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1、畢業(yè)論文(設(shè)計)題 目 學(xué) 院 學(xué) 院 專 業(yè) 學(xué)生姓名 學(xué) 號 年級 級 指導(dǎo)教師 教務(wù)處制表二一三 年 三月 二十 日口腔醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文范文本團(tuán)隊專業(yè)從事口腔醫(yī)學(xué)論文寫作與論文發(fā)表服務(wù),擅長案例分析、數(shù)據(jù)統(tǒng)計、圖表繪制以及口腔醫(yī)學(xué)相關(guān)理論分析等。??票究普撐?00起,具體價格可咨詢客服【論文伍老師Q Q: 300-409-83】口腔醫(yī)學(xué)論文題目:復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔微生態(tài)的研究【論文主要內(nèi)容】:研究背景、目的和意義復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(Recurrent Oral Ulcer,ROU,又稱“復(fù)發(fā)性口瘡”、“復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍”(Recurrent Aphthous Ulcer,RAU或“復(fù)發(fā)性阿弗他口

2、炎”(Recurrent Aphthous Stomatitis,RAS,是專指一類原因不明,具有周期性反復(fù)發(fā)作但又具自限性的局限性口腔粘膜潰瘍性損傷。該病是口腔粘膜病中最常見的潰瘍類疾病,患病率高達(dá)20%左右,居口腔粘膜病首位。復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病時病變部疼痛劇烈,對患者工作與生活造成重要影響。臨床尚無明確有效的治療方法。因此,ROU的病因及發(fā)病機(jī)制研究對進(jìn)一步的臨床治療研究具有重要作用。本病病因至今不清,多方面的病因研究表明,ROU的發(fā)生發(fā)展可能與多種因素有關(guān)。國內(nèi)外文獻(xiàn)已報道的病因方面的研究包括免疫學(xué)異常,病毒、細(xì)菌感染,微量元素、精神神經(jīng)因素、遺傳因素影響及微循環(huán)障礙等,但尚無確切定論。

3、正常人體的口腔、腸道、呼吸道、泌尿生殖道等,均定植一定數(shù)量的細(xì)菌,它們與宿主在長期進(jìn)化過程中形成了一個能獨(dú)立進(jìn)行物質(zhì)、能量交流的動態(tài)平衡的微生態(tài)系統(tǒng)。定居于口腔中的菌群稱為口腔正常菌群,它與宿主呈共棲的關(guān)系,他們彼此之間保持著動態(tài)平衡,對宿主起著有益和有害的雙重作用??谇恢械募?xì)菌,在正常情況下對宿主有多種有益的生理作用:如抵抗外來致病菌、產(chǎn)生多種營養(yǎng)物質(zhì)、促進(jìn)免疫應(yīng)答、產(chǎn)生過氧化物歧化酶(SOD、清除自由基(O_2-及抗腫瘤等作用。一旦微生態(tài)平衡遭到破壞,發(fā)生菌群失調(diào),上述生理作用發(fā)生改變,對宿主可能造成損傷。有學(xué)者提出ROU的發(fā)生發(fā)展可能與多因素相互作用有關(guān)。多方面的病因研究表明,ROU的發(fā)

4、生發(fā)展可能與多種因素有關(guān)??谇粌?nèi)環(huán)境與這些因素有著密切的關(guān)系。那么,ROU的發(fā)生發(fā)展是否與口腔的微生態(tài)相關(guān)呢?ROU患者口腔微生態(tài)是否發(fā)生了變化?又是哪些方面發(fā)生變化?本研究將從口腔菌群變化及口腔菌群構(gòu)成的角度,探討復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是否與口腔微生態(tài)變化有關(guān),為口腔潰瘍的防治探索新的依據(jù)。材料和方法一、唾液菌群涂片觀察收集臨床唾液標(biāo)本共62例。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對照組三組。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的20例ROU患者,其中男性6例,女性14例,平均年齡24.7±3.13歲;愈合組為臨床確診并處于愈合期的21例ROU患者,其中男性9例,女性12例,平均年齡25.9±6

5、.67歲;對照組為無ROU病史的21位健康成年人,其中男性9例,女性12例,平均年齡23.3±2.27歲。所有受試者均符合以下納入標(biāo)準(zhǔn):所有受檢查者取樣前1周內(nèi)未服用任何抗生素、鉍劑、抗酸劑及H_2受體拮抗劑,1月內(nèi)未服用類固醇藥物或非類固醇類抗炎藥,如阿司匹林等;無其他系統(tǒng)疾病;無其他口腔黏膜病:無中、重度牙周病。方法:唾液標(biāo)本直接涂片,革蘭氏染色,在顯微鏡10×100油鏡下,選取分布均勻的5個視野,分別計數(shù)各視野下細(xì)菌中革蘭氏陽性球菌(簡稱G+c、革蘭氏陰性球菌(簡稱G-c、革蘭氏陽性桿菌(簡稱G+b、革蘭氏陰性桿菌(簡稱G-b所占的構(gòu)成比,然后求其均值。分析了不同菌群

6、間的比值及構(gòu)成比的變化。統(tǒng)計學(xué)分析:用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件,對不同組別四類細(xì)菌的構(gòu)成比及不同菌群間的比值采用單因素方差分析(One-way ANOVA,采用Dunnett T3法進(jìn)行兩兩比較,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。二、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔唾液中鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌的定量分析收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的臨床標(biāo)本,共95例。納入標(biāo)準(zhǔn)參考第一章。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對照組三組。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的39例ROU患者,其中男性13例,女性26例,平均年齡26.3±7.76歲;愈合組為臨床確診并處于愈合期的35例ROU患者,其中男性11例,女性24例,平均年齡25.3

7、±5.47歲;對照組為無ROU病史的21位健康成年人,其中男性9例,女性12例,平均年齡23.3±2.27歲。方法:用引物設(shè)計軟件Primerprimer 5.0設(shè)計三種常見口腔細(xì)菌(鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌16S rRNA基因擴(kuò)增引物,并驗證其特異性;采用改良CTAB/NaCl法提取細(xì)菌標(biāo)本DNA;通過實時熒光定量PCR檢測鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌三種常見口腔細(xì)菌的含量。統(tǒng)計學(xué)分析:用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件,對不同組別三種細(xì)菌的含量采用單向方差分析(One-way ANOVA,采用Dunnett T3法進(jìn)行兩兩比較,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。三、基于細(xì)菌16

8、S rRNA基因分析的復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔細(xì)菌構(gòu)成差異分析分別收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的唾液標(biāo)本30例,納入標(biāo)準(zhǔn)參考第一章。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對照組三組,每組10例。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的ROU患者;愈合組為臨床確診并處于愈合期的ROU患者;對照組為無ROU病史的健康成年人。方法:采用改良CTAB/NaCl法提取細(xì)菌標(biāo)本DNA,并且制備成混合標(biāo)本。用細(xì)菌16S rRNA通用引物擴(kuò)增混合標(biāo)本,瓊脂糖凝膠電泳,用AlphaEaseFCStand Alone軟件行凝膠圖像分析。選擇回收純化差異較明顯的條帶,測定片段序列并在GenBank中比對,分析差異條帶的種屬源性。實驗結(jié)果一、唾液菌群涂片

9、觀察潰瘍組、愈合組及對照組G+c構(gòu)成比分別為:45.16±6.99、43.38±6.92及42.96±4.69;G+b構(gòu)成比分別為:3.95±3.12、3.04±1.38及2.65±1.71;G-b構(gòu)成比分別為:4.94±2.43、3.79±2.16及4.35±2.96。潰瘍組、愈合組及對照組G+c、G+b及G-b構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.499、P=0.160、P=0.352。潰瘍組、愈合組及對照組G-c構(gòu)成比分別為:45.94±5.42、49.79±6.22及50.09

10、77;4.65;三組間G-c構(gòu)成比差異具有顯著性(P=0.032;潰瘍組G-c構(gòu)成比較愈合組及對照組分別下降了3.85及4.15個百分點(diǎn)。潰瘍組、愈合組及對照組球菌構(gòu)成比均在90%以上,三組總球菌的構(gòu)成比分別為:91.10±4.83、93.17±2.57及93.05±4.38;總桿菌的構(gòu)成比分別為:8.89±4.83、6.83±2.57及7.00±4.37。潰瘍組、愈合組及對照組總球菌及總桿菌構(gòu)成比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.193、P=0.201。潰瘍組、愈合組及對照組G+c/G-c比值分別為:1.00±0.26、0.90

11、±0.26及0.87±0.16;G+b/G-b比值分別為:0.83±0.45、1.13±1.01及0.64±0.30;G+c/G+b比值分別為:17.51±13.55、18.08±11.02及24.20±15.93;G-c/G-b比值分別為:12.23±7.14、17.77±12.10及15.34±7.90。三組間G+c/G-c、G+c/G+b及G-c/G-b差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.140、P=0.224、P=0.172,G+b/G-b在三組間存在差異,P=0.063。潰瘍組、愈合

12、組及對照組G+c/(G+c+G+b構(gòu)成比分別為:0.92±0.07、0.93±0.03、0.94±0.04;G+b/(G+c+G+b構(gòu)成比分別為:0.08±0.07、0.07±0.03、0.06±0.04;G-c/(G-c+G-b構(gòu)成比分別為:0.90±0.04、0.93±0.04、0.92±0.05;G-b/(G-c+G-b構(gòu)成比分別為:0.10±0.04、0.07±0.04、0.08±0.05;G+c/(G+c+G-c構(gòu)成比分別為:0.49±0.06、0.47&

13、#177;0.07、0.46±0.04;G-c/(G+c+G-c構(gòu)成比分別為:0.51±0.06、0.53±0.07、0.54±0.04;G+b/(G+b+G-b構(gòu)成比分別為:0.43±0.11、0.46±0.18、0.37±0.10;G-b/(G+b+G-b構(gòu)成比分別為:0.57±0.11、0.54±0.18、0.63±0.10。三組間G+c/(G+c+G+b、G+b/(G+c+G+b、G-c/(G-c+G-b、G-b/(G-c+G-b、G+c/(G+c+G-c、G-c/(G+c+G-c、G+

14、b/(G+b+G-b、G-b/(G+b+G-b構(gòu)成比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.302、P=0.302、P=0.162、P=0.162、P=0.166、P=0.166、P=0.117、P=0.117。潰瘍組、愈合組及對照組G+/G-比值分別為:0.99±0.25、0.90±0.26、0.85±0.16;Gc/Gb比值分別為:13.85±8.53、15.73±6.60、17.85±9.88。三組間G+/G-、Gc/Gb差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.130、P=0.323。二、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔唾液中鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌的定量分析潰瘍

15、組鏈球菌及韋榮氏菌含量的對數(shù)值分別為7.30±0.89和8.29±0.77,均顯著低于對照組(8.15±0.55和8.93±0.76,P0.01,鏈球菌及韋榮氏菌含量分別較對照組降低了66%和86%;潰瘍組與愈合組間鏈球菌及韋榮氏菌的含量的對數(shù)值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.64、P=0.17;愈合組鏈球菌含量的對數(shù)值為7.51±0.81,顯著低于對照組(8.15±0.55,P0.01,菌量較對照組降低67%,愈合組與對照組間韋榮氏菌含量的對數(shù)值差異統(tǒng)計結(jié)果P=0.056;奈瑟氏菌含量的對數(shù)值在三組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.921

16、。三、基于細(xì)菌16S rRNA基因分析的復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔細(xì)菌構(gòu)成差異分析在200-800bp區(qū)間,于潰瘍組、愈合組及對照組均穩(wěn)定識別出3條堿基數(shù)分別為230bp、400bp及770bp左右的三條條帶。潰瘍組、愈合組及對照組三條條帶灰度值的百分比有差異。在潰瘍組、愈合組及對照組條帶組成方面存在差異,各組在不同位置均有條帶缺失現(xiàn)象。條帶綜合波形圖也反映了潰瘍組、愈合組及對照組在條帶含量構(gòu)成方面存在差異。選擇回收純化片段暫命名為1號,片段大小約為180bp。測序結(jié)果通過生物信息學(xué)分析。1號blast比對結(jié)果示1號差異條帶70%與GenBank中Bacteroides vulqatus ATCC 8482同源,匹配率74%。結(jié)論1、潰瘍組、愈合組及對照組唾液菌群以球菌為主,潰瘍組革蘭氏陰性球菌構(gòu)成比減少,表明復(fù)發(fā)性口腔潰瘍唾液菌群構(gòu)成發(fā)生了變化。2、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者唾液中鏈球菌、韋榮氏菌含量發(fā)生了減少性變化,提示構(gòu)成口腔微生態(tài)的重要球菌菌群鏈球菌和韋榮氏菌含量的改變與復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。3、細(xì)菌16S rRNA基因擴(kuò)增瓊脂糖電泳及圖像分析結(jié)果表明,復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者口腔細(xì)菌構(gòu)成與健康成人的口腔細(xì)菌構(gòu)成存在差異。概言

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