微生物的培養(yǎng)及應用

1、微生物的類群微生物的類群原生生物：原生生物：原核生物原核生物: :真菌真菌: :病毒病毒: :如酵母菌、霉菌如酵母菌、霉菌單細胞的動植物單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等如草履蟲、單細胞藻類等無細胞結構無細胞結構真核細胞真核細胞細菌、藍藻等細菌、藍藻等原核細胞原核細胞一、微生物的培養(yǎng)基一、微生物的培養(yǎng)基 1 1、培養(yǎng)基定義：、培養(yǎng)基定義： 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為人工培養(yǎng)微生物而制人工培養(yǎng)微生物而制備備的，提供適合微生物生長、繁殖或積累代謝產(chǎn)的，提供適合微生物生長、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。物的營養(yǎng)基質(zhì)。 思考：微生物細胞的元素組成是什么？思考：微生物細胞的元素組成是什么

2、？2 2、培養(yǎng)基的類型、培養(yǎng)基的類型（1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。區(qū)別區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。瓊脂的性質(zhì)瓊脂的性質(zhì)：熔點：熔點：9696度度凝固點：凝固點：4040度度注意：一般細菌不能利用瓊脂。注意：一般細菌不能利用瓊脂。 單個或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁單個或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖殖, ,可以形成肉眼可見子細胞的群體可以形成肉眼可見子細胞的群體菌落菌落固體培養(yǎng)基用途固體培養(yǎng)基用途：用于微生物：用于微生物純化、計數(shù)、鑒定純化、計數(shù)、鑒定

3、菌落菌落細菌的菌落特征細菌的菌落特征因種而異。因種而異。菌落特征菌落特征是微生是微生物鑒定的重要依物鑒定的重要依據(jù)據(jù)菌苔：菌落連成菌苔：菌落連成片片 液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：觀察運動半固體培養(yǎng)基：觀察運動無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) )（2 2）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 半半合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。（3 3）按功能分：）按功能分：基礎培養(yǎng)基、基礎培養(yǎng)基、 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基?；A培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基：含有微生物生長所需的基本物質(zhì)。：

4、含有微生物生長所需的基本物質(zhì)。選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：培養(yǎng)基加入加入某種物質(zhì)或某種物質(zhì)或缺少缺少某種營養(yǎng)某種營養(yǎng)物質(zhì)而物質(zhì)而抑制不需要的微生物生長抑制不需要的微生物生長促進需要的微生物促進需要的微生物生長。生長。舉例說明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑舉例說明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑制細菌和放線菌的生長，篩選真菌。制細菌和放線菌的生長，篩選真菌。 無氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長，篩選固氮菌無氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長，篩選固氮菌鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：區(qū)別微生物：區(qū)別微生物 伊紅伊紅美藍培養(yǎng)基美藍培養(yǎng)基 產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色 大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤大

5、腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較幾種選擇培養(yǎng)基：加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物二、微生物生長需要條件二、微生物生長需要條件 1 1、夏天為什么食物容易腐??？、夏天為什么食物容易腐敗？ 如何處理可以防止腐?。咳绾翁幚砜梢苑乐垢瘮。?2 2、為什么

6、真空包裝的食品不容易腐??？、為什么真空包裝的食品不容易腐??？ 3 3、醋酸是否具有殺菌作用？、醋酸是否具有殺菌作用？ 以上反應了微生物生長受到哪些條件影響？以上反應了微生物生長受到哪些條件影響？細菌細菌303037 37 霉菌霉菌252528 28 放線菌放線菌25252828 1 12d 34d 57d2d 34d 57d大腸桿菌大腸桿菌 乳酸菌乳酸菌 破傷風桿菌破傷風桿菌 大多數(shù)細菌為好氧型大多數(shù)細菌為好氧型霉菌霉菌 5.05.06.0 6.0 細菌細菌6.56.57.5 7.5 放線菌放線菌 7.57.58.58.5三、三、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)1 1、水水2 2、碳源碳源（提

7、供碳元素的物質(zhì)）（提供碳元素的物質(zhì)）3 3、氮源氮源（提供氮元素的物質(zhì)）（提供氮元素的物質(zhì)）4 4、無機物無機物（無機鹽）（無機鹽）5 5、生長因子生長因子（微生物生長不可缺少的微（微生物生長不可缺少的微量有機物。如維生素、含氮堿基）量有機物。如維生素、含氮堿基） 碳源碳源可作為碳源的物質(zhì)有可作為碳源的物質(zhì)有: :含碳無機物含碳無機物: : 含碳有機物：含碳有機物：蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)脂肪酸脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為碳酸鹽碳酸鹽 碳酸氫鹽碳酸氫鹽二氧化碳二氧化碳糖類（主要）糖類（主要）含碳有

8、機物（有機碳）含碳有機物（有機碳）含碳無機物（無機碳）含碳無機物（無機碳）氮源氮源可作為氮源的物質(zhì)有可作為氮源的物質(zhì)有: :含氮無機物：含氮無機物： 含氮有機物：含氮有機物：蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素氮氣氮氣氨氣氨氣硝酸鹽硝酸鹽銨鹽銨鹽注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽汁等天然營養(yǎng)物質(zhì)中既含有碳源又同時含有氮源、生長因子等營養(yǎng)要素1 1、下列細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是、下列細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是 A A 光合細菌光合細菌 B B 根瘤菌根瘤菌 C C 硝化細菌硝化細菌 D D 乳酸菌乳酸菌2 2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，

9、必需含有的碳源和氮源是 A A 糖、有機酸等糖、有機酸等 B B 二氧化碳、碳酸鹽二氧化碳、碳酸鹽 C C 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) D D 無機氮化物無機氮化物A.CA.C 下表關于四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝的類型，描述正確的是（2 2）特殊營養(yǎng)：）特殊營養(yǎng)：生長因子生長因子（3 3）pHpH、氧氣等要求、氧氣等要求四：營養(yǎng)基配制的原則1：目的要明確目的要明確 配制培養(yǎng)基要根據(jù)配制培養(yǎng)基要根據(jù) 培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng)培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng)的目的、培養(yǎng)基的用途來確定培養(yǎng)基的化的目的、培養(yǎng)基的用途來確定培養(yǎng)基的化學成分、物理狀態(tài)。學成分、物理狀態(tài)。2：營養(yǎng)要協(xié)調(diào)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)3：PH要適宜要適宜 五、五、培養(yǎng)

10、基的配制過程培養(yǎng)基的配制過程（一）、細菌培養(yǎng)基的配制（一）、細菌培養(yǎng)基的配制1.1.計算計算: 100ml: 100ml蒸餾水中各物質(zhì)的量。蒸餾水中各物質(zhì)的量。2.2.稱量稱量：注意牛肉膏的粘稠度大。：注意牛肉膏的粘稠度大。3.3.溶化溶化： 牛肉膏連同稱量紙一同放入牛肉膏連同稱量紙一同放入 不斷攪拌不斷攪拌4.4.調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)PH:PH:7.07.27.07.2思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？加熱、溶化 5.5.分裝：分裝： 培養(yǎng)基高培養(yǎng)基高度度1/51/5 不要污染不要污染試管口試管口 棉塞塞緊棉塞塞緊6 6、包扎包扎 3-5 3-5支支試管扎成試管扎成一捆，外

11、一捆，外包一層牛包一層牛皮紙，用皮紙，用線扎好。線扎好。 思考：滅菌的溫度、壓力、時間分別是多少？思考：滅菌的溫度、壓力、時間分別是多少？ 8 . 8 .擱置斜面擱置斜面/ /倒平板倒平板（斜面的長度不超過試管的（斜面的長度不超過試管的1/2)1/2) 圖中哪些措施是防止雜菌污染的？圖中哪些措施是防止雜菌污染的？培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050度左右時，才能用來度左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？ 剛剛不燙手。剛剛不燙手。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 防止瓶口附近的微生

12、物污染培養(yǎng)基防止瓶口附近的微生物污染培養(yǎng)基平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基珠落入培養(yǎng)基在倒平板的過程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與在倒平板的過程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？為什么？ 空氣中的微生物會在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基空氣中的微生物會在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。六、無菌操作六、無菌操作1 1、獲得純

13、凈培養(yǎng)物的關鍵：、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵：2 2、無菌操作、無菌操作 避免雜菌感染操作對象的操作過程避免雜菌感染操作對象的操作過程3 3、哪些地方有菌可能導致菌體感染？、哪些地方有菌可能導致菌體感染？ 操作者操作者 培養(yǎng)基、接種工具、器皿培養(yǎng)基、接種工具、器皿 空間空間 防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵4 4、滅菌和消毒、滅菌和消毒 消毒：消毒：溫和的因素殺死一部分對人體有害的溫和的因素殺死一部分對人體有害的微生物。微生物。 舉例：煮沸，舉例：煮沸，70%70%酒精溶液酒精溶液 問題：一段時間后為什么會腐?。繂栴}：一段時間后為什么會腐?。坎话ㄑ挎吆玩咦硬话ㄑ挎吆玩咦?滅菌滅菌：強烈的因素

14、殺死所有微生物，強烈的因素殺死所有微生物，包括芽包括芽孢和孢子。孢和孢子。思考：哪些因素可以滅菌、消毒？思考：哪些因素可以滅菌、消毒？ 物理物理高溫、紫外線高溫、紫外線 化學化學酒精、氯氣、石碳酸酒精、氯氣、石碳酸 常用的滅菌方法常用的消毒方法思考：以下應當用何種方法滅菌、消毒？思考：以下應當用何種方法滅菌、消毒？ 操作者操作者 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 接種工具接種工具 器皿器皿 空間空間 牛奶牛奶手用酒精消毒手用酒精消毒高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌灼燒灼燒干熱滅菌干熱滅菌紫外線紫外線巴氏消毒巴氏消毒70707575度度30min 8030min 80度度15min15min灼燒滅菌灼燒滅菌 微生物的接種工

15、具微生物的接種工具 ( (接種接種環(huán)、接種針、試管口環(huán)、接種針、試管口) )或或其他金屬用具直接在火焰其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒的充分燃燒層灼燒 干熱滅菌干熱滅菌 160160170 170 ；1 12h2h能耐高溫的需要保持干能耐高溫的需要保持干燥的物品燥的物品( ( 玻璃器皿玻璃器皿) ) 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 100kPa 121 15-30min15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌通常用于培養(yǎng)基的滅菌總結：無菌技術總結：無菌技術 1 1、實驗操作空間、操作者、衣著和手要、實驗操作空間、操作者、衣著和手要 和和 。2 2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種

16、工具和培養(yǎng)基、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進行等進行 。3 3、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實驗操作應、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實驗操作應在在 附近進行。附近進行。4 4、實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與、實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。周圍物品相接觸。清潔清潔滅菌滅菌酒精燈酒精燈消毒消毒七、七、接種技術接種技術 無菌無菌條件下將微生物條件下將微生物接入培養(yǎng)基接入培養(yǎng)基的操作過程稱的操作過程稱為接種。為接種。1 1、接種工具、接種工具2 、常用的接種方法常用的接種方法斜面劃線法斜面劃線法做什么準備？做什么準備？點燃酒精燈點燃酒精燈斜面向上斜

17、面向上斜面劃線接種的操作過程斜面用什么接種？斜面用什么接種？接種環(huán)如何滅菌？接種環(huán)如何滅菌？取棉塞（不放到桌面？）取棉塞（不放到桌面？）試管口滅菌試管口滅菌挑取少量菌體挑取少量菌體從里到外輕輕劃從里到外輕輕劃“S S”型曲線型曲線，不要，不要劃破培養(yǎng)基劃破培養(yǎng)基試管口通過火焰，塞緊試管口試管口通過火焰，塞緊試管口放在放在3737度恒溫箱中培養(yǎng)度恒溫箱中培養(yǎng)24h24h稀釋稀釋涂布涂布平板法平板法包括涂抹平板法和混合平板法包括涂抹平板法和混合平板法涂抹平板法涂抹平板法混合平板法混合平板法 從哪里可以獲得微生物呢？從哪里可以獲得微生物呢？ 微生物的大本營：土壤微生物的大本營：土壤 從眾多微生物中分

18、離某種微生物有什么方法？從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？ 原理：原理： 根據(jù)微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、根據(jù)微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、pHpH不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。 對微生物進行分離的培養(yǎng)基是？（對微生物進行分離的培養(yǎng)基是？（固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基） 固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？（菌落）固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？（菌落） 菌落作用：菌落作用：微生物分類、鑒定的依據(jù)微生物分類、鑒定的依據(jù)分離微生物的方法分離微生物的方法：平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂抹平稀釋涂抹平板法板法八八、微生物的分離、數(shù)量測定、微生物的分離、數(shù)量測定 平板劃線分離微生物的原理平

19、板劃線分離微生物的原理：連續(xù)劃線。由于劃：連續(xù)劃線。由于劃線后，線條末端的細菌的數(shù)目比線條起始處要少，線后，線條末端的細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能 得到由得到由單個細菌繁殖而來的菌落。單個細菌繁殖而來的菌落。 注意事項：注意事項：第一步以及每一次劃線之前和劃線結第一步以及每一次劃線之前和劃線結束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃線。每次劃線之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一線。每次劃線之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一次劃線殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來次劃線殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來至于上一次劃線的末端，使每一次劃線的菌種數(shù)至于上一次劃線的末端，使每一次劃線的菌種數(shù)目減少。目減少。平板劃線的幾種方法平板