第16章抗生素類藥物的分析-LLQ

1、第十六章第十六章基本要求基本要求一、掌握抗生素類藥物的結(jié)構(gòu)特點與分析方法一、掌握抗生素類藥物的結(jié)構(gòu)特點與分析方法之間的關(guān)系。之間的關(guān)系。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原理、測定方法與計算。理、測定方法與計算。四、熟悉抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。四、熟悉抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、抗生素的定義一、抗生素的定義 抗生素是指：在低微濃度下抗生素是指：在低微濃度下即可對某些生

2、物的生命活動有特即可對某些生物的生命活動有特異抑制作用的化學物質(zhì)的總稱。異抑制作用的化學物質(zhì)的總稱?？股氐膩碓纯股氐膩碓?. 1. 生物合成（微生物發(fā)酵）生物合成（微生物發(fā)酵）2. 2. 化學合成或半合成化學合成或半合成抗生素藥物的特點：抗生素藥物的特點：化學純度較低化學純度較低活性組分易發(fā)生變異活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差穩(wěn)定性差二、分類二、分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）： 內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、 四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗生素類三、抗生素類藥物

3、的細菌耐藥性三、抗生素類藥物的細菌耐藥性 細菌耐藥性：是指細菌產(chǎn)生的對抗菌藥不敏感的現(xiàn)象，是細菌自身生存過程的一種特殊表現(xiàn)形式。（一）鑒別試驗（一）鑒別試驗 1.官能團的顯色反應(yīng)官能團的顯色反應(yīng)： 內(nèi)酰胺環(huán)的羥內(nèi)酰胺環(huán)的羥肟酸鐵反應(yīng)；鏈霉素的麥芽酚反應(yīng)、坂肟酸鐵反應(yīng)；鏈霉素的麥芽酚反應(yīng)、坂口反應(yīng)?？诜磻?yīng)。 2.光譜法光譜法 3.色譜法色譜法 4.生物學法生物學法四、抗生素藥物的質(zhì)量分析四、抗生素藥物的質(zhì)量分析抗生素質(zhì)量的復(fù)雜性：抗生素質(zhì)量的復(fù)雜性： 產(chǎn)品穩(wěn)定性差產(chǎn)品穩(wěn)定性差分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定，分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定，降解后療效下降、失效降解后療效下降、失效或增加毒副作用或增加毒副作用發(fā)酵過程不易控

4、制發(fā)酵過程不易控制易受污染易受污染生產(chǎn)工藝復(fù)雜生產(chǎn)工藝復(fù)雜（二）檢查（二）檢查發(fā)酵液中雜質(zhì)發(fā)酵液中雜質(zhì) 無機鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、無機鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、毒性物質(zhì)毒性物質(zhì) 增加增加 異常毒性、細菌內(nèi)毒素、異常毒性、細菌內(nèi)毒素、熱原、降壓物質(zhì)、無菌熱原、降壓物質(zhì)、無菌 檢查檢查微生物學法與理化法的比較微生物學法與理化法的比較微生物檢定法微生物檢定法理化法理化法以抗生素對微生物的以抗生素對微生物的殺傷或抑制程殺傷或抑制程度度為指標衡量抗生素的生物效價為指標衡量抗生素的生物效價 根據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點，利用其根據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點，利用其特有的理化性質(zhì)測

5、定其含量特有的理化性質(zhì)測定其含量已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精制品或已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精制品或粗制品均能測定粗制品均能測定 測定化學結(jié)構(gòu)已知、已提純的測定化學結(jié)構(gòu)已知、已提純的抗生素抗生素靈敏度高、樣品需用量小、反映抗靈敏度高、樣品需用量小、反映抗生素的生素的醫(yī)療價值醫(yī)療價值，但操作步驟多、，但操作步驟多、費時、費時、誤差大誤差大 迅速、準確、專屬性高、樣品迅速、準確、專屬性高、樣品需用量小、操作簡單、省時需用量小、操作簡單、省時（三）含量或效價測定（三）含量或效價測定微生物檢定法微生物檢定法測定抗生素抑菌或殺菌的能力測定抗生素抑菌或殺菌的能力管碟法管碟法濁度法濁度法1.微生物檢定法微生物檢定法

6、優(yōu)點優(yōu)點1、與臨床效果一致、與臨床效果一致2、靈敏度高、靈敏度高3、干擾物質(zhì)少、干擾物質(zhì)少缺點缺點1、操作繁瑣、操作繁瑣2、培養(yǎng)時間長、培養(yǎng)時間長2、測定誤差大、測定誤差大2. 化學及物理化學方法化學及物理化學方法以理化方法測定主藥含量以理化方法測定主藥含量優(yōu)點優(yōu)點 1. 準確度高準確度高2. 簡單、快速簡單、快速1. 不一定代表生物效價不一定代表生物效價缺點缺點2. 易受雜質(zhì)干擾易受雜質(zhì)干擾3.3.抗生素的活性以抗生素的活性以效價單位效價單位來表示：來表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某種抗生素的有效成中含有某種抗生素的有效成分的多少，用分的多少，用單位（單位（u u）或）或g g

7、表示。表示。 1 1mgmg青霉素青霉素G G鈉鹽定為鈉鹽定為16701670單位單位同一種抗生素的各種鹽類的效價可根據(jù)其分子量同一種抗生素的各種鹽類的效價可根據(jù)其分子量進行換算，如：進行換算，如： 1 1mgmg青霉素青霉素G G鉀鹽的單位（鉀鹽的單位（u u） =1670=1670356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分類分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）： 內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、 四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗

8、生素類第二節(jié)第二節(jié) 內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 青霉素族青霉素族NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）ABA：內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)B：氫化噻唑環(huán)：氫化噻唑環(huán)*1234頭孢菌素族頭孢菌素族7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCOA：內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)B：氫化噻嗪環(huán)：氫化噻嗪環(huán)AB*23456178頭孢菌素類頭孢菌素類7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、芐青霉素）、芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2

9、氨芐西林氨芐西林（氨芐青霉素）（氨芐青霉素）阿莫西林阿莫西林（羥氨芐青霉素）（羥氨芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素頭孢拉啶頭孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH頭孢氨芐頭孢氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、一、Na與堿金屬與堿金屬(Na+、

10、K+)成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 白色沉淀白色沉淀與有機堿與有機堿( (普魯卡因普魯卡因) )成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NOS頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共軛體系（三）共軛體系 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 NOS UVUV（四）（四）內(nèi)

11、酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（某些金屬離子） （溫度）（溫度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反應(yīng)青霉素的降解反應(yīng)青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羥胺酸?；u胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類 -內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶降解降解失效失效（

12、一）呈色反應(yīng)（一）呈色反應(yīng)1. 1. 羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類呈色呈色羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物Fe3+/3H+鑒別試驗鑒別試驗 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （紅、棕、褐）（紅、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng) - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 藍紫色藍紫色3. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)- - - CONH （開環(huán)分解）（開環(huán)分解） - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性堿性硫酸銅硫酸銅紫紫2OHCONH2CuCOHNCCH3

13、COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH藍紫色藍紫色4. 與重氮苯磺酸反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮5. 與變色酸與變色酸- -硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)活潑活潑“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基側(cè)側(cè)鏈鏈含含“（分解分解）變色酸變色酸顯色顯色1. K+、Na+的火焰反應(yīng)的火焰反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng) 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 Na+ 焰色焰色紫色紫色

14、+ 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + Ac白白 K+2. 沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素鈉青霉素鈉青霉素鉀青霉素鉀緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反應(yīng)偶合反應(yīng) 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)紅紅 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2+ +紅色紅色

15、1、IR法法3180cm-1 N-H內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O以阿莫西林為例以阿莫西林為例（三）光譜（三）光譜2、 UV法法樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物nm339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光譜譜圖圖頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素V鈉鈉 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排色譜法色譜法（

16、四）（四）1、 TLC法法對照品對照法對照品對照法和和斑斑點點顏顏色色比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件fR2、 HPLC法法Rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件三、特殊雜質(zhì)的檢查三、特殊雜質(zhì)的檢查 藥物藥物 檢查項目檢查項目 檢查方法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 HPLC法法 青霉素鉀（鈉）青霉素鉀（鈉） 吸收度吸收度 UV 1.1.頭孢呋辛酯中頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查的檢查 固定相：固定相：ODSODS

17、 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇（甲醇（62:3862:38） 1 1）頭孢呋辛酯）頭孢呋辛酯3 3- -異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對 照品照品+ +流動相流動相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯3 3- -異構(gòu)體。異構(gòu)體。2 2）系統(tǒng)適用性試驗：各異構(gòu)體之間的）系統(tǒng)適用性試驗：各異構(gòu)體之間的R1.5R1.5，以，以 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯A A異構(gòu)體計算異構(gòu)體計算n1500n1500。 3 3）異構(gòu)體：）異構(gòu)體： Fe3+/3H+紅色紅色NaOHHClNOHH2- - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物四、含量測定四、含量測定1

18、、可見、可見-紫外分光光度法紫外分光光度法-羥肟酸比色法羥肟酸比色法USP JPHPLCHPLC法法ChPChP 內(nèi)標法校正因子內(nèi)標法校正因子外標法外標法特點特點 快速、高效、靈敏快速、高效、靈敏 專屬性強、重現(xiàn)性好專屬性強、重現(xiàn)性好 一法多用（鑒別、檢查、含測）一法多用（鑒別、檢查、含測）第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素苷苷苷苷元元糖糖縮縮合合 + +氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖縮合縮合 + +鏈霉素鏈霉素 雙氫鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素慶大霉素慶大霉素 巴龍霉素巴龍霉素堿性環(huán)己多元醇堿性環(huán)己多元醇鏈霉素鏈霉素鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺

19、葡萄糖胺 苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龍霉糖巴龍霉糖巴龍?zhí)前钒妄執(zhí)前奋赵赵妄埗前钒妄埗前?糖糖 D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺D-D-核糖核糖巴龍霉糖巴龍霉糖OOOOH

20、OCH2OHHONH2HOOOHNH2NH2OHOOHR2NH2CH2OH*R1慶大霉素慶大霉素 糖糖 苷元苷元絳紅糖胺絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺慶大霉素慶大霉素C復(fù)合物復(fù)合物

21、慶大霉素慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉素慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3個個慶大霉素慶大霉素 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）鏈霉素鏈霉素 pH 57.5慶大霉素慶大霉素 pH 212 穩(wěn)定穩(wěn)定穩(wěn)定性穩(wěn)定性（四四）UV（三三）鏈霉素鏈霉素 230nmNH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OH

22、CHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反應(yīng)糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)二二、 鑒別鑒別 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)（一一）藍藍紫紫色色慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素茚茚三三酮酮氨基糖苷結(jié)構(gòu)氨基糖苷結(jié)構(gòu)Molisch試驗試驗 （二）（二）顯色羥甲基糠醛糠醛氨基糖苷類抗生素萘酚或蒽酮脫水水解-五碳糖或六碳糖結(jié)構(gòu)五碳糖或六碳糖結(jié)構(gòu)-萘酚萘酚蒽酮蒽酮OHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH紅紫色紅紫色N-N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三三）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素水解水解- -N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物對二甲

23、氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+紅色紅色（Elson-Morgan反應(yīng)反應(yīng)）慶大霉素慶大霉素NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(縮合縮合)323COCHCOCHCH- -OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N紅色紅色對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)（四四） 鏈霉素特征反應(yīng)鏈霉素特征反應(yīng)鏈鏈霉霉糖糖鏈鏈霉霉素素- -OH麥麥芽芽酚酚紫紫紅紅色色 + +3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOH

24、NHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫紅紫紅麥芽酚麥芽酚鏈霉胍特有反應(yīng)鏈霉胍特有反應(yīng)橙橙紅紅羥羥基基喹喹啉啉鏈鏈霉霉胍胍鏈鏈霉霉素素次次溴溴酸酸鈉鈉- - -8OH（或或-萘酚萘酚）NOH8-8-羥基喹啉羥基喹啉坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)（五五）-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH（六六）- -24SO反應(yīng)反應(yīng)白白 - -2 2 + +2 2BaSOSOBaH+UV法法（七七）慶大霉素無慶大霉素無UVUV吸收吸收nmmax230230= = 鏈霉素鏈霉素（八）色譜法（八）色譜法（1 1）TLCTLC法

25、：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色 對照液對照液 判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位 置應(yīng)一致。置應(yīng)一致。 點樣：供試液點樣：供試液 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 + + 硫酸硫酸 新霉素標準品新霉素標準品+ + 硫酸卡那霉素標準品硫酸卡那霉素標準品判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小 應(yīng)與對照液應(yīng)與對照液 相同，相同， 對照液對照液應(yīng)顯示分離清晰的應(yīng)顯示

26、分離清晰的3 3個斑點個斑點 否則試驗無效。否則試驗無效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 比較供試液與對照液各組分的保留比較供試液與對照液各組分的保留時間。時間。三三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素雜質(zhì)（一）（一）鏈霉素鏈霉素B B（甘露糖鏈霉素）（甘露糖鏈霉素） 方法方法 TLCTLC中的對照品法（中的對照品法（BPBP）1. 來源來源 反應(yīng)中間體反應(yīng)中間體對微生物的活性無明顯差異對微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同發(fā)酵菌種不同工藝差別工藝差別C C組分比例組分比例不一致不一致規(guī)定控制各組分的相對百分

27、含量規(guī)定控制各組分的相對百分含量ChPUSPBPJP慶大霉素慶大霉素C C組分的測定組分的測定（二二）+ + + 1010.pH吲哚衍生物吲哚衍生物巰基醋酸巰基醋酸鄰苯二醛鄰苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基烷基-2-烷基硫代烷基硫代異吲哚衍生物異吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOH離子對色譜法離子對色譜法方法方法 2.規(guī)定規(guī)定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%計算計算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa1 10 00 0 + + + += =2 22 21 11 1峰面積歸一化法

28、峰面積歸一化法4. 蒸發(fā)光散射檢測器（蒸發(fā)光散射檢測器（ChP2010）5. 電化學檢測器（電化學檢測器（BP） 四四、 含量測定含量測定微生物檢定法微生物檢定法 各國藥典主要采用各國藥典主要采用HPLC法法 常用于體內(nèi)藥分常用于體內(nèi)藥分 微生物檢定法微生物檢定法 本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用量反應(yīng)平行線原理的內(nèi)的擴散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計，比較標準品與供試品兩者對設(shè)計，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。以測定供試品效價的一種方法。2CH3NRR3HOHCONH2OOHOH

29、OOHR2R1第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R12CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四環(huán)素四環(huán)素（TC）tetracycline7652CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四環(huán)素氯四環(huán)素7652CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四環(huán)素氧四環(huán)素7652CH3NHOHCONH2OOHOHOO

30、HCH3OH多西環(huán)素多西環(huán)素 (DOTC) doxycycline脫氧土霉素脫氧土霉素765美他環(huán)素美他環(huán)素（METC） metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH2765一、一、 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)兩性兩性（一）（一）1. 與酸、堿均能成鹽與酸、堿均能成鹽2.強酸或強堿中溶解度強酸或強堿中溶解度 酚羥基、烯醇型羥基酚羥基、烯醇型羥基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱堿性弱堿性與金屬離子生成有色配位化合物與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV UV和熒光性質(zhì)和熒光性質(zhì)（三三）與金屬離子絡(luò)合與金屬離子絡(luò)合（四四）pH3 7.5

31、 熒光熒光 （二）（二）旋光性旋光性HOHOCaOOOOHOHOO不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性（五）（五）1. 差向異構(gòu)化差向異構(gòu)化差向金霉素差向金霉素差向四環(huán)素差向四環(huán)素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素- - - - 6 62 2pH淡黃淡黃黑黑藍色熒光藍色熒光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四環(huán)素差向四環(huán)素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）2. 降解反應(yīng)降解反應(yīng)（1）酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黃色橙黃色脫水金霉素

32、脫水金霉素脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素 2 2pH2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH2（2）堿性下降解堿性下降解異異四四環(huán)環(huán)素素四四環(huán)環(huán)素素 - -OH（熒光）（熒光）HOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二二、 鑒別試驗鑒

33、別試驗 濃濃H H2 2SOSO4 4反應(yīng)反應(yīng)（一一）黃色黃色朱紅色朱紅色綠綠藍藍深紫色深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 2 2SOH鹽酸美他環(huán)素鹽酸美他環(huán)素橙紅色橙紅色FeCl3反應(yīng)反應(yīng)（二二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色紅棕色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素3 3FeClCl-反應(yīng)反應(yīng)（三）（三）白白 + +3 3+ +- -AgClAgClHNO33. 031. 0,345max=Anm1mol/L鹽酸鹽酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mlUV法（鹽酸美他環(huán)素）

34、法（鹽酸美他環(huán)素）（四）（四）TLCTLC法法（五五）鹽酸土霉素的鑒別鹽酸土霉素的鑒別 HPLC HPLC法法（六六）EDTAEDTA 克服痕量金屬造成的克服痕量金屬造成的 拖尾現(xiàn)象拖尾現(xiàn)象比較保留時間比較保留時間三三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查 4-4-差向四環(huán)素（差向四環(huán)素（ETCETC） 脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素（ATCATC） 差向脫水四環(huán)素差向脫水四環(huán)素（EATCEATC） 鹽酸金霉素鹽酸金霉素（CTCCTC） 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)（一一）HPLCHPLC法（法（20102010版）版）鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素吸收度吸收度（二）（二）nmmax355355268268 、鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素雜質(zhì)

35、吸收度雜質(zhì)吸收度 取供試品配成每毫升取供試品配成每毫升10mg/ml10mg/ml的溶液的溶液至至4cm4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm530nm處測定，自處測定，自加加0.80.8NaOHNaOH起起5min5min時，其吸收度不得超時，其吸收度不得超過過0.120.12。應(yīng)嚴格控制溫度和時間應(yīng)嚴格控制溫度和時間四四、 含量測定含量測定HPLCHPLC法法 鹽酸四環(huán)素的測定鹽酸四環(huán)素的測定 系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關(guān)系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關(guān) 物質(zhì)及物質(zhì)及ATCATC峰間的峰間的 分離度分離度均應(yīng)符合要均應(yīng)符合要 求。求。 定量方法：外標法以峰面積計定量方法：外標法以

36、峰面積計。第五節(jié) 抗生素類藥物中高分子 雜質(zhì)的檢查1.1.高分子雜質(zhì)高分子雜質(zhì) 分子量大于藥物本身的雜質(zhì)總稱。分子量大于藥物本身的雜質(zhì)總稱。 蛋白、多肽、多糖或抗生素蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、多糖的結(jié)合物。主要來自與蛋白、多肽、多糖的結(jié)合物。主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。霉噻唑多肽。 藥物的自身聚合物，來自于藥物的自身聚合物，來自于生產(chǎn)、貯存過程?？梢l(fā)過敏。生產(chǎn)、貯存過程?？梢l(fā)過敏。外源性雜質(zhì)外源性雜質(zhì)內(nèi)源性雜質(zhì)內(nèi)源性雜質(zhì) 3. 3.高分子雜質(zhì)的質(zhì)控方法高分子雜質(zhì)的質(zhì)控方法（1 1）凝膠色譜法測定高分子雜質(zhì)原理：使高

37、分子）凝膠色譜法測定高分子雜質(zhì)原理：使高分子雜質(zhì)雜質(zhì) 與藥物分離。與藥物分離。（2 2）高分子雜質(zhì)的控制方法）高分子雜質(zhì)的控制方法-自身對照外標法自身對照外標法 原理原理：測定在：測定在K Kavav=0=0處處 藥物締合物的峰響應(yīng)藥物締合物的峰響應(yīng) 指標指標 樣品中高分子雜質(zhì)的響應(yīng)指標樣品中高分子雜質(zhì)的響應(yīng)指標 按外標法計算，得樣品中高分子雜質(zhì)按外標法計算，得樣品中高分子雜質(zhì) 相當于藥物本身的相對含量。相當于藥物本身的相對含量。（3 3）高分子雜質(zhì)的分析方法）高分子雜質(zhì)的分析方法簡單測定系統(tǒng)：葡聚糖凝膠簡單測定系統(tǒng)：葡聚糖凝膠G-10G-10（4040 120m120m）柱）柱. .HPLC

38、HPLC系統(tǒng)系統(tǒng): :葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠G-10G-10柱柱. .練習與思考A型題型題 1、下列哪個藥物會發(fā)生羥肟酸鐵反應(yīng)、下列哪個藥物會發(fā)生羥肟酸鐵反應(yīng) A. 青霉素青霉素 B. 慶大霉素慶大霉素 C. 土霉素土霉素 D. 鏈霉素鏈霉素 E. 維生素維生素C 練習與思考A型題型題 2、中國藥典、中國藥典(2010年版年版)測定頭孢菌素類藥物測定頭孢菌素類藥物的含量時，多數(shù)采用的方法是的含量時，多數(shù)采用的方法是 A. 微生物法微生物法 B. 碘量法碘量法 C. 汞量法汞量法 D. 正相高效液相色譜法正相高效液相色譜法 E. 反相高效液相色譜法反相高效液相色譜法練習與思考A型題型題 3、能發(fā)生

39、重氮化、能發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)的抗生素類藥物是偶合反應(yīng)的抗生素類藥物是 A. 青霉素青霉素 B. 慶大霉素慶大霉素 C. 芐星青霉素芐星青霉素 D. 鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 E. 普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素練習與思考A型題型題 4、四環(huán)素在酸性條件下的降解產(chǎn)物是、四環(huán)素在酸性條件下的降解產(chǎn)物是 A. 差向四環(huán)素差向四環(huán)素 B. 脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素 C. 異四環(huán)素異四環(huán)素 D. 去甲四環(huán)素去甲四環(huán)素 E. 去甲氧四環(huán)素去甲氧四環(huán)素練習與思考A型題型題 5、慶大霉素和鏈霉素可以發(fā)生、慶大霉素和鏈霉素可以發(fā)生Molisch反應(yīng)，反應(yīng)，因為它們分子結(jié)構(gòu)中含有因為它們分子結(jié)構(gòu)中含有 A. 羰基羰基 B

40、. 五碳糖或六碳糖五碳糖或六碳糖 C. 羧基羧基 D. 羥基羥基 E. 氨基氨基練習與思考A型題型題 6、麥芽酚與硫酸鐵銨作用顯示的顏色是、麥芽酚與硫酸鐵銨作用顯示的顏色是 A. 紫紅色紫紅色 B. 黃色黃色 C. 橙紅色橙紅色 D. 綠色綠色 E. 藍紫色藍紫色練習與思考A型題型題 7、鹽酸四環(huán)素中有關(guān)物質(zhì)的檢查在中國藥、鹽酸四環(huán)素中有關(guān)物質(zhì)的檢查在中國藥典典2010版中采用的方法是版中采用的方法是 A. GC-MS B. IR C. HPLC D. UV E. TLC練習與思考A型題型題 8、能區(qū)別鏈霉素和慶大霉素，為鏈霉素特有、能區(qū)別鏈霉素和慶大霉素，為鏈霉素特有的鑒別反應(yīng)是的鑒別反應(yīng)是 A. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng) B. 三氯化銻反應(yīng)三氯化銻反應(yīng) C. 坂口反應(yīng)坂口反應(yīng) D. 硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng) E. N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)甲基葡萄糖胺反應(yīng)練習與思考A型題型題 9、青霉素在堿性或青霉素酶作用下發(fā)生降解、青霉素在堿性或青霉素酶作用下發(fā)生降解反應(yīng)的產(chǎn)物是反應(yīng)的產(chǎn)物是 A. 青霉烯酸青霉烯酸 B.