反義核酸誘導(dǎo)治療白血病的研究進(jìn)展

1、反義核酸誘導(dǎo)治療白血病的研究進(jìn)展         08-04-22 13:57:00     作者：徐酉華 李建廠    編輯：studa20【摘要】  反義技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一門(mén)治療腫瘤的新技術(shù)，已成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一，許多反義藥物已開(kāi)始進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段，并取得了令人滿(mǎn)意的療效。文章主要綜述了反義技術(shù)的作用機(jī)制，在白血病方面所選用的靶基因以及研究進(jìn)展。 【關(guān)鍵詞】  反義核酸白血病腫瘤細(xì)胞因其自身的生長(zhǎng)特性而

2、有一些特異表達(dá)的基因，這些基因在正常細(xì)胞不表達(dá)或表達(dá)程度很低，因而針對(duì)這些基因的反義藥物在治療腫瘤時(shí)對(duì)正常組織不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生較小的副作用。目前選擇的抗腫瘤反義藥物的靶點(diǎn)主要有：癌基因類(lèi)：c?鄄myc、c?鄄myb，bcl?鄄2，N?鄄Ras，K?鄄Ras，H?鄄Ras，c?鄄un，c?鄄fos，cdc?鄄2，c?鄄mos等。宿主基因類(lèi)：如多藥耐藥基因、細(xì)胞周期素、前胸腺素、T細(xì)胞受體、表皮生長(zhǎng)因子受體、蛋白激酶C等。細(xì)胞因子類(lèi)：如IL?鄄2，IL?鄄1，IL?鄄1等1。在白血病方面，被研究的基因主要有以下方面。    1癌基因類(lèi)   

3、 11Bcl?鄄2    目前的研究已表明：bcl?鄄2基因是一個(gè)耐藥和抗凋亡基因。bcl?鄄2蛋白表達(dá)的高低與腫瘤細(xì)胞對(duì)多種化療藥物敏感性密切相關(guān)，bcl?鄄2基因的過(guò)度表達(dá)可明顯降低化療藥物引起的細(xì)胞凋亡。Zhang等2將三氧化二砷與bcl?鄄2的反義寡核苷酸聯(lián)用，作用于K562和NB4細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)反義寡核苷酸能明顯促進(jìn)白血病細(xì)胞系對(duì)三氧化二砷的敏感性。    Bcl?鄄2的過(guò)表達(dá)被認(rèn)為是白血病耐藥、預(yù)后差的重要原因之一，那么，降低bcl?鄄2的表達(dá)，則可部分逆轉(zhuǎn)其耐藥，增加緩解率。根據(jù)這一設(shè)想Marcucci等3利用bcl?鄄

4、2反義寡核苷酸藥物G3139進(jìn)行了臨床實(shí)驗(yàn)，病人共20例，包括難治及復(fù)發(fā)的急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓細(xì)胞性白血病。采用G3139與氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷及粒細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合用藥，9例病人對(duì)治療有反應(yīng)，其中6例取得完全緩解，3例部分緩解；在12例可評(píng)價(jià)的病人中，9例bcl?鄄2 mRNA水平下調(diào)，此項(xiàng)研究證實(shí)，bcl?鄄2反義寡核苷酸能夠在治療白血病中起到積極作用。已有研究證實(shí)，針對(duì)bcl?鄄2 mRNA翻譯起始部位的反義寡核苷酸（AS?鄄ODN）可抑制許多腫瘤細(xì)胞中bcl?鄄2的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性4。    12Bcl?鄄xL 

5、;   Bcl?鄄x mRNA前體經(jīng)過(guò)不同的剪接可產(chǎn)生兩種不同的mRNA，表達(dá)產(chǎn)物分別為抗凋亡的Bcl?鄄xL和促凋亡的Bcl?鄄xS。近來(lái)的一些研究報(bào)道提出凋亡抑制蛋白Bcl?鄄xL和許多常見(jiàn)惡性腫瘤的化療耐藥有密切關(guān)系。在體外轉(zhuǎn)染針對(duì)Bcl?鄄xL基因的ASODN以后，能夠誘導(dǎo)多種惡性腫瘤細(xì)胞凋亡，或促進(jìn)其對(duì)化療藥物的敏感性。 Broome等5進(jìn)行了Bcl?鄄xL的反義寡核苷酸作用于急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞系CEM的研究，經(jīng)反義寡核苷酸干預(yù)18h后，與對(duì)照組相比，CEM細(xì)胞的Bcl?鄄xL蛋白表達(dá)及活細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯降低，聯(lián)合應(yīng)用地塞米松或阿霉素則作用效果更為明顯，結(jié)果

6、證實(shí)Bcl?鄄xL反義寡核苷酸具有細(xì)胞毒活性，能夠增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞死亡。    13c?鄄myb    c?鄄myb基因?qū)儆诎┗虻囊环N，與細(xì)胞周期進(jìn)展有關(guān)。c?鄄myb蛋白水平隨細(xì)胞周期的進(jìn)程而短暫升高。在細(xì)胞終末分化階段c?鄄myb的表達(dá)迅速下降。c?鄄myb的表達(dá)能阻斷正在分化的骨髓細(xì)胞成熟。Luger 等6用c?鄄myb的反義寡核苷酸對(duì)部分慢性粒細(xì)胞白血病病人在自體骨髓移植前進(jìn)行骨髓凈化，提取CD34(+)骨髓細(xì)胞，用c?鄄myb的反義寡核苷酸凈化24h（19例）或72h（5例），檢測(cè)c?鄄myb mRNA發(fā)現(xiàn)其表

7、達(dá)水平下降大約50，細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)期原代培養(yǎng)，檢測(cè)bcr/abl發(fā)現(xiàn)超過(guò)50的病人取得了完全的凈化，第100d細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，盡管自體移植前100%的病人呈Philadelphia染色體陽(yáng)性，但移植后有6/14的病人有細(xì)胞遺傳學(xué)改變，其中1例獲得完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解，3例hiladelphia(+)病人細(xì)胞降至33以下，與對(duì)照組相比效果明顯。    2凋亡抑制蛋白家族    腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞的凋亡受阻密切相關(guān)，許多凋亡抑制蛋白（IAP）家族成員已成為基因治療的有效靶點(diǎn)。Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡抑制基因，定位于17

8、q25上，廣泛地表達(dá)于胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞，在正常分化成熟組織中未見(jiàn)表達(dá)。Survivin以細(xì)胞周期依賴(lài)特異性表達(dá)于G2/M期，參與有絲分裂過(guò)程中紡錘體的形成，保持有絲分裂的真實(shí)性，從而使細(xì)胞順利通過(guò)G2/M期。研究表明urvivin基因在胚胎發(fā)育及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要的作用。大多數(shù)白血病細(xì)胞表達(dá)urvivin基因，而正常骨髓細(xì)胞均不表達(dá)urvivin。由于urvivin在腫瘤細(xì)胞中的特異性表達(dá)，使它在理論上成為反義基因治療腫瘤的一個(gè)新靶點(diǎn)。Olie等針對(duì)urvivin mRNA設(shè)計(jì)6條ASODN，然后應(yīng)用熒光定量PCR篩選到下調(diào)mRNA作用最強(qiáng)的ASODN40037, 8

9、。王曉娟等9將urvivin基因反義核酸通過(guò)電穿孔的方法轉(zhuǎn)染入白血病細(xì)胞系HL?鄄60，發(fā)現(xiàn)urvivin mRNA的表達(dá)下降，進(jìn)一步與紫杉醇聯(lián)用發(fā)現(xiàn)urvivin反義核酸能夠增加HL?鄄60細(xì)胞的凋亡。    3端粒酶    端粒酶是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白復(fù)合物，含有端粒重復(fù)序列的模板，能以自身RNA為模板，復(fù)制合成端粒重復(fù)序列，對(duì)維持細(xì)胞的生存起著極其重要的作用。研究表明在人體大部分正常組織中沒(méi)有端粒酶活性表達(dá)，僅在胚胎細(xì)胞、睪丸、卵巢、肝細(xì)胞、造血干細(xì)胞及正常白細(xì)胞等部分細(xì)胞中有端粒酶很弱的表達(dá)，與之相反，約有85

10、的腫瘤細(xì)胞表達(dá)較高的端粒酶活性。這說(shuō)明端粒酶激活在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中普遍存在，端粒酶可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。端粒酶由三部分組成：人端粒酶催化亞單位（hTERT），人端粒RNA(hTR)，端粒酶相關(guān)蛋白（TP1）。Yuan等將端粒酶HTERT反義寡核苷酸與CDDP 聯(lián)合作用于HL?鄄60 及K562細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)該反義寡核苷酸能增加HL?鄄60及K562對(duì)CDDP的敏感性，誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞系的凋亡。之后，他們又對(duì)急性及慢性髓細(xì)胞性白血病病人的白血病細(xì)胞進(jìn)行類(lèi)似實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也證實(shí)端粒酶HTERT反義寡核苷酸能夠促進(jìn)白血病細(xì)胞對(duì)CDDP的敏感性10, 11。    4蛋白激酶C

11、    蛋白激酶C（PKC）是絲?鄄蘇氨酸蛋白酶家族，參與信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，調(diào)控生長(zhǎng)因子應(yīng)答，控制細(xì)胞增殖和凋亡，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。因此，PKC成為抗腫瘤治療的靶點(diǎn)。Thonel A等12用蛋白激酶C反義核苷酸作用于AML細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)應(yīng)用反義核酸對(duì)白血病細(xì)胞作用有限，但如果與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用卻能取得讓人滿(mǎn)意的結(jié)果。    5耐藥基因類(lèi)    腫瘤細(xì)胞耐藥是化療失敗的一個(gè)重要原因，各方學(xué)者都在探討逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的方法，這些方法多在P?鄄gp水平起作用，且副作用較大。從基因水平逆轉(zhuǎn)其耐藥便成為研究熱點(diǎn)方向。多藥耐藥基因（MDR1）在腫瘤耐藥中起了重要的作