殺蟲劑室內生物測定

1、1 2第二章 殺蟲劑室內生物測定n一、殺蟲劑室內生物測定的一般原則n1、供試昆蟲盡量一致n蟲態(tài)、蟲齡和生理上盡可能一致n2、控制環(huán)境因素盡量一致n溫度、濕度、光照對殺蟲劑和昆蟲的生理狀態(tài)都有影響3一、殺蟲劑室內生物測定的原則n3、必須設立對照，一般至少設2種對照n空白對照(溶劑對照)n標準藥劑對照4一、殺蟲劑室內生物測定的原則n4、必須設重復n生物測定的測試的對象不是昆蟲個體，而是群體。n一般重復至少4次，每個重復20-50頭試蟲。n(田間試驗重復35次)。5二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n1、殺蟲劑：n一般用原藥，純度95%以上，用丙酮配制。n許多殺蟲劑都有同分異構體，測定時應用純的化合物。n

2、避免農藥加工中的助劑對生物測定的影響。6二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2、昆蟲n2-1、昆蟲的發(fā)育階段n一般殺蟲劑對卵幾乎都沒有毒性：卵殼的特殊保護作用n蛹一般對殺蟲劑也不太敏感n成蟲的性別、營養(yǎng)及生理條件對其敏感性影響較大。n對幼蟲而言，低齡幼蟲對殺蟲劑比較敏感。7二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-2、昆蟲的性別與生殖狀態(tài)n性別的影響主要表現在成蟲期，在毒力測定中，對多數昆蟲，一般都規(guī)定只用一個性別。n雌蟲往往耐藥性更強。n雌蟲產卵后，對殺蟲劑變得敏感些。這可能與體重、脂肪含量和代謝能力有關。8二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-3、昆蟲的生理因素n越冬蟲：耐藥性較高n體內脂肪含量影響敏感性n

3、新陳代謝率越高，呼吸率越高，對殺蟲劑的敏感性越大。9二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-4、昆蟲的種群異質性nA、自然耐藥力nB、健壯耐藥力nC、殺蟲劑的抗藥性n在毒力測定中，應選擇異質性小的種群。10二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-1、溫度n正溫度系數、負溫度系數（2030）n溫度的影響：穿透作用、解毒代謝n處理前低溫處理果蠅、蜚蠊等，可提高對DDT的抗性，這與低溫飼養(yǎng)中形成的不飽和脂肪有關。11二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-1、溫度n處理后的低溫可使死亡增加，但殺死昆蟲的時間延長。30以上的高溫也能使死亡率增加。12二、影響殺

4、蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-2、濕度與水分n相對濕度對熏蒸劑的影響較大n濕度對昆蟲引誘劑及拒避劑有顯著影響。13二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-3、光照n光照對毒力測定的影響是間接的。在光照條件下，家蠅對DDT藥膜的死亡率較高，原因是光照增加了其活動性。14二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-4、營養(yǎng)與饑餓n有的營養(yǎng)物質可增加昆蟲體內的解毒酶n對胃毒劑的測定，饑餓是必要的。n饑餓可增加敏感性。15三、供試昆蟲的處理n室內毒力測定原則上用室內種群n對野外采集的種群，盡量選用一致的個體。(并在室內飼養(yǎng)1-2代)1

5、6三、供試昆蟲的處理n1、一般移取法n對棉鈴蟲等大個體昆蟲，可用鑷子n對蚜蟲、紅蜘蛛等，可用毛筆，注意刺吸式口器的口針。 17三、供試昆蟲的處理n2、趨光法n家蠅、果蠅等都有趨光性。18三、供試昆蟲的處理n3、麻醉法n3-1、二氧化碳法；n3-2、揮發(fā)蒸氣法：乙醚、三氯甲烷與乙醚（1：1）等，家蠅的麻醉時間一般在4分鐘以內。n3-3、冷凍法：適于家蠅、蜚蠊等試蟲，一般分兩步，先在5下冷凍10分鐘，再在0 下冷凍2-3分鐘。19三、供試昆蟲的處理n4、吸蟲法：n赤擬谷盜、米象等，用真空管等吸蟲。20三、供試昆蟲的處理n5、結果檢查n需要數清活動力強試蟲時，可把活蟲烘死后再數。n對紅蜘蛛等可采用下

6、列方法：n局部高溫法。放與60W的燈罩下烘，使活蟲爬走。2122232425卵形玻璃噴頭卵形玻璃噴頭 26 I-沉降噴霧塔；沉降噴霧塔；II-霧化器霧化器 27頗特噴霧塔的噴頭頗特噴霧塔的噴頭 28 29 一對鋼質空氣柜一對鋼質空氣柜（0.46m0.46m0.46m）和空氣柜相連接的直徑）和空氣柜相連接的直徑0.148m的鋁質的鋁質圓筒狀風道圓筒狀風道以及一個以及一個控制臺控制臺。底座左。底座左端有一調速鼓風機，右端封閉。鼓風機將空氣吹到端有一調速鼓風機，右端封閉。鼓風機將空氣吹到右邊空氣柜，經風道進入左邊空氣柜排出，而左邊右邊空氣柜，經風道進入左邊空氣柜排出，而左邊空氣柜和實驗室排風系統(tǒng)相連

7、。噴頭安在風道的右空氣柜和實驗室排風系統(tǒng)相連。噴頭安在風道的右邊，噴頭的噴嘴可以任意更換，噴嘴直徑邊，噴頭的噴嘴可以任意更換，噴嘴直徑0.045mm。裝試蟲的籠子放在風道左端。裝試蟲的籠子放在風道左端。氣霧風道氣霧風道 30313233四、殺蟲劑毒力測定方法n1、胃毒劑毒力測定n基本原理：使殺蟲劑隨食物一起被目標昆蟲吞食進入消化道而發(fā)揮毒殺作用。n根據取食量的差異分為無限取食法和定量取食法。34四、殺蟲劑毒力測定方法n1-1 無限取食法n藥量不易掌握，有拒食效應時更難獲得滿意結果n1-1-1飼料混藥喂蟲法n擬谷盜、米象和麥蛾等倉庫害蟲；以藥劑與食物的比例作為含藥濃度的表示方法，一般5-7天檢查

8、死亡情況。35四、殺蟲劑毒力測定方法n1-1 無限取食法n1-1-2 培養(yǎng)基混藥法n人工含毒培養(yǎng)基，果蠅。n其它方法：種子拌藥法、糖漿混藥法、毒耳法。36四、殺蟲劑毒力測定方法n1-2 定量取食法n能準確地測定吞食的劑量n1-2-1葉片夾毒法（sandwich method）n取食量大的咀嚼式口器昆蟲n按取食多少排列，分為生存組、死亡組和中間組，按中間組計算；250BALD37四、殺蟲劑毒力測定方法n1-2 定量取食法n1-2-2 液滴飼喂法（feeding of measured drop）n舐食性昆蟲，如家蠅、果蠅、蜜蜂等，用微量注射器形成小的液滴(0.010.001ml)，直接飼喂昆蟲。

9、38The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn1、適應昆蟲n鱗翅目幼蟲，一般三齡以上，饑餓48小時，選取50頭，電子天平稱重，計算平均體重。n2、藥劑：n原藥，水溶性原藥先用蒸餾水溶解，再用丙酮等有機溶劑稀釋；水不溶性原藥選用丙酮（或乙醇，二甲基亞砜等）按等比（或等差）稀釋成5-7個濃度。39The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn3、夾毒葉片的制做n用直徑1厘米的打孔器打葉碟，放入培養(yǎng)皿中，保濕。用點滴器從低濃度

10、到高濃度每葉點滴12L藥液，溶劑揮發(fā)后，和另一片涂有淀粉糊的葉碟對合制成夾毒葉片，放入12孔培養(yǎng)板的孔內。每處理4個重復，每重復至少12個含毒葉片。40The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn4、藥劑處理n每孔接一頭試蟲，于正常條件下培養(yǎng)，接蟲24小時后，待試蟲取食完含毒葉片后，（未取食完含毒葉片的淘汰掉）。加入干凈飼料繼續(xù)觀察。n5、調查：24小時 后（根據實驗要求和目的可適當調節(jié)時間），調查死蟲數和活蟲數。41The leaf sandwich test for insecticide stomac

11、h poisoning activityn6、數據處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50，95%置信限，相關系數等。劑量以 g（藥劑）/g（蟲）表示 。42四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n用較高濃度（或劑量）的殺蟲劑施于蟲體的體表，使蟲體充分接觸藥劑而發(fā)揮觸殺作用。n2-1噴粉法及噴霧法nPotter噴霧塔n真空噴粉器n沉降噴霧塔43四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-2浸漬法n常用于有效化合物篩選試驗（screen test），被聯合國糧農組織（FAO）推薦為蚜蟲抗藥性的標準測定方法。n此法不是單純的觸殺毒力。44四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒

12、力測定n2-3玻片浸漬法（slide-dip method）n此法為FAO推薦為螨類抗藥性的標準測定方法。45The Immersion test for insecticide activityn1、靶標昆蟲n鱗翅目幼蟲，同翅目的蚜蟲類、葉蟬類、飛虱類，鞘翅目成蟲如馬鈴薯瓢蟲，纓翅目昆蟲如薊馬等。n2、藥劑n水溶性藥劑直接用水溶解、稀釋，其它藥劑選用合適的有機溶劑（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有適量表面活性如0.1%吐溫80（或0.1% Triton-X100）的水溶液稀釋。每濃度藥液量不少于50mL。46The Immersion test for insecticide activ

13、ityn3、藥劑處理n將靶標昆蟲浸入藥液中 510s后，用濾紙吸取多余藥液，將試蟲轉移至正常條件下飼養(yǎng)，每處理4次重復，每重復1020頭。并設不含藥劑的相應的有機溶劑處理作為對照。47The Immersion test for insecticide activityn4、 調查：24小時 后（根據實驗要求和目的可適當調節(jié)時間），調查死蟲數和活蟲數。n5、數據處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50，95%置信限，相關系數等。48四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-4藥膜法（residual films）n將一定量的殺蟲劑，采用浸漬、點滴、噴灑等方法施于物體表面，

14、形成一個均勻的藥膜，然后放入一定量的供試目標昆蟲，讓其爬行接觸一定時間后，再移到正常的環(huán)境條件下，于規(guī)定時間內觀察試蟲的中毒死亡反死，計算擊倒率或死亡率。49四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-4藥膜法（residual films）nA、濾紙藥膜法nB、容器藥膜法nC、蠟紙粉膜法50四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-5點滴法（topical application）n點滴法是將一定量的藥液點滴到供試目標昆蟲體壁的一定部位，來測定殺蟲藥劑穿透表皮而引起昆蟲中毒致死的觸殺毒力。n此法是殺蟲劑觸殺毒力測定中最準確的方法。51四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-

15、5點滴法（topical application）n點滴部位一般為胸部背板n家蠅成蟲：1L/頭n菜青蟲、玉米螟、棉鈴蟲三齡蟲0.1L/頭n五齡蟲0.51 L/頭n蚜蟲一般0.030.05 L/頭.52四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nA、微量點滴儀53四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nB、電動微量點滴器54四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nC、毛細管微量點滴器55The topical application test (點滴法) for insecticide contact activityn1、靶標試蟲：鱗翅目3-4齡幼蟲，同翅目成蟲或若蟲，點滴時可用乙醚或

16、CO2麻醉處理。n2、殺蟲劑：原藥，水溶性原藥先用蒸餾水溶解，再用丙酮等有機溶劑稀釋；水不溶性原藥選用丙酮（或乙醇，二甲基亞砜等）按等比（或等差）稀釋成5-7個濃度。56The topical application test (點滴法) for insecticide contact activityn3、藥劑處理：用毛筆挑取試蟲于培養(yǎng)皿中，用（毛細管）點滴器逐頭點滴，鱗翅目幼蟲點前胸背板，藥量一般0.51L；蚜蟲、葉蟬等滴于腹部，藥量一般0.020.1L。n點滴完后放正常條件下飼養(yǎng)。n重復：每處理4次重復，每重復至少15蟲n對照：以對應的有機溶劑為對照。對照死亡率不得超過20%。57The

17、 topical application test (點滴法) for insecticide contact activityn4、結果檢查：24（可根據情況調節(jié)）小時后檢查死蟲數和活蟲數（死亡標準需注明）。n5、數據處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50（LC50），95%置信限，相關系數等。58四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n熏蒸劑的藥量計算以單位容積內的藥劑用量來表示（mg/L 或 ml/L）n溫度越高，殺蟲劑對目標昆蟲的熏蒸毒力越強，昆蟲的呼吸作用也越強。n測定條件：一般25 ，相對濕度50%59四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定nA、二重皿法6

18、0四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定nB、廣口瓶法61四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n、藥紙熏蒸法62四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n、三角瓶法63Erlenmeyer flask test (錐形瓶法) for insecticide fumigant activityn1、靶標昆蟲n鱗翅目幼蟲，同翅目的蚜蟲類、葉蟬類、飛虱類、鞘翅目成蟲（一般羽化2周后的成蟲）如玉米象、赤擬谷盜等n2、藥劑：熏蒸劑宜使用原藥，濃度以mg/L計。64Erlenmeyer flask test (錐形瓶法) for insecticide fumigant activityn3、藥劑處理：準備500mL的錐形瓶，將試蟲籠懸掛于瓶的中部，按預定的劑量加入供試藥劑于瓶底，薰蒸處理1h后將試蟲轉移到正常條件下飼養(yǎng)。每處理4次重復，每重復不少于50頭試蟲，設不含藥劑的處理作為對照。n4、調查：一般24（根據試驗要求和藥劑特點可適當調節(jié)）小時調查試蟲死死情況。數據處理同其它方法。65四、殺蟲劑毒力測定方法n4 內吸作用（systemic action）毒力測定nA、根系內吸法nB、葉部內吸法nC、莖部內吸法nD