總有機(jī)酸測(cè)量

1、氣相色譜法： 乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量， 用氣相色譜法測(cè)定 ，測(cè)定條件為： 檢測(cè)器 F1D， 柱2mx 4 mn,固定相Pora pak Q（80目），柱溫220°C，汽化室和檢測(cè)器溫度 260°C, 2=65mL min , Air=550 mL / min , Hb=55 mL/min，靈敏度 16 x 10 x，紙速 5mm7 min酸堿滴定法測(cè)定總有機(jī)酸含量1、氫氧化鈉溶液（0 . 1 mol L-1 ）的配制取適量氫氧化鈉加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，靜置，澄清后備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5. 6mL,加新沸放冷的蒸餾水使成1 000 mL ，搖勻。2、

2、 供試品溶液的制備精密稱取板藍(lán)根提取物0.4 g,置50mLL隹形瓶中，無(wú)水乙醇溶解， 即得。3、 樣品含量測(cè)定供試品溶液中，加入酚酞指示液2滴，用標(biāo)定好的氫氧化鈉滴定液（0 . 074 9 mol L-1）滴定，滴定至溶液顯粉紅色。每1 mL氫氧化鈉滴定液相當(dāng)于 9. 916 mg的水楊酸 （C7H603） ，總有機(jī)酸以水楊酸計(jì)。 反相高效液色譜法測(cè)定板藍(lán)根總有機(jī)酸中水楊酸的含量1、 色譜條件Kromasil C18柱 （4 . 6 mmx 250mm 5詢；流動(dòng)相乙腈-1 %醋酸水溶液（25 :75）,檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm,流速10 mL/min-1,柱溫為室溫，理論塔板數(shù)按水楊酸計(jì)算不低

3、于3 000。2、 對(duì)照品溶液的配制 精密稱定干燥的水楊酸對(duì)照品10. 6 mg 100 m量瓶甲醇定容， 搖勻，0. 45 5微孔濾膜過(guò)濾，即得對(duì)照品溶液。3、 供試品溶液的制備 精密稱取板藍(lán)根提取物 0.25 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液1 mL,置100 mL量瓶，甲醇稀釋至刻度，搖勻，用 0. 45 5微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即為供試品溶液。4 、線性關(guān)系的考察 精密量取上述配制的對(duì)照品溶液 0.25, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 5. 0,6. 0 mL置10 ml量瓶中，無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻， 0. 45 5微孔濾膜過(guò)濾，取上

4、述溶液 在選定的色譜條件下,分別進(jìn)樣105L, 以峰面積為縱坐標(biāo),含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程Y=2760X+105.0, r=0.9998。結(jié)果水楊酸在0.027 0.63用線性關(guān)系良好。5 、精密度試驗(yàn)對(duì)同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣 5次，測(cè)定峰面積值， RSD 1.0%。6 、重復(fù)性試驗(yàn)取提取物粉末 5份，適量，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，測(cè) 定計(jì)算含量， RSD 1.2%。液相色譜法測(cè)總有機(jī)酸:1 儀器與試劑儀器 :Water s600E 高效液相色譜儀 （ 包括四元溶劑泵、 U6 K 進(jìn)樣器、真空脫氣機(jī)以及 Water s 486紫外檢測(cè)器 ） ,810 數(shù)據(jù)采集和色譜數(shù)

5、據(jù)處理軟件 , 離心機(jī) （金壇市江南儀器廠 ） ,p H 計(jì) （ 上海埃依琪實(shí)業(yè)有限公司 ） .試劑 : 乙腈和甲醇均為色譜純 ; 磷酸、甲酸、乙酸、丙酸和磷酸二氫鉀均為分析純 ; 水為二 次蒸餾水 .2 色譜分離條件色譜柱: Kromasil C18 150 mm x4 . 6 mm 柱,5 5m ,流動(dòng)相為 0 . 015 mol/ L 磷酸二氫 鉀緩沖溶液2乙腈溶液（體積比為98 % : 2 %）,用磷酸調(diào)節(jié)p H至2.30 , 流速1 . 0 mL/ min , 進(jìn)樣量 7 . 55L , 柱溫為室溫 , 沖洗方式為等度沖洗 , 紫外檢測(cè)波長(zhǎng) 210 nm.3 流動(dòng)相的配制稱取1. 3

6、6 g 磷酸二氫鉀 ,用蒸餾水溶解并定容至 500 mL ,用磷酸調(diào)節(jié) p H 至2. 30 , 用0. 45 5m 合成纖維素酯膜進(jìn)行真空超濾,用超聲波脫氣后備用 .4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制取0. 96 mL 乙酸、 0. 92 mL 甲酸、 1. 02 mL 丙酸放入 50 mL 容量瓶中 ,用蒸餾水溶解并定容至50mL配成有機(jī)酸混合標(biāo)樣濃度為20 g/ L的儲(chǔ)備液.然后取一定量的儲(chǔ)備液，分別配制成質(zhì)量濃度均為0. 05 、0. 1 、0. 5 、1. 0 和1.5 g/ L的系列有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液5 樣品預(yù)處理取采油微生物發(fā)酵液20 mL ,用濾紙過(guò)濾去除菌體，取2 mL濾液，以10 000 r/

7、 min 的速 率離心10 min , 清液用0. 45卩m的濾膜過(guò)濾后進(jìn)行 HPL(分析.有機(jī)酸及酸味劑的分離分析食品中的有機(jī)酸和酸味劑(acidula nts )是食品酸味和鮮味的重要成分，也對(duì)食品的防 腐保鮮起重要作用。圖6-4-41為咖啡酸及其衍生物的反相鍵合相色譜分離圖。色譜柱為L(zhǎng)ichrosorb SI-100-C18(10 口, 4.2mmX 300mm,流動(dòng)相為 20%乙酸水溶液，流量為4.5ml/min，用 UVD(254nm)檢測(cè)。圖6-4-42為白葡萄酒中酸味劑的分析譜圖。色譜柱為BioRad HPX87-H反相鍵合相柱(9 g,7.8mmx 300mm,流動(dòng)相為0.00

8、35mol/ml H 2SO4溶液恒定組成洗脫，流量為 0.6ml/min，柱 溫為65oC，進(jìn)樣10，用UVD(192nm或210nm)檢測(cè)。圖6-4-41咖啡酸及其衍生物的分離1奎寧酸；2綠原酸；3咖啡酸；4對(duì)香豆酸；5間香豆酸；6鄰香豆酸；7香豆素0.4-C51C152025r/min圖6-4-42白葡萄酒中酸味劑的分析1草酸；2檸檬酸；3酒石酸；4蘋果酸；5三氧化硫；6丁二酸；7乳酸；8甘油;9二甘醇；10乙酸；11 甲醇；12乙醇；A白葡萄酒樣品；B 標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)酸0246810十/min圖6-4-43蜂王漿中10-羥基-S -2-癸烯酸的分析1對(duì)羥基苯甲酸甲酯(內(nèi)標(biāo)物)；210-羥基-

9、5 -2-癸烯酸圖6-4-43為蜂王漿中有效成分10-羥基-5 -2-癸烯酸的分析譜圖。蜂王漿是工蜂采食花粉、 花蜜后，由工蜂體內(nèi)王漿腺分泌出的粘稠狀物質(zhì)，其含有蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、酶、激 素、乙酰膽堿和有機(jī)酸等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中含有的10-羥基-5 -2-癸烯酸，又稱蜂王酸，具有抗癌作用，它的色譜分析條件是色譜柱ODS(5m4.6mmx 250mm)流動(dòng)相為0.03mol/L鹽酸溶液/甲醇/水 ( 10: 55:35 )，流量為1ml/min，室溫，以對(duì)羥基苯甲酸甲酯(或辛二 酸)作內(nèi)標(biāo)物，用二極管陣列紫外吸收檢測(cè)器( UV PDAD,205nm )進(jìn)行檢測(cè)。方法：選定柱子開機(jī)設(shè)定壓力，

10、溫度，用超純水或者25%色譜級(jí)甲醇溶液洗柱（看流動(dòng)相選，不一定是甲醇） 換流動(dòng)相沖洗，帶色譜儀穩(wěn)定后，進(jìn)標(biāo)樣配置標(biāo)準(zhǔn)溶度的標(biāo)液這個(gè)要用超純水配置標(biāo)準(zhǔn)溶液，配法按照實(shí)驗(yàn)中講解的用稱量天平，精確稱量固體用洗凈的干燥的燒杯裝固體， 加入適量溶劑（色譜級(jí)，水要用超純水，避免雜質(zhì)進(jìn)入）溶解， 加入到容量瓶中，洗滌玻璃棒及燒杯2-3次，待離刻度12cm處改用滴管緩慢加入，液面凹陷處與標(biāo)線相切為止。封好容量瓶，搖晃使溶液均一后即可。用超聲溶解效果一般來(lái)說(shuō)更好些。配置流動(dòng)相這個(gè)看你做的是什么實(shí)驗(yàn)了。用超純水配置，然后要超聲35min，使流動(dòng)相中的氣泡被完全趕走。進(jìn)標(biāo)樣洗進(jìn)樣針，取一定量的標(biāo)樣這個(gè)要注意氣泡，一般是