第八章熒光分光光度法與檢測(cè)技術(shù)

1、分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材1第八章第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)及應(yīng)用熒光分析法檢測(cè)技術(shù)及應(yīng)用 學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)目的 知識(shí)要求知識(shí)要求 能力要求能力要求 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材2學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)目的u通過通過學(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理，產(chǎn)生熒光的條件以學(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理，產(chǎn)生熒光的條件以及熒光光譜特征和用途，加深對(duì)熒光分析的依據(jù)、條及熒光光譜特征和用途，加深

2、對(duì)熒光分析的依據(jù)、條件和應(yīng)用的理解，并能選擇熒光物質(zhì)的激發(fā)波長(zhǎng)和熒件和應(yīng)用的理解，并能選擇熒光物質(zhì)的激發(fā)波長(zhǎng)和熒光波長(zhǎng)進(jìn)行分析。為學(xué)習(xí)藥物分析、天然藥物化學(xué)等光波長(zhǎng)進(jìn)行分析。為學(xué)習(xí)藥物分析、天然藥物化學(xué)等專業(yè)課程奠定基礎(chǔ)。專業(yè)課程奠定基礎(chǔ)。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材3知識(shí)要求知識(shí)要求u熟悉熟悉掌握熒光和磷光產(chǎn)生的原理和特點(diǎn)及區(qū)別；激掌握熒光和磷光產(chǎn)生的原理和特點(diǎn)及區(qū)別；激發(fā)光譜與熒光光譜的概念及用途；溶液熒光光譜的發(fā)光譜與熒光光譜的概念及用途；溶液熒光光譜的特征；產(chǎn)生熒光的

3、條件；熒光定量分析的依據(jù)、條特征；產(chǎn)生熒光的條件；熒光定量分析的依據(jù)、條件和方法。了解件和方法。了解。u了解了解影響熒光強(qiáng)度的因素，熒光分析儀器及其與紫影響熒光強(qiáng)度的因素，熒光分析儀器及其與紫外外- -可見分光光度計(jì)的區(qū)別，熒光分析新技術(shù)可見分光光度計(jì)的區(qū)別，熒光分析新技術(shù)在分析在分析中的應(yīng)用。中的應(yīng)用。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材4能力要求能力要求u掌握熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)及儀器的基本操作掌握熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)及儀器的基本操作方法，學(xué)會(huì)使用熒光分光光度計(jì)對(duì)藥物進(jìn)行

4、分析的方法，學(xué)會(huì)使用熒光分光光度計(jì)對(duì)藥物進(jìn)行分析的操作技術(shù)。操作技術(shù)。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材5第一節(jié) 熒光分光光度法的基本原理 u某些物質(zhì)吸收紫外某些物質(zhì)吸收紫外-可見光后，可以發(fā)射其波長(zhǎng)比可見光后，可以發(fā)射其波長(zhǎng)比吸收光更長(zhǎng)的光，并且隨照射光的消失而消失，這吸收光更長(zhǎng)的光，并且隨照射光的消失而消失，這種發(fā)射光稱為熒光（種發(fā)射光稱為熒光（fluorescence）。）。u熒光分析法（熒光分析法（fluorometry）是利用某些物質(zhì)發(fā)射熒）是利用某些物質(zhì)發(fā)射熒光的特性進(jìn)

5、行定性、定量分析的光學(xué)分析方法，又光的特性進(jìn)行定性、定量分析的光學(xué)分析方法，又稱熒光光譜法稱熒光光譜法分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材6第一節(jié) 基本原理一、熒光的產(chǎn)生過程一、熒光的產(chǎn)生過程（一）單重態(tài)與三重態(tài)（一）單重態(tài)與三重態(tài)A 單重基態(tài)單重基態(tài) B 激發(fā)單重態(tài)激發(fā)單重態(tài) C 激發(fā)三重態(tài)激發(fā)三重態(tài)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材7第一節(jié) 基本原理（二）熒光的產(chǎn)生（

6、二）熒光的產(chǎn)生 電子由激發(fā)單重態(tài)電子由激發(fā)單重態(tài)基態(tài)單重態(tài)的躍基態(tài)單重態(tài)的躍遷遷分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材8第一節(jié) 基本原理（二）磷光的產(chǎn)生（二）磷光的產(chǎn)生 電子由激發(fā)三重態(tài)電子由激發(fā)三重態(tài)基態(tài)單重態(tài)的躍遷基態(tài)單重態(tài)的躍遷分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材9第一節(jié) 基本原理二、二、激發(fā)光譜和熒光光譜（發(fā)射光譜）激發(fā)光譜和熒光光譜（發(fā)射光譜）分析化學(xué)（第分析化學(xué)（

7、第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材10第一節(jié) 基本原理 任何熒光物質(zhì)都具有兩個(gè)特征光譜：任何熒光物質(zhì)都具有兩個(gè)特征光譜：激發(fā)光譜和熒光光譜（發(fā)射光譜）激發(fā)光譜和熒光光譜（發(fā)射光譜）激發(fā)光譜是當(dāng)熒光波長(zhǎng)一定時(shí)，熒光強(qiáng)度隨激發(fā)光激發(fā)光譜是當(dāng)熒光波長(zhǎng)一定時(shí)，熒光強(qiáng)度隨激發(fā)光波長(zhǎng)而變化的關(guān)系曲線（以激發(fā)光波長(zhǎng)波長(zhǎng)而變化的關(guān)系曲線（以激發(fā)光波長(zhǎng)ex為橫坐標(biāo)為橫坐標(biāo)，熒光的發(fā)光強(qiáng)度，熒光的發(fā)光強(qiáng)度F為縱坐標(biāo)的光譜）。為縱坐標(biāo)的光譜）。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)

8、衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材11第一節(jié) 基本原理熒光光譜是當(dāng)使激發(fā)光波長(zhǎng)和強(qiáng)度不變，而讓熒光光譜是當(dāng)使激發(fā)光波長(zhǎng)和強(qiáng)度不變，而讓物質(zhì)物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光通過發(fā)射分光系統(tǒng)所產(chǎn)生的熒光通過發(fā)射分光系統(tǒng) ( II )分光，測(cè)定每分光，測(cè)定每一發(fā)射波長(zhǎng)熒光強(qiáng)度一發(fā)射波長(zhǎng)熒光強(qiáng)度F，以發(fā)射光波長(zhǎng)，以發(fā)射光波長(zhǎng)em為橫坐標(biāo)為橫坐標(biāo)，熒光的發(fā)光強(qiáng)度，熒光的發(fā)光強(qiáng)度F為縱坐標(biāo)作圖所得的關(guān)系曲線。為縱坐標(biāo)作圖所得的關(guān)系曲線。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材12第一

9、節(jié) 基本原理 溶液熒光光譜具有如溶液熒光光譜具有如下特征：下特征： 斯托克斯位移斯托克斯位移 熒光光譜的形狀與激熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)發(fā)波長(zhǎng)無關(guān) 熒光光譜與激發(fā)光譜熒光光譜與激發(fā)光譜的鏡像關(guān)系的鏡像關(guān)系蒽的激發(fā)光譜（虛）和熒光光譜（實(shí)）蒽的激發(fā)光譜（虛）和熒光光譜（實(shí)）分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材13第一節(jié) 基本原理三、熒光與分子結(jié)構(gòu)三、熒光與分子結(jié)構(gòu) （一）熒光物質(zhì)的特征（一）熒光物質(zhì)的特征具有強(qiáng)的可見具有強(qiáng)的可見-紫外吸收，即具有紫外吸收，即具有K帶強(qiáng)吸收帶強(qiáng)吸收具

10、有高的熒光效率具有高的熒光效率熒光效率熒光效率F發(fā)射熒光的量子數(shù)吸收激發(fā)光的量子數(shù)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材14第一節(jié) 基本原理（二）分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系二）分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系大的共軛大的共軛鍵結(jié)構(gòu)鍵結(jié)構(gòu)ex（激發(fā)） em（激發(fā)）F苯2052780.11萘2863210.29蒽3654000.46四苯3904800.60分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材15第

11、一節(jié) 基本原理分子的剛性和共平面性分子的剛性和共平面性取代基的影響取代基的影響聯(lián)苯聯(lián)苯F =0.18芴芴F=1.0 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材16第一節(jié) 基本原理（三）影響熒光強(qiáng)度的外界因素（三）影響熒光強(qiáng)度的外界因素溫度溫度溶劑溶劑溶液酸堿性溶液酸堿性熒光熄滅劑熒光熄滅劑散射光散射光激發(fā)光源激發(fā)光源分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材17第一節(jié) 基本原理 （四）

12、熒光分光光度計(jì)（四）熒光分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)振等許多物理參數(shù), ,從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。結(jié)構(gòu)情況。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材18第一節(jié) 基本原理（一）儀器類

13、型（一）儀器類型濾光片熒光計(jì)濾光片熒光計(jì)濾光片濾光片-單色器熒光計(jì)單色器熒光計(jì)熒光分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材19第一節(jié) 基本原理（二）熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)（二）熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)1.光源光源 2. 4. 7. 9. 狹縫狹縫3. 激發(fā)單色器激發(fā)單色器 5. 樣品池樣品池6. 表面吸光物質(zhì)表面吸光物質(zhì)8. 發(fā)射單色器發(fā)射單色器10. 檢測(cè)器檢測(cè)器 11. 放大器放大器 12. 指示器指示器 13. 記錄器記錄器分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版

14、）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材20第一節(jié) 基本原理光源光源 目前最常用的是氙燈目前最常用的是氙燈單色器（分光系統(tǒng)）單色器（分光系統(tǒng)）激發(fā)單色器激發(fā)單色器 發(fā)射單色器發(fā)射單色器樣品池樣品池 測(cè)定熒光用的樣品池必須用低熒光材料或石英測(cè)定熒光用的樣品池必須用低熒光材料或石英檢測(cè)器檢測(cè)器 光電倍增管光電倍增管分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材21第一節(jié) 基本原理（三）儀器校準(zhǔn)（三）儀器校準(zhǔn)靈敏度校準(zhǔn)靈敏度

15、校準(zhǔn)波長(zhǎng)校準(zhǔn)波長(zhǎng)校準(zhǔn)激發(fā)光譜和發(fā)射光譜校準(zhǔn)激發(fā)光譜和發(fā)射光譜校準(zhǔn)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材22請(qǐng)您比較熒光分光光度計(jì)與紫外請(qǐng)您比較熒光分光光度計(jì)與紫外- -可見分光可見分光光度計(jì)的主要區(qū)別光度計(jì)的主要區(qū)別 第一節(jié) 基本原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材23點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累熒光和磷光在實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象上的區(qū)別：激發(fā)光停止照射熒光和磷光在實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象上的區(qū)別：激發(fā)光停止照射

16、時(shí)，熒光隨之消失而磷光則將延續(xù)一段時(shí)間。時(shí)，熒光隨之消失而磷光則將延續(xù)一段時(shí)間。最強(qiáng)熒光波長(zhǎng)最強(qiáng)熒光波長(zhǎng)em和最強(qiáng)激發(fā)波長(zhǎng)和最強(qiáng)激發(fā)波長(zhǎng)ex是物質(zhì)的定性是物質(zhì)的定性依據(jù)，也是定量測(cè)定時(shí)的最適宜波長(zhǎng)。依據(jù)，也是定量測(cè)定時(shí)的最適宜波長(zhǎng)。強(qiáng)熒光物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)體征：一、具有長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)，強(qiáng)熒光物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)體征：一、具有長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)，如芳香環(huán)、稠環(huán)或雜環(huán)；二、剛性和共平面性。如芳香環(huán)、稠環(huán)或雜環(huán)；二、剛性和共平面性。影響熒光強(qiáng)度的主要因素是分子結(jié)構(gòu)與外界條件影響熒光強(qiáng)度的主要因素是分子結(jié)構(gòu)與外界條件。第一節(jié) 基本原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全

17、國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材第二節(jié) 熒光定量分析第二節(jié)第二節(jié) 熒光定量分析熒光定量分析由于熒光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同，其吸收光的波長(zhǎng)不同，由于熒光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同，其吸收光的波長(zhǎng)不同，發(fā)射出熒光的波長(zhǎng)也不同，這就是熒光分光光度法發(fā)射出熒光的波長(zhǎng)也不同，這就是熒光分光光度法對(duì)能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)進(jìn)行定性分析的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)對(duì)能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)進(jìn)行定性分析的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)證證明明，在稀溶液中，熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正，在稀溶液中，熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比，這是熒光分光光度法對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定量分析比，這是熒光分光光度法對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定量分析的依據(jù)。的依據(jù)。24分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第

18、2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材第二節(jié) 熒光定量分析一、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系一、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系 當(dāng)溶液中熒光物質(zhì)的濃度為當(dāng)溶液中熒光物質(zhì)的濃度為c，液層厚度為（吸收，液層厚度為（吸收池內(nèi)徑）池內(nèi)徑）L時(shí)，由于熒光強(qiáng)度時(shí)，由于熒光強(qiáng)度F正比于被熒光物質(zhì)吸正比于被熒光物質(zhì)吸收光的強(qiáng)度：收光的強(qiáng)度：F（I0 I），用線性方程表示為），用線性方程表示為：F = K（I0 I）25分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十

19、二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材第二節(jié) 熒光定量分析 K為常數(shù)，稱熒光比率，其大小取決于一定條為常數(shù)，稱熒光比率，其大小取決于一定條件下的熒光效率，結(jié)合比爾定律可得到下式：件下的熒光效率，結(jié)合比爾定律可得到下式：F = 2.303FI0cL 入射光強(qiáng)度入射光強(qiáng)度I0在波長(zhǎng)一定，光源穩(wěn)定時(shí)為固定在波長(zhǎng)一定，光源穩(wěn)定時(shí)為固定值，因此可以將值，因此可以將2.303FI0L視為常數(shù)視為常數(shù)K，故：，故：F = Kc26分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材第二節(jié) 熒光定量分析 當(dāng)其他條件也一定時(shí)，

20、熒光物質(zhì)在稀溶液中的當(dāng)其他條件也一定時(shí)，熒光物質(zhì)在稀溶液中的熒光強(qiáng)度與濃度呈線性關(guān)系，這是熒光定量分析的熒光強(qiáng)度與濃度呈線性關(guān)系，這是熒光定量分析的依據(jù)。依據(jù)。但只有當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度很小時(shí)，但只有當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度很小時(shí)， 即即cL 0.05，這種關(guān)系才成立。，這種關(guān)系才成立。27分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材28課堂互動(dòng)課堂互動(dòng)請(qǐng)您分析為什么熒光分光光度法的靈敏度請(qǐng)您分析為什么熒光分光光度法的靈敏度比紫外比紫外- -可見分光光度法要高？可見分光光度法要高？第二節(jié) 熒光定量分析分

21、析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材29第二節(jié) 熒光定量分析二、定量分析方法二、定量分析方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列濃度為配制一系列濃度為c1、c2、c3對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液，分別測(cè)其分別測(cè)其F1、F2、F3值，用值，用Fc作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線。 然后在同樣條件下測(cè)定試樣溶液的然后在同樣條件下測(cè)定試樣溶液的Fx，在標(biāo)準(zhǔn)，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對(duì)應(yīng)的濃度曲線上查找對(duì)應(yīng)的濃度cx。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)

22、高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材30第二節(jié) 熒光定量分析比例法比例法 若熒光分析標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，則可選擇其線性范圍若熒光分析標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，則可選擇其線性范圍用比例法測(cè)定。即配制一對(duì)照品溶液（用比例法測(cè)定。即配制一對(duì)照品溶液（cs）測(cè)其熒光強(qiáng)）測(cè)其熒光強(qiáng)度（度（Fs），再測(cè)定試樣溶液（），再測(cè)定試樣溶液（cx）的熒光強(qiáng)度（）的熒光強(qiáng)度（Fx），），然后進(jìn)行比較。測(cè)定時(shí)同樣要以空白（然后進(jìn)行比較。測(cè)定時(shí)同樣要以空白（F0）校正：）校正：s0sx0 xFFcFFcx0 xss0FFccFF分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生

23、部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材31第二節(jié) 熒光定量分析多組分混合物測(cè)定多組分混合物測(cè)定 與吸光度一樣，熒光強(qiáng)度也有加和性，因此混合物不需與吸光度一樣，熒光強(qiáng)度也有加和性，因此混合物不需經(jīng)過分離，可用解聯(lián)立方程的方法測(cè)定?？蛇x擇兩物經(jīng)過分離，可用解聯(lián)立方程的方法測(cè)定?？蛇x擇兩物質(zhì)不同的激發(fā)波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度測(cè)定，也可選擇不同質(zhì)不同的激發(fā)波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度測(cè)定，也可選擇不同熒光波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度測(cè)定，這樣選擇范圍比紫外熒光波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度測(cè)定，這樣選擇范圍比紫外-可見分光光度法廣泛?？梢姺止夤舛确◤V泛。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高

24、專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材32點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累當(dāng)其他條件（即當(dāng)其他條件（即F、I0、L）一定時(shí)，熒光物質(zhì)在）一定時(shí)，熒光物質(zhì)在稀溶液中的熒光強(qiáng)度稀溶液中的熒光強(qiáng)度F與濃度與濃度c成正比。成正比。熒光分析的定量方法與紫外熒光分析的定量方法與紫外-可見分光光度法基本相同可見分光光度法基本相同。第二節(jié) 熒光定量分析分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材33第三節(jié)應(yīng)用與發(fā)展一、熒光分析的應(yīng)用一、熒光分析的應(yīng)用 （一）有機(jī)化合物的熒光分析（一）

25、有機(jī)化合物的熒光分析芳香族及具有芳香結(jié)構(gòu)的化合物，因存在共軛體系在芳香族及具有芳香結(jié)構(gòu)的化合物，因存在共軛體系在紫外光照射下很多能發(fā)射熒光。為提高測(cè)定靈敏度和紫外光照射下很多能發(fā)射熒光。為提高測(cè)定靈敏度和選擇性，可使弱熒光物質(zhì)與某些熒光試劑作用，以得選擇性，可使弱熒光物質(zhì)與某些熒光試劑作用，以得到強(qiáng)熒光性產(chǎn)物。因此，熒光分析法在有機(jī)物測(cè)定方到強(qiáng)熒光性產(chǎn)物。因此，熒光分析法在有機(jī)物測(cè)定方面的應(yīng)用很廣。面的應(yīng)用很廣。第三節(jié)應(yīng)用與發(fā)展第三節(jié)應(yīng)用與發(fā)展分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材34

26、第三節(jié)應(yīng)用與發(fā)展（二）無機(jī)化合物的熒光分析（二）無機(jī)化合物的熒光分析 直接熒光法直接熒光法 熒光猝滅法熒光猝滅法催化熒光法催化熒光法分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材35第三節(jié)應(yīng)用與發(fā)展二、熒光分析新技術(shù)二、熒光分析新技術(shù) 激光熒光分析激光熒光分析 時(shí)間分辨熒光分析時(shí)間分辨熒光分析 同步熒光分析同步熒光分析 膠束增敏熒光分析膠束增敏熒光分析三維熒光光譜分析三維熒光光譜分析原油試樣在環(huán)乙烷中的原油試樣在環(huán)乙烷中的等角三維投影光譜圖等角三維投影光譜圖分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝

27、慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材36第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用一、選擇題(一)單項(xiàng)選擇題1. 熒光光譜屬于（ ）。A、吸收光譜 B、發(fā)射光譜 C、紅外光譜 D、質(zhì)譜2. 分子熒光分析比紫外-可見分光光度法選擇性高的原因是（ ）。A、能發(fā)射熒光的物質(zhì)比較少 B、分子熒光光譜為線狀光譜，而分子吸收光譜為帶狀光譜C、熒光波長(zhǎng)比相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)稍長(zhǎng)D、熒光光度計(jì)有兩個(gè)單色器，可以更好地消除組分間的相互干擾目標(biāo)檢測(cè)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專

28、業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材37第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用3. 熒光量子效率是指（ ）。A、熒光強(qiáng)度與吸收光強(qiáng)度之比 B、發(fā)射熒光的量子數(shù)與吸收激發(fā)光的量子數(shù)之比C、發(fā)射熒光的分子數(shù)與物質(zhì)的總分子數(shù)之比 D、激發(fā)態(tài)的分子數(shù)與基態(tài)的分子數(shù)之比4. 一種物質(zhì)能否發(fā)出熒光主要取決于（ ）。A、分子結(jié)構(gòu) B、激發(fā)光的波長(zhǎng) C、溫度 D、溶劑的極性分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材38第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用5. 下列敘述中，錯(cuò)誤的是（ ）。A、熒光分析的待測(cè)物應(yīng)含

29、有大鍵 B、紫外分光光度法待測(cè)物應(yīng)含有鍵C、質(zhì)譜法待測(cè)物應(yīng)含離子 D、氣象色譜分析物的沸點(diǎn)應(yīng)較低6. 下列因素會(huì)導(dǎo)致熒光效率下降的有（ ）。A、激發(fā)光強(qiáng)度下降 B、溶劑極性變小 C、溫度下降 D、溶劑中含有鹵素離子分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材39第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用7. 熒光波長(zhǎng)與相應(yīng)激發(fā)光波長(zhǎng)相比（ ）。A、前者較長(zhǎng) B、后者較長(zhǎng) C、兩者相等 D、關(guān)系不確定8. 熒光光譜分析的主要優(yōu)點(diǎn)是（ ）。A、準(zhǔn)確度高 B、操作簡(jiǎn)便 C、儀器簡(jiǎn)單 D、靈敏度高9. 熒光分

30、光光度計(jì)與分光光度計(jì)的主要區(qū)別在于（ ）。A、光源 B、單色器 C、光路 D、檢測(cè)器分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材40第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用（二）多項(xiàng)選擇題1. 下列關(guān)于分子熒光分析特點(diǎn)的敘述正確的是（ ）。A、檢測(cè)靈敏度高 B、用量大，分析時(shí)間長(zhǎng) C、用量少，操作簡(jiǎn)便 D、選擇性強(qiáng) E、應(yīng)用廣泛2. 分子中有利于提高熒光效率的結(jié)構(gòu)特征是（ ）。A、雙鍵數(shù)目較多 B、共軛雙鍵數(shù)目較多 C、含重金屬原子 D、分子為平面剛性 E、苯環(huán)上有給電子基團(tuán)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材41第八章 熒光分析法檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用3.下列躍遷方式屬于無輻射躍遷的有（ ）。A、振動(dòng)弛豫 B、內(nèi)轉(zhuǎn)換 C、體系間跨越 D、熒光發(fā)射 E、磷光發(fā)射4. 分子熒光法與紫外-可見分光光法的主要區(qū)別為（ ）。A、分析方法不同 B、儀器結(jié)構(gòu)不同 C、靈敏度不同 D、光譜帶個(gè)數(shù)不同 E、光源不同分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材42第八章 熒光分析