第14章液相色譜法

1、第20章 高效液相色譜法High Performance Liquid Chromatography(HPLC)Akta explorer高壓層析系統(tǒng)紫外在線檢測用高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)用高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)4.5 107Pa）流動(dòng)相）流動(dòng)相（液體），用（液體），用以特殊方法用小粒徑填料（固定相）以特殊方法用小粒徑填料（固定相）填充而成的色譜柱分離，同時(shí)柱后連有高靈敏度檢填充而成的色譜柱分離，同時(shí)柱后連有高靈敏度檢測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測的液相色譜測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測的液相色譜HPLC是在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的是在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的

2、柱內(nèi)徑柱內(nèi)徑15cm 0.4cm柱長度柱長度50100cm1550cm填充物粒度填充物粒度 150200 m410 m使用壓力使用壓力110atm50200atm分離時(shí)間分離時(shí)間0.5 1天天 10min 高效、高速和高靈敏度高效、高速和高靈敏度 GC采用的流動(dòng)相中為有限的幾種采用的流動(dòng)相中為有限的幾種“惰性惰性”氣體，在分氣體，在分離離 中只起運(yùn)載作用，對組分作用??；中只起運(yùn)載作用，對組分作用??； HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供 選擇的機(jī)會(huì)多；它除了起運(yùn)載作用外，還對分離產(chǎn)生選擇的機(jī)會(huì)多；它除了起運(yùn)載作用外，還對分離產(chǎn)生 很大貢獻(xiàn)（分

3、離可通過流動(dòng)相控制或改進(jìn)）很大貢獻(xiàn)（分離可通過流動(dòng)相控制或改進(jìn)） 流動(dòng)相對分離起重要作用，且可以選擇的流動(dòng)相種類很多流動(dòng)相對分離起重要作用，且可以選擇的流動(dòng)相種類很多 GC常在高流速和高溫下進(jìn)行；常在高流速和高溫下進(jìn)行； HPLC常在低流速和室溫下進(jìn)行。常在低流速和室溫下進(jìn)行。 流動(dòng)相流速與操作溫度低流動(dòng)相流速與操作溫度低 開管開管GC中無渦流擴(kuò)散項(xiàng)，柱內(nèi)效應(yīng)主要由分子擴(kuò)散決定中無渦流擴(kuò)散項(xiàng)，柱內(nèi)效應(yīng)主要由分子擴(kuò)散決定 HPLC中分子擴(kuò)散可以忽略，柱內(nèi)效應(yīng)主要由渦流擴(kuò)散和中分子擴(kuò)散可以忽略，柱內(nèi)效應(yīng)主要由渦流擴(kuò)散和 傳質(zhì)阻力決定傳質(zhì)阻力決定 柱內(nèi)效應(yīng)的影響因素與程度不同柱內(nèi)效應(yīng)的影響因素與程度

4、不同 操作壓力高操作壓力高 GC采用低壓采用低壓(2000）的化合物）的化合物以以多孔凝膠多孔凝膠為固定相，依據(jù)為固定相，依據(jù)組分分子大小和形狀的不同組分分子大小和形狀的不同進(jìn)行分進(jìn)行分離的液相色譜法。離的液相色譜法。比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入孔穴中而被排阻，最早出峰，比凝膠比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入孔穴中而被排阻，最早出峰，比凝膠孔徑小得多的小分子則完全滲透，最后流出色譜柱，中等大小的分孔徑小得多的小分子則完全滲透，最后流出色譜柱，中等大小的分子部分滲透，則按其分子大小，分子量大的先后從柱中流出。子部分滲透，則按其分子大小，分子量大的先后從柱中流出。類型類型 材料材料 型號(hào)型號(hào) 特點(diǎn)特點(diǎn) 流動(dòng)相流動(dòng)相 葡萄糖凝膠葡萄糖凝膠 Sephadax 水水 軟性凝膠軟性凝膠 聚苯乙烯聚苯乙烯 Bio-head-S 溶脹溶脹,小分小分子分離子分離 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 聚苯乙烯聚苯乙烯 Styragel 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 半剛性凝膠半剛性凝膠 聚乙酸酯聚乙酸酯 Emgel(OR) 溶脹溶脹較小較小流速較小流速較小 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 玻璃珠玻璃珠 CPG-10 有機(jī)溶劑和水有機(jī)溶劑和水 剛性凝膠剛性凝膠 多孔硅膠多孔硅膠 Porasil 剛性大、剛性大、高高流速分離流速分離 有機(jī)溶劑和水有機(jī)溶劑和水 極性增加極性增加不溶于水不溶于水溶于水溶于水非極性非極