麻風(fēng)耐藥研究進(jìn)展ppt課件

1、麻風(fēng)耐藥研討進(jìn)展中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研討所沈建平麻風(fēng)耐藥的種類 原發(fā)性耐藥：患者感染了耐藥菌后發(fā)病 繼發(fā)性耐藥：患者治療后出現(xiàn)對(duì)藥物耐受。 單療、劑量、療程或藥代動(dòng)力學(xué)等緣由導(dǎo)致耐藥。麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制 新發(fā)麻風(fēng)患者體內(nèi)的麻風(fēng)菌群是由大量藥物敏感菌株的優(yōu)勢(shì)菌群和少量由于基因自然突變產(chǎn)生的能繞過(guò)藥物作用部位的藥物耐受菌株的弱勢(shì)菌群組成。 患者無(wú)論是行單療，或者雖然有多種藥物治療，但是治療不規(guī)那么，均可導(dǎo)致類似于只需單一藥物到達(dá)有效血濃度的情況，該藥物將殺滅對(duì)該藥物敏感的菌群，而少量因自然突變產(chǎn)生的對(duì)該藥物耐藥的菌株成活，并逐漸大量繁衍成為優(yōu)勢(shì)菌群，最終出現(xiàn)對(duì)該藥耐藥表現(xiàn)。麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制

2、雖然有麻風(fēng)結(jié)合化療，專家擔(dān)憂利福平每月用藥監(jiān)服，而氨苯砜、氯法齊明那么為每日自服，病人依從性較差可致后二者藥物劑量缺乏，那么類似于利福平單療。 此外氨苯砜與利福平聯(lián)用時(shí)假設(shè)病人對(duì)氨苯砜已耐藥那么能夠亦等同于利福平單療，最終導(dǎo)致利福平耐藥。 麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制 菲律賓在耐藥監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)6例未治療的新發(fā)病人存在folp1突變氨苯砜耐藥株，5例居住于同一鄉(xiāng)村研討暫未發(fā)表，提示結(jié)合化療前存在的氨苯砜耐藥菌株能夠流行傳代到如今。 這就解釋了為何結(jié)合化療后依然有氨苯砜耐藥菌株麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制細(xì)菌耐藥的產(chǎn)生可以存在多種機(jī)制，包括： 1、酶性滅活或抑制，二氫葉酸合成酶， RNA聚合酶， DNA旋轉(zhuǎn)酶 2、

3、修飾抗生素 3、減少抗生素與細(xì)胞外表靶點(diǎn)的結(jié)合， 4、封鎖細(xì)胞外表通道從而降低細(xì)胞對(duì)抗生素的攝取，自動(dòng)泵出抗生素分子 5、抗生素靶點(diǎn)的過(guò)度生成 麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制 氨苯砜為p-氨基苯甲酸的競(jìng)爭(zhēng)性抑制物，可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合并抑制folP基因編碼的二氫葉酸合成酶，該酶是細(xì)菌葉酸生物合成途徑的關(guān)鍵酶，因此是氨苯砜的抗菌作用靶點(diǎn)。目前發(fā)現(xiàn)的氨苯砜耐藥基因的突變皆發(fā)生在folp1片段的砜類耐藥決議區(qū)域，且90%多發(fā)生在編碼子53及55區(qū)域。 鼠足墊藥敏實(shí)驗(yàn)提示氨苯砜過(guò)敏可按用量分為輕、中、重三種，而耐藥基因突變檢測(cè)法與MFP法比較后發(fā)現(xiàn)，存在folP基因突變根本為中重度的氨苯砜耐藥 麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制 利

4、福平為與RNA聚合酶結(jié)合，結(jié)合抑制DNA依賴的mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而發(fā)揚(yáng)其殺菌作用，而rpoB即編碼RNAP的亞基的片段。目前發(fā)現(xiàn)的與利福平耐藥相關(guān)的rpoB突變位點(diǎn)主要有密碼子425位、531位、407位、408、410位、416位、420位、427位、428位、513位、516位、517位、526位、532位、533位、547位等，其中部分位點(diǎn)的突變?nèi)孕枨蟠罅繕?biāo)本檢測(cè)的進(jìn)一步證明。除點(diǎn)突變致氨基酸置換導(dǎo)致蛋白構(gòu)造的改動(dòng)外，尚發(fā)現(xiàn)耐藥病人rpoB 409位的插入突變，為一個(gè)6bp的片段。 麻風(fēng)菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)制目前研討發(fā)現(xiàn)與氧氟沙星耐藥相關(guān)的麻風(fēng)菌突變大多位于基因gyrA片段。 基因gyr編碼

5、DNA旋轉(zhuǎn)酶，其中g(shù)yrA編碼A亞基，gyrB編碼B亞基，氧氟沙星等氟喹諾酮類藥物可結(jié)合DNA旋轉(zhuǎn)酶的A亞基從而抑制DNA的復(fù)制。：基因gyrA片段上密碼子突變部位在89位、91位，92、95位，突變?cè)诮Y(jié)核菌的研討中已顯示能夠與耐藥有關(guān)。國(guó)際上Kim及You等人兩項(xiàng)研討各發(fā)現(xiàn)一例氧氟沙星耐藥病例，為gyrB片段的205位密碼子AspAsn突變。 麻風(fēng)疑似耐藥的臨床表現(xiàn)1、細(xì)菌指數(shù)不陰轉(zhuǎn)或反而升高；2、近期復(fù)發(fā)停藥1年內(nèi)復(fù)發(fā)或反復(fù)復(fù)發(fā)多次；3、化療后依然見(jiàn)到完好染色菌；4、皮損長(zhǎng)期存在，衰退不明顯；5、治療中或療后發(fā)生麻風(fēng)降級(jí)反響，皮損增多，分散。麻風(fēng)菌耐藥的檢測(cè)方法小鼠足墊接種法MFP 該方法

6、缺陷包括耗時(shí)太長(zhǎng)普通需6-12月、標(biāo)本獲取后至接種時(shí)間不可太長(zhǎng)普通小于72小時(shí)、需求一定量的活菌方可生長(zhǎng)普通至少5104/ml等。 因此限制了其大范圍的運(yùn)用，但是MFP仍是最經(jīng)典的麻風(fēng)藥敏檢測(cè)方法，通常在新方法的研討中作為方法對(duì)照。麻風(fēng)菌耐藥的檢測(cè)方法放射性呼吸測(cè)定 該方法的原理是活的麻風(fēng)桿菌能氧化14C標(biāo)志的棕櫚酸釋放14C標(biāo)志的CO2，因此可檢測(cè)出麻風(fēng)菌的活力及在不同藥物作用下活力的改動(dòng)，從而在2周內(nèi)檢測(cè)出藥敏結(jié)果，然而該方法需求菌量較多，且需求精細(xì)的儀器設(shè)備，亦限制了其運(yùn)用。麻風(fēng)菌耐藥的檢測(cè)方法分子生物學(xué)方法 由于發(fā)現(xiàn)了耐藥與某些基因的突變有相關(guān)性，因此可用分子生物學(xué)檢測(cè)基因突變方式來(lái)檢

7、測(cè)耐藥。而分子生物學(xué)檢測(cè)方法較其它方法更為簡(jiǎn)便省時(shí)，對(duì)樣本運(yùn)輸亦無(wú)特殊要求，因此該類方法逐漸開(kāi)展起來(lái)。 將PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的產(chǎn)物進(jìn)展測(cè)序，直接檢測(cè)擴(kuò)增片段的一切核苷酸序列，將其與野生敏感菌株該片段比對(duì)后那么可尋覓突變的有無(wú)以及突變位置。全球麻風(fēng)菌耐藥的情勢(shì) MDT針對(duì)不同的治療靶點(diǎn)，以確保至少有一種藥物對(duì)病人體內(nèi)的麻風(fēng)菌可起到殺傷作用。然而，由于種種緣由，發(fā)現(xiàn)MDT治療終了后仍有部分病人BI值繼續(xù)不降或下降緩慢甚至上升，提示治療不敏感/抵抗的存在，且能夠與耐藥有關(guān)。 WHO全球控制工程的數(shù)據(jù)顯示2019-2021年全球的復(fù)發(fā)病例數(shù)維持在2000-3000例/年之間，而報(bào)告復(fù)發(fā)病例的國(guó)家數(shù)由201

8、9-2019年的40余個(gè)激增至2021年的122個(gè)后，2019年初病例數(shù)為3120例， 提示在各國(guó)對(duì)復(fù)發(fā)病例的逐漸注重下，發(fā)現(xiàn)的復(fù)發(fā)病例數(shù)亦有上升的趨勢(shì)。全球麻風(fēng)菌耐藥的情勢(shì) 中國(guó)近10年來(lái)的復(fù)發(fā)病例數(shù)維持在約150例/年，雖然目前發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的主要緣由為耐久菌的繁衍和/或再感染，但是國(guó)內(nèi)存在以下幾種能夠的導(dǎo)致耐藥的危險(xiǎn)。 中國(guó)氨苯砜買(mǎi)不到，但是利福平四處都有買(mǎi)，導(dǎo)致潛在的患者自行利福平單療。 上個(gè)世紀(jì)產(chǎn)生的氨苯砜耐藥菌株的流行傳代，在一些患者中可導(dǎo)致潛在的利福平單療。 結(jié)合化療的不規(guī)那么，導(dǎo)致利福平外的藥物血濃度降低，導(dǎo)致實(shí)踐上的利福平單療。 全球麻風(fēng)菌耐藥的情勢(shì) 由于結(jié)核桿菌的耐藥情勢(shì)，麻風(fēng)耐

9、藥亦引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的注重。2019年的WHO麻風(fēng)全球規(guī)劃在印度阿格拉召開(kāi)的會(huì)議上，初次回想了麻風(fēng)耐藥的問(wèn)題及目前在耐藥檢測(cè)手段。 2019年之前僅三個(gè)國(guó)家搜集MB復(fù)發(fā)及耐藥監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，包括哥倫比亞2019-2019、印度尼西亞2000-2019及緬甸2019-2019，發(fā)現(xiàn)的MB復(fù)發(fā)病例分別為28、21、20例，其中緬甸僅10例進(jìn)展了耐藥檢測(cè)。 全球麻風(fēng)菌耐藥的情勢(shì) 2019年10月WHO在越南河內(nèi)舉行了第一次全球麻風(fēng)耐藥監(jiān)測(cè)會(huì)議，參與國(guó)家為巴西、埃塞俄比亞、印度、馬里、緬甸、越南六個(gè)國(guó)家，會(huì)議報(bào)告在監(jiān)測(cè)點(diǎn)共69例復(fù)發(fā)，其中檢測(cè)58例。會(huì)議提出要擴(kuò)展耐藥監(jiān)測(cè)點(diǎn)和參比實(shí)驗(yàn)室數(shù)量，改良監(jiān)測(cè)的質(zhì)量指南

10、。 2021年10月WHO在法國(guó)巴黎舉行的第二次全球麻風(fēng)耐藥監(jiān)測(cè)會(huì)議，中國(guó)第一次參與監(jiān)測(cè)會(huì)，會(huì)上還有巴西、哥倫比亞、印尼、巴基斯坦、菲律賓、烏干達(dá)、印度、緬甸、越南共報(bào)告887例復(fù)發(fā)病人，其中213例完成耐藥檢測(cè)。 全球麻風(fēng)菌耐藥的情勢(shì) 2019年11月WHO在日本東京舉行第三次全球麻風(fēng)耐藥監(jiān)測(cè)會(huì)議添加一個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)為也門(mén)，109例MB復(fù)發(fā)病人中有88例完成耐藥檢測(cè)。 2019年WHO在印度海德拉巴舉行第四次全球麻風(fēng)耐藥監(jiān)測(cè)會(huì)議。會(huì)議以為MDT方案依然有效，目前監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)含實(shí)驗(yàn)室數(shù)量要擴(kuò)展。啟動(dòng)新抗麻風(fēng)藥物研討。鼓勵(lì)發(fā)表與復(fù)發(fā)有關(guān)的臨床和其他科研文章，鼓勵(lì)在新患者中尋覓原發(fā)性耐藥，但是與復(fù)發(fā)病人的資

11、料要分開(kāi)。氨苯砜耐藥菌株流行情況 2000-2019年期間三個(gè)國(guó)家的MB復(fù)發(fā)病人的耐藥檢測(cè)結(jié)果示，有8例氨苯砜耐藥突變。 2021年的各國(guó)耐藥監(jiān)測(cè)顯示有12例氨苯砜耐藥突變。 2019年有9例氨苯砜耐藥突變，一例位于中國(guó)。 我國(guó)另有2例治療抵抗病人發(fā)現(xiàn)有氨苯砜耐藥突變研討暫未發(fā)表。 翁小滿等于7例復(fù)發(fā)病例中發(fā)現(xiàn)2例為氨苯砜耐藥菌株， 35例新發(fā)病人中并未發(fā)現(xiàn)氨苯砜耐藥。 溫艷等于35例復(fù)發(fā)病例中發(fā)現(xiàn)12例氨苯砜耐藥菌株，用巢式PCR-結(jié)合DNA測(cè)序，檢測(cè)31例復(fù)發(fā)或疑似復(fù)發(fā)病人的41份石蠟標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)8份存在氨苯砜耐藥菌株。因此氨苯砜耐藥仍主要發(fā)生于復(fù)發(fā)的麻風(fēng)病人， 氨苯砜耐藥菌株流行情況 20

12、19年菲律賓的耐藥監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)6例未治療的新發(fā)病人存在folp1突變株，5例居住于同一鄉(xiāng)村研討暫未發(fā)表，提示氨苯砜耐藥菌株能夠在人群中傳播。 中國(guó)未見(jiàn)到新發(fā)病人中有原發(fā)性氨苯砜耐藥。利福平耐藥菌株流行情況 2000-2019年期間三個(gè)國(guó)家的MB復(fù)發(fā)病人中有6例利福平耐藥突變。 2021年的各國(guó)耐藥監(jiān)測(cè)顯示有9例利福平耐藥突變，而中國(guó)57例復(fù)發(fā)病人中僅10例做了利福平耐藥突變檢測(cè)，并未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性病例。 2019年8個(gè)國(guó)家中僅哥倫比亞發(fā)現(xiàn)1例利福平耐藥突變，我國(guó)有1例復(fù)發(fā)病人發(fā)現(xiàn)有利福平耐藥突變研討暫未發(fā)表。 翁小滿、溫艷等人的兩次研討示復(fù)發(fā)及新發(fā)病人中均未發(fā)現(xiàn)利福平耐藥株。 王紅斌等用巢式PCR-測(cè)序

13、法檢測(cè)麻風(fēng)患者的皮損標(biāo)本，23例患者其中7例復(fù)發(fā)未發(fā)現(xiàn)利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因突變。 利福平耐藥相關(guān)的基因突變?cè)谥袊?guó)能夠尚少見(jiàn)，仍需大量的樣本檢測(cè)來(lái)尋覓并驗(yàn)證。氧氟沙星耐藥菌株流行情況 2000-2019年期間三個(gè)國(guó)家的MB復(fù)發(fā)病人中未發(fā)現(xiàn)有耐藥突變。 2021年的各國(guó)耐藥監(jiān)測(cè)顯示2例氧氟沙星耐藥突變，均位于印度，中國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)氧氟沙星耐藥株。 2019年數(shù)據(jù)顯示9個(gè)國(guó)家亦未發(fā)現(xiàn)耐藥突變菌株。 Kim、You等兩項(xiàng)在韓國(guó)進(jìn)展的研討各發(fā)現(xiàn)一例氧氟沙星耐藥株。麻風(fēng)耐藥研討進(jìn)展 近期結(jié)核菌研討發(fā)現(xiàn)克拉霉素耐藥能夠與23SrRNA的錯(cuò)義突變有關(guān)，但Kim、You等兩項(xiàng)在韓國(guó)進(jìn)展的研討暫未發(fā)現(xiàn)23Sr

14、RNA突變的麻風(fēng)桿菌。 其它藥物如氯法齊明尚未發(fā)現(xiàn)耐藥突變位點(diǎn)、 米諾環(huán)素尚未在麻風(fēng)中確定耐藥株， 摘要摘要 麻風(fēng)菌耐藥研討主要集中于尋覓耐藥突變位點(diǎn)，其中氨苯砜、利福平、氧氟沙星等耐藥已被證明與folP1、rpoB、gyrA三個(gè)基因中的不同位點(diǎn)的錯(cuò)義突變相關(guān)， 克拉霉素、氯法齊明在麻風(fēng)中尚未發(fā)現(xiàn)耐藥突變位點(diǎn)， 米諾環(huán)素尚未確定耐藥株。 耐藥檢測(cè)方法包括：小鼠足墊接種法、放射性呼吸測(cè)定及分子生物學(xué)方法,分子生物學(xué) 目前WHO全球耐藥監(jiān)測(cè)主要集中于MB復(fù)發(fā)病例。 在中國(guó)，已發(fā)現(xiàn)氨苯砜、利福平耐藥相關(guān)的folP1、rpoB、gyrA突變菌分別為25例和1例。展望 雖然近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研討顯示耐藥病例數(shù)的數(shù)量及所占比例仍較小，而國(guó)內(nèi)那么僅發(fā)現(xiàn)氨苯砜耐藥麻風(fēng)菌株，但國(guó)內(nèi)耐藥情況能否因監(jiān)測(cè)制度不完善或檢測(cè)手段不敏感等問(wèn)題呈現(xiàn)低估形狀尚不明確，且國(guó)外已有多項(xiàng)研討顯示多重耐藥菌存在。自創(chuàng)于結(jié)核桿菌的耐藥情勢(shì)對(duì)疾病防控的宏大影響，麻風(fēng)耐藥問(wèn)題也需引起中國(guó)麻風(fēng)任務(wù)者的注重。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高，將為監(jiān)測(cè)和控制麻風(fēng)耐藥菌株的流行、指點(diǎn)臨床用藥等提供協(xié)助。關(guān)于在我國(guó)加強(qiáng)麻風(fēng)耐藥監(jiān)測(cè)的呼吁 一旦出現(xiàn)廣泛福平耐藥菌株流行，由于麻風(fēng)化療的特點(diǎn)，將導(dǎo)致麻風(fēng)控制的成果前功盡棄，