實(shí)驗(yàn)八-鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵

1、實(shí)驗(yàn)七 鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）掌握研究顯色反應(yīng)的一般方法。（2）掌握鄰二氮菲分光光度法測(cè)定鐵的原理和方法。（3）熟悉繪制吸收曲線的方法，正確選擇測(cè)定波長(zhǎng)。（4）學(xué)會(huì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法。（5）通過鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵在未知式樣中的含量，掌握 721 型，723 型分 光光度計(jì)的正確使用方法，并了解此儀器的主要構(gòu)造。二、原理：可見分光光度法測(cè)定無機(jī)離子，通常要經(jīng)過兩個(gè)過程，一是顯色過程，二是測(cè)量過程。 為了使測(cè)定結(jié)果有較高靈敏度和準(zhǔn)確度， 必須選擇合適的顯色條件和測(cè)量條件， 這些條件主 要包括入射波長(zhǎng)，顯色劑用量，有色溶液穩(wěn)定性，溶液酸度干擾的排除。（1）入射光波

2、長(zhǎng)：一般情況下，應(yīng)選擇被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)的光為入射光。（ 2） 顯色劑用量：顯色劑的合適用量可通過實(shí)驗(yàn)確定。（3）溶液酸度：選擇適合的酸度，可以在不同 PH 緩沖溶液中加入等量的被測(cè)離子和顯色劑，測(cè)其吸光度，作 DA-PH曲線，由曲線上選擇合適的PH范圍。（4）有色配合物的穩(wěn)定性：有色配合物的顏色應(yīng)當(dāng)穩(wěn)定足夠的時(shí)間。（5）干擾的排除： 當(dāng)被測(cè)試液中有其他干擾組分共存時(shí)， 必須爭(zhēng)取一定的措施排除干擾。鄰二氮菲與Fe2*在溶液中形成穩(wěn)定橙紅色配合物。配合無的e =1.1 %10 mol -1°cm配合物配合比為3: 1, PH在2-9一般維持在 PH5-6之間。在復(fù)原劑存在下，顏色可

3、 保持幾個(gè)月不變。Fe3+ 與鄰二氮菲作用形成淡藍(lán)色配合物穩(wěn)定性教差，因此在實(shí)際應(yīng)用中加入復(fù)原劑使 Fe 3+復(fù)原為 Fe2+ 與顯色劑鄰二菲作用，在加入顯色劑之前，用的復(fù)原劑是鹽 酸羥胺。 此方法選擇性高 Br3+ 、Ca2+ 、Hg 2+、Zn2+ 及 Ag+ 等離子與鄰二氮菲作用生成沉淀， 干擾測(cè)定， 相當(dāng)于鐵量 40 倍的 Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+ 、Zn2+ 、Sio32- ， 20 倍的 Cr3+、Mn 2+、 VP&45倍的Co2+ - Ni2+ C0等離子不干擾測(cè)定。三、儀器與試劑：1 、 儀器： 721 型 723 型分光光度計(jì)500ml 容量瓶 1 個(gè)

4、， 50 ml 容量瓶 7個(gè)， 10 ml 移液管 1 支5ml 移液管支， 1 ml 移液管 1 支，滴定管 1 支，玻璃棒 1 支，燒杯 2 個(gè)，吸爾球 1個(gè)，天平一臺(tái)。2、試劑：1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液100ug m,準(zhǔn)確稱取鐵鹽 NH4Fe(SO4)2 122O置于燒杯中，加入鹽酸羥胺溶液，定量轉(zhuǎn)依入500ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度充分搖勻。2丨鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液10ug m.用移液管移取上述鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液10ml，置于100ml容量瓶中，并用蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻。3鹽酸羥胺溶液100g-11(用時(shí)配制)4鄰二氮菲溶液-1先用少量乙醇溶液，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。 5丨醋酸鈉溶液 T四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

5、與操作步驟：1、準(zhǔn)備工作(1) 清洗容量瓶，移液官及需用的玻璃器皿。(2) 配制鐵標(biāo)溶液和其他輔助試劑。(3) 開機(jī)并試至工作狀態(tài)，操作步驟見附錄。(4) 檢查儀器波長(zhǎng)的正確性和吸收他的配套性。2、鐵標(biāo)溶液的配制準(zhǔn)確稱取鐵鹽 NH4Fe(SO) 12H2O置于燒杯中，加入10mlHCL加少量水。溶解入 500ml容量瓶中加水稀釋到容量瓶刻度。3、繪制吸收曲線選擇測(cè)量波長(zhǎng)取兩支50ml干凈容量瓶，移取100 g m l-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液容量瓶中，然后在兩個(gè)容量瓶中各加入鹽酸羥胺溶液，搖勻，放置2min后各加入鄰二氮菲溶液，醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至刻度線搖勻，用 2cm吸收池，試劑空白為參比，在44

6、0 540nm間，每隔10nm測(cè)量一次吸光度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，確定最大吸收波長(zhǎng)1A nm440450460470480490A0. 290. 380. 440. 4850. 500. 52A nm500510520530540A0. 540. 570. 5020. 3690. 2574、工作曲線的繪制取50ml的容量瓶7個(gè),各加入g ml-1鐵標(biāo)準(zhǔn)，然后分別加入鄰二氮菲溶液， 醋酸鈉溶液, 用蒸餾水稀釋至刻度線搖勻，用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在選定波長(zhǎng)下測(cè)定并記錄各溶液光度，記當(dāng)格式參考下表：編號(hào)1#2#3#4#5#6#7#V鐵溶液ml0. 000. 200. 40

7、0. 600. 801 . 001 . 20A5、鐵含量的測(cè)定取1支潔凈的50ml容量瓶，加人含鐵未知試液,按步驟(6 )顯色，測(cè)量吸光度并記錄編號(hào)1#2#3#V(未知液)mlAC = 44.55mol ml-1CONC. =K *ABS+B6、結(jié)束工作測(cè)量完畢 ,關(guān)閉電源插頭 ,取出吸收池 , 清洗晾干后人盆保存 .清理工作臺(tái) ,罩上一 儀器防塵罩 ,填寫儀器使用記錄 .清洗容量瓶和其他所用的玻璃儀器并放回原處.五、討論：1、 在選擇波長(zhǎng)時(shí)，在440nm 450nm間每隔10nm測(cè)量一次吸光度，最后得出的入 mix=510nm,可能出在試劑未搖勻，提供的入 mix=508nm，如果再縮減一點(diǎn)

8、進(jìn)程，試齊充分搖 勻，靜置時(shí)間充分，結(jié)果會(huì)更理想一些。2、 在測(cè)定溶液吸光度時(shí)，測(cè)出了兩個(gè)9，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不太理想，可能是在配制溶液過程中的原因：a、配制好的溶液靜置的未到達(dá) 15min ； b、藥劑方面的問題是否在期限內(nèi)使用 未知 因從溶液顯色的效果看，顏色有點(diǎn)淡 ，要求在試劑的使用期限內(nèi)使用； c、移取試劑時(shí)操作的 標(biāo)準(zhǔn)度是否符合要求，要求一個(gè)人移取試劑。在配制試樣時(shí)不是一雙手自始至終， 因而所觀察到的結(jié)果因人而異， 導(dǎo)致最終結(jié)果偏差 較大，另外還有實(shí)驗(yàn)時(shí)的溫度，也是造成結(jié)果偏差的原因。 本次實(shí)驗(yàn)階段由于多人操作，因而致使最終結(jié)果不精確。 1 在操作中，我覺得應(yīng)該一人操作這樣才能減少誤差。2在

9、使用分光計(jì)時(shí)，使用同一標(biāo)樣，測(cè)同一溶液但就會(huì)得出不同的值。這可能有幾個(gè)原因：a、溫度，b、長(zhǎng)時(shí)間使用機(jī)器，使得性能降低，所以商量得不同值。在實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行當(dāng)中， 因?yàn)榧釉嚇拥牧慷加芯_的規(guī)定， 但是在操作中由于是手動(dòng)操作所以會(huì) 有微小的誤碼率差量， 但綜合了所有誤差量將成為一個(gè)大的誤差， 這將導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果 會(huì)產(chǎn)生較大的誤碼率差。在配制溶液時(shí)， 加入拭目以待試劑順序不能顛倒， 特別加顯色劑時(shí)， 以防產(chǎn)生反應(yīng)后影響操 作結(jié)果。六、結(jié)論：（1）溶液顯色， 是由于溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光的選擇的結(jié)果， 為了使測(cè)定的 結(jié)果有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度， 必須選擇合適的測(cè)量條件，如：入射波長(zhǎng)，溶液 酸度，度劑使用期

10、限 。（2）吸收波長(zhǎng)與溶液濃度無關(guān)， 不同濃度的溶液吸收都很強(qiáng)烈， 吸收程度 隨濃度的增加而增加， 成正比關(guān)系， 從而可以根據(jù)該部分波長(zhǎng)的光的吸收的程度 來測(cè)定溶液的濃度。（ 3） 此次試驗(yàn)結(jié)果雖不太理想，但讓我深有感觸，從中找到自己的不足，并且懂得不少試驗(yàn)操作方面的知識(shí)。 從無知到有知， 從不熟練到熟練使用使自己得到了很大的提高。 張麗輝1用鄰二氮菲法測(cè)定鐵時(shí)，為什么在測(cè)定前需要加入復(fù)原劑鹽酸羥胺？答：因?yàn)樵谕ǔＧ闆r下，鐵以三價(jià)存在，而只有二價(jià)鐵才能和鄰二氮菲發(fā)生反應(yīng)，所 以要將三價(jià)鐵用鹽酸羥胺復(fù)原到二價(jià)。2參比溶液的作用是什么？在本實(shí)驗(yàn)中可否用蒸餾水作參比？答：參比溶液的作用是扣除背景干擾

11、，不能用蒸餾水作參比，因?yàn)橹挥袇⒈群驮囈撼?分盡可能相近，測(cè)量的誤差才會(huì)越小。附錄：723 型操作步驟1、插上插座，按后面開關(guān)開機(jī)2、機(jī)器自檢吸光度和波長(zhǎng)，至顯示500。3、按OTO鍵，輸入測(cè)定波長(zhǎng)數(shù)值按回車鍵。4、將考比溶液空白溶液比色皿置于 R 位以消除儀器配對(duì)誤碼率差，拉動(dòng)試樣架拉桿，按。BS鍵從R、S1、S2、S3,逐一消除然后再檢查 12次看是否顯示0。000否則重新開始。5、按RAN按3鍵，回車，再按1鍵，回車。6、逐一輸入標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值,每輸一個(gè)按回車,全部輸完,再按回車。7、固定考比溶液比色皿第一格為參比溶液其余三格放標(biāo)準(zhǔn)試樣溶液,每測(cè)一值,拉桿拉一格，按 START/STOI全打印完，按回車8、 機(jī)器會(huì)自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線K、 B 值以及相關(guān)系 R。9、固定參比溶液比色皿,其余三格放入待測(cè)水樣