食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件

1、食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)n實(shí)驗(yàn)一 微生物培育n 基的配制和滅菌n實(shí)驗(yàn)二 放線菌和真n 菌形狀的察看實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 一一微生物培育基的配制和滅菌微生物培育基的配制和滅菌實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)資料與試劑實(shí)驗(yàn)程序滅菌與思索培育基種類培育基種類培育基配置步驟培育基配置步驟不同配方的培育基不同配方的培育基一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康膎了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制過了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制過程。程。n了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法、加壓了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法、加壓蒸汽滅菌法的原理及其運(yùn)用方法。蒸汽滅菌法的原理及其運(yùn)用方法。n熟習(xí)分別、培育微生物前的

2、有關(guān)預(yù)備任務(wù)及操熟習(xí)分別、培育微生物前的有關(guān)預(yù)備任務(wù)及操作方法。作方法。 二實(shí)驗(yàn)資料和試劑二實(shí)驗(yàn)資料和試劑n藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4K2HPO4、KNO3KNO3、MgSO4MgSO47H2O7H2O、FeSO4FeSO47H2O 7H2O 等。等。n儀器：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過儀器：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。濾器、紫外線殺菌燈。n其它物品：天平、牛角匙、電爐、其它物品：天平、牛角匙、電爐、1N HCl1N HCl、1N 1N NaOH

3、NaOH、pHpH試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培育皿、吸管、各種包裝紙、牛皮棉塞的空試管、培育皿、吸管、各種包裝紙、牛皮紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。三實(shí)驗(yàn)程序三實(shí)驗(yàn)程序n培育基的配制培育基的配制n三種培育基的配方及配制三種培育基的配方及配制n培育基和玻璃器材的培育基和玻璃器材的n 滅菌方法滅菌方法n據(jù)組成成分可分為據(jù)組成成分可分為: : n 1. 1.合成培育基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制合成培育基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定

4、比例配制成。成。 n 2.2.半合成培育基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分半合成培育基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。天然物質(zhì)配制而成。 3.3.天然培育基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。天然培育基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。n從培育基的物理形狀可分為從培育基的物理形狀可分為 1.1.液體培育基：不加凝固劑的液體形狀培育基。液體培育基：不加凝固劑的液體形狀培育基。 2.2.固體培育基：在液體培育基中參與固體培育基：在液體培育基中參與2%2%左右的凝固劑左右的凝固劑的固體形狀的培育基或農(nóng)副產(chǎn)品培育基。的固體形狀的培育基或農(nóng)副產(chǎn)品培育基。 3.3.半固體培育基：在液體培育基中參與

5、半固體培育基：在液體培育基中參與0.20.20.5%0.5%凝固凝固劑而成的半固體狀培育基。劑而成的半固體狀培育基。培育基的種類培育基的種類n據(jù)組成成分可分為據(jù)組成成分可分為: : n 1. 1.合成培育基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制合成培育基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制成。成。 n 2.2.半合成培育基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分半合成培育基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。天然物質(zhì)配制而成。 3.3.天然培育基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。天然培育基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。n從培育基的物理形狀可分為從培育基的物理形狀可分為 1.1.液體培育基：不加凝固劑的

6、液體形狀培育基。液體培育基：不加凝固劑的液體形狀培育基。 2.2.固體培育基：在液體培育基中參與固體培育基：在液體培育基中參與2%2%左右的凝固劑左右的凝固劑的固體形狀的培育基或農(nóng)副產(chǎn)品培育基。的固體形狀的培育基或農(nóng)副產(chǎn)品培育基。 3.3.半固體培育基：在液體培育基中參與半固體培育基：在液體培育基中參與0.20.20.5%0.5%凝固凝固劑而成的半固體狀培育基。劑而成的半固體狀培育基。培育基的種類培育基的種類常用凝固劑為瓊脂其次為明膠，又叫洋菜、凍粉。常用凝固劑為瓊脂其次為明膠，又叫洋菜、凍粉。常用凝固劑常用凝固劑培育基配制的根本步驟培育基配制的根本步驟n稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷

7、杯中。稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。n溶化：在搪瓷杯中參與所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。溶化：在搪瓷杯中參與所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。n調(diào)調(diào)pHpH值：用值：用1N NaOH1N NaOH或或1N HCl1N HCl調(diào)調(diào)pHpH，用，用pHpH試紙對照。試紙對照。n加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。n過濾過濾n分裝：留意不要污染棉塞。分裝：留意不要污染棉塞。n包扎成捆，掛上標(biāo)簽必需用鉛筆寫，注明何種培育基。包扎成捆，掛上標(biāo)簽必需用鉛筆寫，注明何種培育基。n滅菌滅菌n擺斜面擺斜面n滅菌備用：培育基滅菌后必需在滅菌備用：培

8、育基滅菌后必需在370C370C下恒溫培育下恒溫培育24h24h，確定無菌生長，確定無菌生長，方可運(yùn)用。方可運(yùn)用。按培育基按培育基配方稱量配方稱量加水加加水加熱熔化熱熔化調(diào)理調(diào)理pH值值過濾過濾分裝分裝包裝包裝滅菌滅菌檢查滅菌檢查滅菌徹底與否徹底與否分裝分裝擺斜面擺斜面培育基配制的根本步驟分裝分裝擺斜面擺斜面分裝分裝擺斜面擺斜面包扎包扎培育基配制的根本步驟牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基用于分別和培育細(xì)菌，牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基用于分別和培育細(xì)菌，是一種天然培育基配方如下：是一種天然培育基配方如下： 牛肉膏牛肉膏 3g 蛋白胨蛋白胨 5g 氯化鈉氯化鈉 3g 瓊脂瓊脂 20g 自來水自來水 1000mL

9、 pH 7.27.4 滅菌滅菌 0.1MPa，2530min 培育基的配方及配制培育基的配方及配制-1n汲取汲取 3030牛肉膏牛肉膏 2mL2mL；5050蛋白胨蛋白胨 2mL2mL；3030氯化鈉氯化鈉 2mL2mL；參與有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補(bǔ)足到；參與有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補(bǔ)足到200mL200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào)。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào) pH pH 至至7.47.4n加瓊脂加瓊脂4g4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試帶有棉塞的無菌試管，溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試帶有

10、棉塞的無菌試管，安裝安裝1 15 5的試管高度共的試管高度共1212支，作斜面培裝管。支，作斜面培裝管。n用鋁殼試管帽各裝用鋁殼試管帽各裝10ML10ML，越試管高度的，越試管高度的1 12 2以上，用以上，用作分別時(shí)倒平板用。作分別時(shí)倒平板用。以配制200mL培育基為例：30牛肉膏、50蛋白胨，30 氯化鈉用于活化菌種，或培育菌種的斜面用于保管菌種的斜面擱置斜面擱置斜面 當(dāng)培育基冷卻至當(dāng)培育基冷卻至5050左右時(shí)，將試管帶棉塞的一左右時(shí)，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要適宜，使培育基構(gòu)成的端擱在一根木棒上。擱置的長度要適宜，使培育基構(gòu)成的斜面的長度不超越試管總長的一半。斜面的長

11、度不超越試管總長的一半。注：試管加棉塞注：試管加棉塞( (最好最好) ) 培育基分裝終了以后，在管口培育基分裝終了以后，在管口上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的2/32/3在試管口內(nèi)，如以下圖所在試管口內(nèi)，如以下圖所示。示。培育基的配方及配制培育基的配方及配制-2-2n馬鈴薯或豆芽汁蔗糖或葡萄糖瓊脂培育基馬鈴薯或豆芽汁蔗糖或葡萄糖瓊脂培育基用于分別和培育真菌之用，是一種半合成培育基，用于分別和培育真菌之用，是一種半合成培育基，其配方如下：其配方如下： 去皮馬鈴薯去皮馬鈴薯 200g 蔗

12、糖或葡萄糖蔗糖或葡萄糖 20g 自來水自來水 1000mL 瓊脂瓊脂 20g pH 自然自然 滅菌：滅菌： 含蔗糖含蔗糖0.1MPa 20rainn 含葡萄糖含葡萄糖01kgcm 30min 馬鈴薯須煮沸馬鈴薯須煮沸30min30min之后，要用紗布過濾。之后，要用紗布過濾。培育基的配方及配制培育基的配方及配制-3-3n淀粉瓊脂培育基高氏一號淀粉瓊脂培育基高氏一號Gause1，用于分別和，用于分別和培育放線菌，是一種合成培育基。培育放線菌，是一種合成培育基。 n 可溶性淀粉可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g F

13、eSO4 7H2O 0.01g 瓊脂瓊脂 20g 自來水自來水 1000mL 滅菌：滅菌： 0.1Mpa, 30minn淀粉先用冷水調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中。淀粉先用冷水調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中。 無菌水的制備無菌水的制備 100mL三角燒瓶裝有玻璃珠，裝自來水45.0mL，試管中裝9.0mL自來水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。n清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培育清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培育皿、吸管等。皿、吸管等。n棉塞的制造棉塞的制造n包扎培育皿、涂棒和吸管等。包扎培育皿、涂棒和吸管等。 培育基和玻璃器材的滅菌方法培育基和玻璃器材的

14、滅菌方法n干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器n加壓蒸汽滅菌法加壓蒸汽滅菌法 其步驟如下：其步驟如下： 1.加水：滅菌器內(nèi)參與一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放加水：滅菌器內(nèi)參與一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。入其中。 2.通電：接通電源，進(jìn)展加熱。通電：接通電源，進(jìn)展加熱。 3. 排氣：排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥翻開，待排出大氣排氣：排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥翻開，待排出大氣后封鎖排氣閥；或封鎖排氣閥，待壓力上升到后封鎖排氣閥；或封鎖排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再時(shí)再翻開排氣閥，待壓力回復(fù)到翻開排氣閥，待壓力回復(fù)到0時(shí)再封

15、鎖排氣閥。時(shí)再封鎖排氣閥。 4.恒溫滅菌：當(dāng)壓力達(dá)恒溫滅菌：當(dāng)壓力達(dá)15bl/in2即即1.05kg/cm2時(shí)，此時(shí)時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為滅菌器內(nèi)的溫度為1210C，維持，維持30min。對熱不穩(wěn)定的培育基如。對熱不穩(wěn)定的培育基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延伸時(shí)間。含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延伸時(shí)間。 5.終了：滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才干翻開終了：滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才干翻開排氣閥，然后翻開滅菌器蓋，取出物品。排氣閥，然后翻開滅菌器蓋，取出物品。培育基和玻璃器材的滅菌方法培育基和玻璃器材的滅菌方法n間歇滅菌法：間歇滅菌法：

16、 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次，每次煮沸次煮沸1h，延續(xù)，延續(xù)3d反復(fù)進(jìn)展。在每兩次蒸煮之間，將反復(fù)進(jìn)展。在每兩次蒸煮之間，將物品指培育基放在物品指培育基放在370C恒溫條件下培育過夜，這恒溫條件下培育過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌生成營養(yǎng)體，樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌生成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。以便下次蒸煮時(shí)殺滅。n過濾除菌法：過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)如維生素、血清，普不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)如維生素、血清，普通可用細(xì)菌過濾器進(jìn)展除菌。通可用細(xì)菌過濾器進(jìn)展除菌。n紫外線滅菌法：紫外線滅菌法

17、： 普通普通30W燈管，燈管，9m3空間，距地面空間，距地面2m每次翻開紫外每次翻開紫外線照射線照射0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。假設(shè)照射紫外線時(shí)，就使室內(nèi)空氣滅菌。假設(shè)照射紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可加強(qiáng)滅菌效果。紫外先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可加強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及外表殺菌。及外表殺菌。n化學(xué)藥劑消毒滅菌：化學(xué)藥劑消毒滅菌： 微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精