì)數(shù)方法：抽樣檢測(cè)法。先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入。多余培養(yǎng)液用濾紙吸去。 稍待片刻，待細(xì)菌細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部， 將計(jì)數(shù)板放在載物 臺(tái)的中央，計(jì)數(shù)一個(gè)小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量， 再以此為根據(jù)，估算試管中的酵母菌總數(shù)。注 意：從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾次。

2、儀器介紹：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造尸0.10nii1111放大i-J:A作)縱切血圖中間大疔格計(jì)數(shù)用中間大育恪議大后共4叩小格血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽， 構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面，刻有一個(gè)方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室其中共有400個(gè)小格，供微生物計(jì)數(shù)用。這一大方格的長(zhǎng)和寬各為1mm,深度為0.1mm,其體積為0.1mm3。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用以計(jì)數(shù)酵母菌為例(1) 樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計(jì)數(shù)，以每小方格內(nèi)含有 4-5個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可.(

3、2) 將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用擦鏡紙擦凈，在中央的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的厚玻片.(3) 將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余的菌液用吸水紙吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi).(4) 計(jì)數(shù)；五點(diǎn)取樣法3計(jì)算公式酵母細(xì)胞數(shù)/ml=每個(gè)小格酵母菌數(shù)目 X400 X104術(shù)釋倍數(shù)注釋：培養(yǎng)的時(shí)間不同取樣酵母菌的稀釋倍數(shù)是不同的。2 方法步驟：提出問(wèn)題t作出假設(shè)t討論探究思路t制定計(jì)劃t實(shí)施計(jì)劃t按計(jì)劃中確定的工作流程認(rèn)真操作，做好實(shí)驗(yàn)記錄t分析結(jié)果，得出結(jié)論t將記錄的數(shù)據(jù)用曲線圖表示出來(lái)。(一) 提出問(wèn)題：酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時(shí)間變化的？溫度會(huì)影響酵母菌的生

4、長(zhǎng)嗎？養(yǎng) 分會(huì)影響酵母菌的生長(zhǎng)嗎？(二) 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：將24支試管分成ABC三組，每組8支。A組為實(shí)驗(yàn)組，裝培養(yǎng)液10 mL , 酵母菌母液0.1mL，環(huán)境溫度28C。B組裝培養(yǎng)液10 mL ,酵母菌母液 0.1mL，環(huán)境溫度5C, 與A組形成溫度條件對(duì)照。 C組不裝培養(yǎng)液，只裝無(wú)菌水 10mL，酵母菌母液0.1mL，環(huán)境溫 度28 C，與A組形成營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)照。試管編號(hào)ARC1010:無(wú)菌采7eL10 1酵母0* 10.10. 1程度條件X-7 -5TCXJX（三）實(shí)驗(yàn)操作：1 配制無(wú)菌馬鈴薯培養(yǎng)液和酵母菌母液；2 預(yù)先設(shè)計(jì)分裝。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培養(yǎng)液到A組和B組試管，用另一

5、支10mL刻度吸管吸取10mL無(wú)菌水到C組試管。待分裝完畢，每支試管加塞后 把試管扎成捆后，然后用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基的名稱、組別、日期。3 .用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；（無(wú)菌條件避免其他菌）4接種菌種：用滅菌干凈的1mL刻度吸管每次吸取 O.ImL酵母菌母液，往每支試管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌數(shù)過(guò)多。）5. 培養(yǎng)：將A、C試管置于28 C的恒溫箱中培養(yǎng)。 將B試管置于5 C的恒溫箱中培養(yǎng)。 （5 C的恒溫箱可由某些型號(hào)冰箱保溫室設(shè)定5C時(shí)代替。）6 計(jì)數(shù)和記錄：本實(shí)驗(yàn)為 7天，每天取樣時(shí)間大體一致，每次每組按序號(hào)取一支試管。 計(jì)數(shù)過(guò)程中一定要遵守?zé)o菌操作規(guī)范，取樣的吸管要干凈且分開使

6、用，每次取樣前要試管振蕩搖勻。顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，后立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中。思考題1:如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取怎樣的措施？3分析結(jié)果，得出結(jié)論；將記錄的數(shù)據(jù)用曲線圖表示出來(lái)。 參考1: 一次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表次數(shù)12345678時(shí)間/h024487296120144168酵母菌數(shù)6(10 .mL-1 )A0.85.25.64.820.80.40.08B0.81.222.83.23.63.23C0.80.40.100000參考2:出A、B C各個(gè)處理的曲線圖每次閭隔2也小時(shí)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 :1. 為何用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板可計(jì)得樣品總菌值？敘述其實(shí)用范疇。a 計(jì)數(shù)室體積必定；b

7、在顯微鏡下， 不經(jīng)染色不能辨別菌體的逝世活， 使計(jì)數(shù)所得的數(shù)目為一定體積內(nèi)的總菌數(shù)， 從而計(jì)得樣品中總菌值。 實(shí)用范疇： 可單細(xì)胞存在的細(xì)菌酵母菌或顯絲狀生長(zhǎng)的真菌， 放線 菌所生的包子等。2. 為什么計(jì)數(shù)室內(nèi)不能有氣泡？試剖析產(chǎn)賭氣泡的可能原因。a 氣泡會(huì)盤踞計(jì)數(shù)室的空間，導(dǎo)致計(jì)數(shù)室中的菌體個(gè)數(shù)計(jì)數(shù)偏小，最后導(dǎo)致計(jì)數(shù)成果偏小。b 計(jì)數(shù)室內(nèi)的氣泡，可影響菌液的隨機(jī)散布，使計(jì)數(shù)發(fā)生誤差。 產(chǎn)生氣泡原因：a 操作不當(dāng)，先放菌液再蓋蓋玻片；b 計(jì)數(shù)室洗滌不清潔；c 蓋玻片移動(dòng)，造成空氣進(jìn)入而產(chǎn)生氣泡。3. 試剖析影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差起源及提出改進(jìn)辦法？1、儀器誤差：所用器材均應(yīng)干凈清潔，并且計(jì)數(shù)板計(jì)

8、數(shù)區(qū)不應(yīng)當(dāng)有擦痕。2、計(jì)數(shù)室內(nèi)可能有氣泡。由于酵母細(xì)胞并沒有染色，看起來(lái)是透明的，有氣泡很輕易被計(jì) 進(jìn)，使數(shù)值偏高；并且，氣泡會(huì)影響菌懸液的隨機(jī)散布。 改良：若產(chǎn)賭氣泡，則用吸水紙 吸出。3、菌體在計(jì)數(shù)板上散布不均，當(dāng)用選取5 格計(jì)數(shù)時(shí)，會(huì)造成很大誤差。改良：應(yīng)使菌液自然流入并混勻，進(jìn)行察看時(shí)盡可能多數(shù)幾個(gè)格子。4、配制稀釋液時(shí)汲取的濃渡過(guò)高或過(guò)低，導(dǎo)致稀釋液濃度和原液不成準(zhǔn)確比例，盤算時(shí)發(fā) 生誤差。應(yīng)將原液搖擺均勻后取中部的液體進(jìn)行稀釋。5、由于數(shù)菌體數(shù)目時(shí)視覺疲勞而導(dǎo)致的視覺誤差。應(yīng)多人察看，取記載均勻數(shù)。6、計(jì)數(shù)時(shí)可能將格四周的菌都盤算在內(nèi)了，使數(shù)值偏高。改良：謹(jǐn)遵一個(gè)規(guī)矩，計(jì)上不計(jì) 下

9、，計(jì)左不計(jì)右，不可以反復(fù)計(jì)數(shù)。7、可能呈現(xiàn)有出芽的酵母菌，將出芽的酵母菌按兩個(gè)計(jì)數(shù)了，使數(shù)值偏高。改進(jìn)：計(jì)數(shù)時(shí)， 只有當(dāng)芽體于母細(xì)胞一樣大的時(shí)候，才干計(jì)為兩個(gè)。8、微量移液器的最小量程太大，在加樣時(shí)，輕易加多，使蓋玻片鼓起，血球計(jì)數(shù)板所技巧 的體積變大，終極結(jié)果偏大。改進(jìn)：用量程的小的微量移液器并少加一些。計(jì)數(shù)時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？ 從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾次；如果酵母菌濃度過(guò)大，應(yīng) 先稀釋。 對(duì)于壓在中格界線上的酵母菌，一般只取相鄰兩邊及夾角計(jì)數(shù)； 對(duì)于已經(jīng)出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算；已死亡 的酵母菌不計(jì)數(shù)。 每個(gè)樣品一般計(jì)數(shù)三次，取其平均值。77JJ),11 1血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）A.正面圖；B.縱切面圖L血細(xì)胞計(jì)