乳乳制品及飼料中三聚氰胺的測(cè)定一名詞簡(jiǎn)介1三聚氰胺理化性質(zhì)

1、乳、乳制品及飼料中三聚氰胺的測(cè)定一. 名詞簡(jiǎn)介1. 三聚氰胺理化性質(zhì)三聚氰胺：英文名 melamine ，簡(jiǎn)稱(chēng)三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子 式：C3N6H6 C3N3NH23;分子量：126.12 ;物理性能：白色結(jié)晶粉末，無(wú)毒，無(wú)味；相對(duì)密度：1570kg/m3; 熔點(diǎn)：在常壓下，354 C分解；升華溫度：300C ;溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、 吡啶微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性。化學(xué)性能：三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反響生成三聚氰胺鹽；在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿液中，三聚氰胺發(fā)生水解，胺基逐步被羥

2、基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸 一酰胺和三聚氰酸； 三聚氰胺與醛類(lèi)反響生成加成化合物；三聚氰胺與甲醛反響制成樹(shù)脂，三聚氰胺樹(shù)脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產(chǎn)塑料、地板磚，廚房用具，防火纖維，商業(yè)濾膜，膠水和阻燃劑。2. 乳制品是指以生鮮牛羊乳及其制品為主要原料，經(jīng)加工而制成的各種食品。本標(biāo)準(zhǔn)所指的乳制品包括液體乳類(lèi)殺菌乳、滅菌乳、酸牛乳、配方乳、乳粉類(lèi)全脂乳粉、脫脂乳粉、全脂加糖乳粉和調(diào)味 乳粉、嬰幼兒乳粉、其他配方乳粉、含乳飲料類(lèi)、煉乳類(lèi)全脂無(wú)糖煉乳、 全脂加糖煉乳、調(diào)味煉乳； 配方煉乳、乳脂肪類(lèi)稀奶油、奶油、無(wú)水奶油、干酪類(lèi)原干酪；再制干酪、乳冰淇淋類(lèi)乳 冰

3、淇淋、乳冰和其他乳制品類(lèi)干酪素、乳糖、乳清粉、濃縮乳清蛋白等。二. 高效液相色譜法測(cè)定1. 原理試樣經(jīng)溶解、超聲提取、沉淀蛋白、過(guò)濾得到測(cè)試液，經(jīng)高效液相色譜測(cè)定，根據(jù)保存時(shí)間和紫外 吸收光譜定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。2試劑方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純?cè)噭?，水為GB/T 6682-2021中一級(jí)用水，溶液為水溶液。2.1 磺基水楊酸。2.2 檸檬酸。2.3 辛烷磺酸鈉：高效液相色譜離子對(duì)試劑。2.4 乙腈：色譜純。2.5 鹽酸。2.6 60 g/L磺基水楊酸：稱(chēng)取 60 g磺基水楊酸用水定容至 1 L。2.7 0.1 mol/L鹽酸：量取8.3 mL鹽酸用水稀釋至 1 L。2.8

4、緩沖液：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L。2.9 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于99%。2.10標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液：稱(chēng)取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g 準(zhǔn)確至0.0 001g,用甲醇配制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液。2.11標(biāo)準(zhǔn)系列：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液用 0.1 mol/L鹽酸逐級(jí)稀釋至 0.25 曲/mL , 0.50舊/mL,1.00 g/mL , 2.00 jg/mL , 4.00 g/mL, 5.00 /mL , 10.0 /mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。3 儀器成套性3.1 高效液相色譜儀3.1.1 P3000型 高壓輸液泵3.1.2 UV3000 紫外檢測(cè)器3.1.3 Rehodyne手動(dòng)進(jìn)樣閥20

5、卩I3.1.4 CXTH3000 色譜工作軟件3.1.5 ODS VenusilASB-C18 色譜柱 250 mm X 4.6 mm, 5 呵3.1.6 分析啟開(kāi)工具包3.1.7 溶劑托盤(pán)3.1.8 試劑包3.1.9 保護(hù)柱和柱芯3.1.10 真空固相萃取裝置含混合型的陽(yáng)離子交換柱 10根3.2溶劑過(guò)濾器含真空泵3.3超聲波清洗器3.4柱溫箱3.5高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 >4 000 r/min3.6旋渦混勻器3.7分析天平：感量 0.1mg4樣品處理4.1固態(tài)乳制品稱(chēng)取1.0 g左右試樣準(zhǔn)確至 0.0 001 g,參加0.1 mol/L鹽酸約15 mL,渦旋混勻，超聲提取 30 min后參

6、加60 g/L磺基水楊酸6 mL 8 mL ,用0.1 mol/L鹽酸定容至25 mL,混勻后離心，上清液經(jīng) 0.45 m的微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。4.2 液態(tài)乳制品包含酸奶稱(chēng)取15 g左右試樣準(zhǔn)確至 0.0 001 g,參加60 g/L磺基水楊酸 3 mL4 mL ,用0.1 mol/L鹽酸 定容至25 mL ,混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 m的微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。4.3 飼料稱(chēng)取1.0g左右試樣準(zhǔn)確至0.0 001 g,將樣品用研缽充分碾碎混勻，參加0.1 mol/L鹽酸約15 mL ,渦旋混勻，超聲提取 30 min 后參加 60 g/L 磺基水楊酸 6 mL 8 mL ，用 0.1 mol

7、/L 鹽酸定容至 25 mL ， 混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 m的微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。5 測(cè)定步驟5.1 色譜條件5.1.1 色譜柱：ODS 或 C8, 250 mm X 4.6 mm, 5 pm。5.1.2 流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85 ： 15。5.1.3 流速：1.0 mL/min。5.1.4 柱溫：40 C。5.1.5 波長(zhǎng)：240 nm。上述色譜條件是典型的, 可根據(jù)實(shí)際情況做具體調(diào)整。如果別離效果不理想,將水相改為：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L，加3mL三氯乙酸，配制成1000mL溶液，流動(dòng)相用氨水調(diào) PH值3.9到 3.95。5.2 測(cè)定5.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備將

8、標(biāo)準(zhǔn)系列 0.25 用/mL , 0.50(jg/mL, 1.00 曲/mL, 2.00 (g/mL, 4.00 (g/mL , 5.00 (g/mL , 10.0(jg/mL分別進(jìn)樣20(L,以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.2.2 樣品測(cè)定取制備好的試樣溶液進(jìn)樣20山,進(jìn)行液相色譜分析。根據(jù)保存時(shí)間和紫外吸收光譜定性，根據(jù)峰1,液態(tài)奶樣品色譜圖見(jiàn)圖2，奶粉樣品色譜圖見(jiàn)圖 3。面積進(jìn)行定量。三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見(jiàn)圖儀器：山東金普分析儀器LC3000色譜柱：山東金普分析儀器OD柱250 mmx 4.6 mm, 5卩m流動(dòng)相：緩沖液：乙腈 =85 ： 15,用三氯乙酸調(diào)P

9、H3.9流速：1.0 mL/min圖1標(biāo)樣色譜圖柱溫：40 °C波長(zhǎng)：240 nm圖2液態(tài)奶樣品色譜圖儀器：山東金普分析儀器LC3000色譜柱：山東金普分析儀器0D柱250 mmx 4.6 mm, 5卩m流動(dòng)相：緩沖液：乙腈 =85 ： 15,用三氯乙酸調(diào)PH3.9流速：1.0 mL/min柱溫：40 °C波長(zhǎng)：240 nm圖3奶粉樣品色譜圖儀器：山東金普分析儀器LC3000色譜柱：山東金普分析儀器OD柱250 mmx 4.6 mm, 5卩m流動(dòng)相：緩沖液：乙腈 =85 : 15,用三氯乙酸調(diào)PH3.9流速：1.0 mL/min柱溫：40 C波長(zhǎng)：240 nm6結(jié)果計(jì)算6.

10、1 計(jì)算試樣中三聚氰胺的含量mg/kg按式1計(jì)算：Cx V(1)X =m式中：X 樣品中三聚氰胺含量，mg/kg ;C 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的含量，jg/mL ；V 定容體積，mL;m稱(chēng)樣量，g。平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保存三位有效數(shù)字。本文參考以下方法：HPLC-UV檢測(cè)方法按照三聚氰胺在傳統(tǒng)的 C18 柱上保存很差， 需要用離子對(duì)試劑色譜方法才能有良好的保存與別離， 美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局FDA的三聚氰胺檢測(cè)方法和中國(guó)農(nóng)業(yè)部頒部的三聚氰胺檢測(cè)方法，采用北 京創(chuàng)新通恒科技的 ODS C18色譜柱，能夠得到良好的結(jié)果。1、三聚氰胺的FDA檢測(cè)方法色譜柱：山東金普分析儀器ODS4.6 X 250mm緩沖液：10mM寧檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào) pH為3.0。流動(dòng)相：緩沖液：乙腈 =85： 15進(jìn)樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL,進(jìn)10卩L,進(jìn)樣前用0.22卩m針式過(guò)濾器過(guò)濾流 速： 1.0mL/min柱溫：40 C波 長(zhǎng)： 240nm2、三聚氰