高效薄層掃描法測定蛛網(wǎng)膜下腔出血患者腦脊液中血小板活化因子

1、高效薄層掃描法測定蛛網(wǎng)膜下腔出血患者腦脊液中血小板活化因子王 榮 張新江 胡曉麗 趙興紅蘭州軍區(qū)后勤部藥物研究所 甘肅蘭州 蘭州軍區(qū)總醫(yī)院 甘肅蘭州蘭州軍區(qū)醫(yī)學高等?？茖W校 甘肅蘭州摘要 建立了測定蛛網(wǎng)膜下腔出血患者 腦脊液中血小板活化因子 質(zhì)量濃度的高效薄層掃描方法薄層板為高效硅膠 板 展開劑為 氯仿 Ú 甲醇 Ú 水 Ú Ú 下層液展開 顯色劑為 Ù 磷鉬酸溶液 展開距 掃描波長 方法的線性范圍 Ù 相關(guān)系數(shù) 最小檢測質(zhì)量濃度 Ù 平均回收率 運用所建立的方法測定了 例 患者發(fā)病后腦脊液和 例非神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者腦脊液中

2、的質(zhì)量濃度及其變化規(guī)律 為臨床提供了診斷依據(jù)關(guān)鍵詞 高效薄層掃描法 血小板活化因子 蛛網(wǎng)膜出血患者 的腦脊液中圖分類號 文獻標識碼 文章編號前言血小板活化因子 是一種脂類介質(zhì)它是 年由 等 研究兔過敏反應(yīng)過程中發(fā)現(xiàn)的后來 等 研究兔的脊髓缺血組織發(fā)現(xiàn) 缺血神經(jīng)組織的 水平比正常的高 倍 中樞神經(jīng)組織尤其是缺血的神經(jīng)組織亦可產(chǎn)生大量的 因此 與腦缺血之間的關(guān)系越來越受到重視 但測定腦脊液中 的方法未見文獻報道本文建立了一種特異 靈敏 準確測定蛛網(wǎng)膜下腔出血 患者腦脊液中 質(zhì)量濃度的方法 有助于闡明腦缺血的某些病理機制 為其防治提供了新的依據(jù) 測定得到了滿意的結(jié)果材料和方法儀器及試藥島津 型薄層掃

3、描儀 島津 型積分儀標準對照品 購自美國 公司 高效硅膠 板 青島海洋化工廠 其余試劑均為分析純 色譜條件高效硅膠 板 展開劑 氯仿 Ú 甲醇 Ú 水 Ú Ú 搖勻放置過夜 用下層液展開 顯色劑 Ù 磷鉬酸溶液 展開距 掃描波長 點樣 樣品處理蛛網(wǎng)膜下腔出血組 例 男 例 女 例 蛛網(wǎng)膜下腔出血 發(fā)病患者 診斷符合 年全國腦血管會議標準 均經(jīng)頭顱 掃描證實 發(fā)病后 天腰穿采集腦脊液 將采集的腦脊液立即離心 取上清液 加入甲醇 振搖 再次離心離心后加入氯仿 和水 充分振搖 離心分出氯仿相 下保存對照組 例 男 例 女 例 為同期住院手術(shù)的非神經(jīng)系

4、統(tǒng)疾病患者 無心 腦 腎 肺部疾病腰麻時收集腦脊液 腦脊液處理的方法同上薄層展開時 將真空抽干保存于 下的樣品標本用氯仿溶解 容量瓶定容結(jié)果展開在上述色譜條件下點樣 薄層展開圖及薄層掃描圖見圖 圖 中 依次為 標準對照品 對照組 蛛網(wǎng)膜下腔出血 發(fā)病患者腦脊液展開行為良好 斑點邊緣清晰 無拖尾現(xiàn)象標準曲線在同一塊高效板上用 標準對照品點樣 個點 使其質(zhì)量濃度為 Ù 展開劑展開后顯色 掃描 測定斑點峰面積 求得回歸方程為 為峰面積 為點樣的質(zhì)量濃度 相關(guān)系數(shù) 測得的最小質(zhì)量濃度為 Ù 方法精密度及回收率在同一塊高效板上 點一定質(zhì)量濃度的 標第 卷第 期色 譜 年 月 收稿日期

5、 修回日期 圖 標準對照品 對照組 和患者腦脊液 色譜圖 - - - 腦脊液薄層展開圖 腦脊液薄層掃描圖準對照品 共 個點 按上述方法展開 顯色 掃描每隔 依法在不同板上點樣 測定日內(nèi)結(jié)果見表 同時連續(xù) 天依法在不同板上點樣 測定日間誤差見表 回收率是在同一塊高效板上分別點上一定量的發(fā)病組腦脊液 發(fā)病組腦脊液加標準對照品 標準對照品 點兩個劑量的不同點 共 個點 按上述方法展開 顯色 掃描 計算 的量 測得回收率為 結(jié)果見表 該方法精密度好 日內(nèi)誤差為 日間誤差為 表 測定方法的精密度和回收率 質(zhì)量濃度 Ù日 內(nèi)日 間回收率平均穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗包括兩部分 一部分是 從腦脊液中提取

6、后在冰箱中 冷凍保存不同時間的穩(wěn)定性 另一部分是 配制成氯仿溶液后在室溫下放置不同時間的穩(wěn)定性提取后用氮氣吹干 樣品置于 冰箱中存放 分別于 天取出按試驗方法測定 份 表明 樣品在 下至少可保存一個月將上述保存于 冰箱中的腦脊液配置成氯仿溶液 容量瓶密封放置于室溫 分別于立即 天 天點樣 說明配制成氯仿的 溶液密封存放于室溫下 天內(nèi)仍很穩(wěn)定樣品腦脊液中的測定按上述方法測定了 例蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的腦脊液及 例對照組腦脊液中的 質(zhì)量濃度 見表 例蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的腦脊液中 變化規(guī)律見圖 表 蛛網(wǎng)膜出血患者及對照組腦脊液中定量分析結(jié)果 編號測定組質(zhì)量濃度 Ù 對照組 未檢出 圖 例患者

7、腦脊液中質(zhì)量濃度的變化 討論半衰期短 僅為 不宜捕獲 且正常人的腦脊液中不存在 本文采用高效薄層色譜法 抽取腦脊液后立即用甲醇除去蛋白 破壞乙酰水解酶的活性 直接測定 患者發(fā)病后腦脊液中的 防止 失活 提高了靈敏度所建立的方法可一次測定多個腦脊液樣品 回收率及靈敏度均較高 重復性好 比 或 法價廉同時發(fā)現(xiàn) 對酸 溫度較穩(wěn)定 多次用磷鉬酸顯色 加熱至 并不影響 的活性 與 等 報道第 期 王 榮等 高效薄層掃描法測定蛛網(wǎng)膜下腔出血患者腦脊液中血小板活化因子的結(jié)果相符是目前發(fā)現(xiàn)的最強的促血小板聚集物 后極易并發(fā)腦血管痙攣 引起腦缺血研究表明 可引起血腦屏障破壞 腦血管收縮 此外 可通過促使顆粒白細胞釋放白三烯等活性物質(zhì)間接引起腦血管痙攣 使腦血流量減少 故而推測 與 后腦血管痙攣有關(guān)通過對 例 患者發(fā)病后 天腦脊液中的 測定并與 例非神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者進行了比較發(fā)現(xiàn) 對照組腦脊液中 均為陰性 由于 不能通過血腦屏障 所以正常人腦脊液中不含有 及其乙酰水解酶而發(fā)病組在不同時期內(nèi)的 質(zhì)量濃度呈現(xiàn)不同的趨勢初步證明 后腦脊液中 的質(zhì)量濃度明顯增加 發(fā)病后第二周最明顯 說明可能參與了腦血管痙攣 腦缺血的發(fā)病過程也可預測 患者易在第二周內(nèi)發(fā)病 與臨床實際腦血管痙攣發(fā)病在 的第二