重大動物疫病采樣監(jiān)測技術

1、 重大動物疫病采樣重大動物疫病采樣 監(jiān)測技術監(jiān)測技術 中牟縣動物疫病預防控制中心 席雙藝一、畜禽血液采集技術一、畜禽血液采集技術v（一）、血液采集的要求：v1、所有采血用具均應事先消毒、干燥處理；v2、采血部位要進行剪毛、清拭并按常規(guī)進行消毒。v3、懷疑傳染病時，采血過程要防止到處流散，檢后的殘余血液及所用器皿要進行消毒處理。v4、需抗凝的要加入抗凝劑。v5、需分離血清的血液，試管要靜置、斜放，便于血清晰出。v6、注意安全。二、各種畜禽采樣方法及部位二、各種畜禽采樣方法及部位v（一）、牛:多采用頸靜脈采血、尾靜脈采血。v1、頸靜脈采血一般在頸靜脈溝的上1/3和中1/3交界處的頸靜脈內。v2、尾

2、靜脈采血在尾根腹側中部。牛頸靜脈采血牛頸靜脈采血牛尾靜脈采血（二）、豬：多采用耳靜脈采血、前腔靜脈采血v1、耳靜脈采血（適用于大豬）在耳下緣1/2處。v2、前腔靜脈采血，胸淺窩內，即在第一肋骨和胸骨柄結合處前方。豬耳靜脈采血豬前腔靜脈采血豬前腔靜脈采血（三）、家禽：多采用雞翅內側靜脈采血、雞心臟采血v1、雞翅內側腋靜脈，肉眼可見。v2、雞心臟采血，雞仰臥保定，雞頭部朝向，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窩，右手持針，自胸骨上方凹窩斜向前下方心臟方向刺入，邊刺邊抽動活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器，術畢，局部消毒。v注意：此法采血后，多會引起雞只死亡，僅適用于淘汰雞的采

3、血。雞翅靜脈采血雞翅靜脈采血雞翅靜脈采血雞心臟采血三、畜禽病料采集技術三、畜禽病料采集技術v（一）、樣品采集的原則（一）、樣品采集的原則v1、適時采樣。根據(jù)檢測要求及檢測對象和檢驗項目的不同，選擇適當?shù)牟蓸訒r機十分重要。樣品是有時間要求的，應嚴格按規(guī)定時間采樣，有臨床癥狀需要作病原分離的，樣品必須在病初的發(fā)熱期或癥狀典型時采樣，病死的動物，應立即采樣。v2、合理采樣。根據(jù)診斷檢測的要求，須嚴格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應按可能的疫病側重采樣。對未能確定為何種疫病的，應全面采樣。v3、典型采樣。選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應兼顧采

4、樣。v4、無菌采樣。供病原學及血清學檢驗的樣品，必須無菌操作采樣，采樣用具、容器均須無菌處理，尸體剖檢需采集樣品的，先采樣后檢查，以免人為污染樣品。v5、適量采樣。采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測的需要，并留有余地，以備必要時復檢使用。v6、樣品處理。采集的樣品應一種樣品一個容器，立即密封，根據(jù)樣品的性狀檢驗要求的不同，作暫時的冷藏、冷凍或其它處理。v7、安全采樣。既要保護采樣人員，以要防止病原外泄，還要防止樣品受到污染。v8、樣品包裝。主要是密閉，防止樣品損壞、污染和外泄等意外發(fā)生。v9、迅速送檢。應盡快送實驗室進行檢測，延誤送檢時間，會影響到檢測質量和結果的可靠性。四、組織樣品的采集四、組織樣

5、品的采集v組織樣品一般由撲殺動物或病死動物解剖采集。從尸體采樣時，先剝去動物胸腹部皮膚，以無菌器械將腹腔打開，根據(jù)檢驗目的和生前疫病的初步診斷，無菌采集不同的組織。v1、病毒檢驗樣品。作病毒檢驗的組織，必須以無菌技術采集，組織應分別放入滅菌的容器內并立即密封，貼上標簽，放入冷藏容器立即送實驗室。如果時間較長，可作凍結狀態(tài)運送。v2、細菌檢驗樣品。供細菌檢驗的組織樣品，應新鮮并以無菌技術采集。如遇尸體已經(jīng)腐敗，某些疫病的致病菌仍可采集于長骨或肋骨，從骨髓中分離細菌。采集的所有組織分別放入滅菌的容器內并立即密封，貼上標簽，放入冷藏容器立即送實驗室。豬解剖采樣五、糞便樣品的采集五、糞便樣品的采集v1

6、、病毒檢驗樣品。分離病毒的糞便必須新鮮。少量采集時，以滅菌的棉拭子從直腸深處或泄殖腔粘膜上蘸取糞便，并立即投入滅菌的試管內密封，或在試管內加入少量PH7.4的保護液再密封。貼上標簽冷藏送實驗室。v2、細菌檢驗樣品。作細菌檢驗的糞便，最好在動物使用抗菌藥物之前，從直腸或泄殖腔粘膜上采集，采樣方法與供病毒檢驗的相同?？赏度霟o菌緩沖鹽水管內，貼上標簽冷藏送實驗室。v3、寄生蟲檢驗樣品。糞便樣品應選取新排出的或直接從直腸內采得，以保持蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)，一般寄生蟲檢驗的糞便用量較多。采得的糞便以冷藏不凍結狀態(tài)送實驗室。糞便采集用品糞便采集用品糞便采集用品六、畜禽疫病的樣品采集v（一）、口蹄

7、疫樣品的采集（一）、口蹄疫樣品的采集v口蹄疫病毒在病畜的水皰皮內及其淋巴液中口蹄疫病毒在病畜的水皰皮內及其淋巴液中含毒量最高。在水皰發(fā)展過程中，病毒進入含毒量最高。在水皰發(fā)展過程中，病毒進入血流，分布到全身各種組織和體液。在發(fā)熱血流，分布到全身各種組織和體液。在發(fā)熱期血液內的病毒含量最高，退熱后在奶、尿、期血液內的病毒含量最高，退熱后在奶、尿、口涎、淚、糞便等都含有一定量的病毒?？谙?、淚、糞便等都含有一定量的病毒。v1、組織樣品v（1）、樣品的選擇：用于病毒分離、鑒定的樣品以發(fā)病動物未破裂的水泡皮和水泡液為最好。對臨床健康但懷疑帶毒的動物可在撲殺后采集淋巴結、脊髓、肌肉等組織樣品作為檢測材料。

8、v（2）、樣品的采集和保存：樣品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒劑消毒、擦拭)，剪取病畜的新鮮水泡皮35克放入滅菌小瓶中，加適量50甘油磷酸鹽緩沖液(pH7.4)，加蓋密封；也可采用無菌器具采集水泡液至少1毫升，裝入滅菌小瓶中(可加適量抗菌素)，加蓋密封。盡快冷凍保存。v（3）、在無法采集水泡皮和水泡液時，可采集淋巴結、脊髓、肌肉等組織樣品35克裝入潔凈小瓶內，加蓋密封盡快冷凍保存。樣品的包裝瓶上均要貼上標簽，寫明采樣地點，動物種類，編號，時間等。2、牛、羊 (OP液)樣品采集v（1）、樣品采集：被檢動物在采樣前禁食(可飲水)12小時，以免胃內容物反流污染OP液。采樣探杯在使用前

9、經(jīng)02檸檬酸或2氫氧化鈉浸泡5分鐘，再用潔凈水沖洗。每采完一頭動物，探杯要重復進行消毒并充分清洗。采樣時動物站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部1015cm處，輕輕來回移動23次，然后將探杯拉出。v（2）、樣品的保存：將采集到的810mLOP液倒入25 mL以上的滅菌玻璃容器中，容器中應事先加有810mL磷酸緩沖液(0.04molL、pH74)，密封后充分搖勻后盡快冷凍保存，用于病原檢測，做出追溯性診斷。3、血清樣品采集v懷疑曾有疫情發(fā)生的畜群，錯過組織樣品采集時機時，可無菌操作采集動物血液，每頭不少于10mL。無菌分離血清裝入滅菌小瓶中，加蓋密封后冷藏保存，通過檢測抗體，做出追溯性診斷。豬

10、口蹄疫樣品采集羊 (OP液)樣品采集牛(OP液)樣品采集牛(OP液)樣品采集（二）、禽流感的樣品采集（二）、禽流感的樣品采集v1、至少從5只瀕死禽采集樣品。樣品包括：泄殖腔拭子和氣管拭子(置于緩沖液中)各5個；氣管和肺的混樣5個，腸管及內容物的混樣5個；肝、脾、腎和腦等組織樣品各5個。v2、分別采集至少10個病雞的血樣。采集10只病禽的血樣，使用一次性采血器，心臟或翅靜脈采血，每只禽采血樣2ml3ml，經(jīng)離心或自然析出血清后，將血清移到指形管中。封好口，貼好標簽。不同禽只的血樣不能混合。（三）、豬瘟樣品的采集v豬瘟病毒復制的主要部位是扁桃體，然后經(jīng)淋巴管進入淋巴結，繼續(xù)增殖，隨即到達外周血液，從這時起病毒在脾、骨髓、內臟淋巴結和小腸的淋巴結組織繁殖到高滴度。v樣品：全血、骨髓、淋巴結、扁桃體、腎臟、脾臟（四）、豬鏈球菌樣品采集（四）、豬鏈球菌樣品采集v致病性鏈球菌經(jīng)呼吸道或其它途徑（受損的皮膚和粘膜）進入機體后，首先在入