凝膠成像及Quantity One說明書

1、GelDocTM XRThe Discovery Series Quantity One® 1-D Analysis Software培訓教程Bio-Rad目 錄第一部分 儀器清點及安裝2簡介2 儀器清點2 儀器安裝3 儀器各組成部分介紹3 圖像采集5 凝膠切割5 注意事項5 第二部分 儀器及Quantity One軟件分析操作6簡介6 圖像獲取8 基本圖像優(yōu)化12 圖像分析13一、 定量分析13二、 條帶分析16三、 結果輸出21 常見問題及處理22 訂貨信息24 聯(lián)系方式25 附錄：軟件密碼注冊表26 - 1 -第一部分 儀器清點及安裝簡介：GelDoc XR和ChemiDoc

2、XRS是Bio-Rad凝膠成像家族的兩個成員，它們的特點是操作簡便、功能齊全。它們采用自動控制的光學透鏡CCD攝像頭，便于進行縮放、聚焦和光圈大小等的調節(jié)，以實時采集圖像。高精度的12位CCD使圖像數據達到4096級灰度，能滿足普通實驗室各類凝膠以及印記膜的成像需求。除此以外，ChemiDoc XRS的CCD是一個可冷卻45的超冷CCD，特別適合于化學發(fā)光等微弱信號的檢測。Quantity One是凝膠成像儀附帶的圖像分析軟件，并且可以直接控制這些儀器。拍好的圖像直接通過Quantity One打開，可以靈活地實現(xiàn)蛋白及核酸的一維電泳凝膠分析以及聚類分析、克隆計數等，并可輕松實現(xiàn)各種分析結果的

3、輸出。儀器清點：- 2 -io-Rad Quantity One軟件應用講義選配件：170-7950 White Light Transilluminator 或 170-8001 White Light Conversion Screen PC要求：儀器各組成部分介紹I Universal Hood（正面 大體）鏡頭及濾光片位控制面板紫外透射平臺II控制面板-3-io-Rad Quantity One軟件應用講義III 背面開關及保險絲IV鏡頭及CCDV Universal Hood內頂部-4-io-Rad Quantity One軟件應用講義圖像采集用成像儀自帶的熒光標尺和帶刻度的透明塑料

4、板，參照后文GelDoc XR成像的方法，按紫外透射、白光透射以及側面白光三種模式分別采集一次圖像。要求成像清晰、明暗適中。凝膠切割將抽屜式紫外透射平臺完全拉開至最大，將待切割的樣品放置其上。安裝上有機玻璃保護屏，打開“Trans UV”和“Prep UV”。操作者戴上手套，站在保護屏后進行切膠操作。注意事項：1 安裝ChemiDoc XRS的圖像采集卡時，要先安裝其驅動程序，再將圖像采集卡插入；2 如果軟件的密碼狗不能被正常識別，請安裝帶補丁的驅動程序或向Bio-Rad安裝工程師求助；3 在給用戶安裝圖像儀和軟件前，先提醒用戶保存好申請來的密碼、軟件序列號和密碼狗。4 培訓儀器時，提醒用戶不

5、要將潮濕的樣品長期放在暗箱內，以防腐蝕濾光片，更不要將液體濺到暗箱底板上，以免燒壞主板。5 提醒用戶儀器用完，及時關上電源，特別是ChemiDoc XRS的CCD電源；6 提醒用戶勿用控制成像儀的電腦上網，也不要自行重裝電腦操作系統(tǒng)或給操作系統(tǒng)升級。-5-io-Rad Quantity One軟件應用講義第二部分 儀器及Quantity One軟件分析操作培訓目的：1 熟練掌握凝膠成像儀對一維電泳凝膠圖像的獲??；2 熟悉用ChemiDoc XRS對印跡膜的化學發(fā)光檢測；3 熟悉Quantity One的定量分析和條帶分析流程。時間安排：成像儀的使用培訓大約需要2040分鐘，Quantity O

6、ne軟件培訓時間大約為1小時。簡介凝膠電泳是每個做分子生物學的研究者天天都要打交道的基本技術。電泳之后的信息處理與電泳本身同樣重要。目前有大量軟件可以用于分析電泳結果，今天要向大家介紹的是Bio-Rad公司的1D凝膠分析軟件Quantity One（Bio-Rad還有一個做2D凝膠分析的軟件PDQuest）。Quantity One軟件是常用1D凝膠分析軟件中功能最強大，自動化程度最高的軟件。這個軟件的最新版本可以在Bio-Rad的網站（http:/www.bio-）免費下載，以供試用或用戶升級之用。Quantity One軟件的主要功能包括定量分析(Volumes Quick Guide)，

7、電泳條帶分析(Band Analysis)，差顯分析(Differential Display Analysis)，克隆計數(Colony Counting Analysis)等，此外，還可以直接控制Bio-Rad公司的各類圖像儀和ExQuest自動切膠儀，使您的凝膠分析工作變得極為輕松。Quantity One軟件擁有與windows操作系統(tǒng)下絕大多數應用軟件相同的友好界面。插入密碼狗，打開Quantity One軟件，可以看到最上緣藍色橫條幅是標題欄，往下依次是菜單欄和工具欄。-6-io-Rad Quantity One軟件應用講義每個菜單的主要功能如下：File Edit View Im

8、age Lane Band圖像打開、保存、引入、打印等操作 圖像普通編輯操作圖像縮放、三維視圖、看光密度值等操作 圖像旋轉、翻轉、裁切等操作 泳道分析 條帶分析Match Volumn Analysis Reports Window Help分子量估算、條帶匹配分析 定量分析濃度估算、克隆計數等分析 分析結果輸出 窗口分析幫助、快捷菜單、軟件注冊等往下一行是工具欄，上面每個按鈕的功能見下表：Quantity One軟件Help Quick Guide快捷指南提示如何實現(xiàn)一個功能，如定量分析(Volumes Quick Guide)，電泳條帶分析(Band Analysis)，差顯分析(Diff

9、erential Display Analysis)，克隆計數(Colony Counting Analysis)等?？旖葜改舷掠?，2，3步驟，根據提示完成。使用Quantity One軟件進行電泳結果分析，通常包括圖像獲取、圖像優(yōu)化、分析、結果輸出四部分，參考下圖：-7-io-Rad Quantity One軟件應用講義圖像獲取就是通過軟件控制掃描儀（GS-800、PharosFX等）或凝膠成像系統(tǒng)（GelDoc、ChemiDoc、VersaDoc等）獲取圖像的過程。圖像優(yōu)化就是將掃描或拍照獲得的原始圖像進行初步處理，以便更好地進行后續(xù)分析。接下來是分析過程，根據分析的方法和目的不同，又可

10、以分為定量分析、條帶分析、克隆計數、差異（聚類）分析等等。不管如何分析，最終我們都必須通過軟件的輸出功能，得到我們想要的結果。Quantity One軟件提供了多種結果輸出方式。在接下來的幾章里，我們將按照這個思路，一步步引導您使用這一軟件。圖像獲取Quantity One 4.44.6版本可以控制Bio-Rad目前幾乎所有的圖像儀，如GelDoc XR、ChemiDoc XRS等。這些圖像儀采集到的圖像，可以直接保存成軟件可直接分析的圖像，即擴展名1sc的原始圖像文件。下面將具體介紹如何通過Quantity One軟件從GelDoc XR和ChemiDoc XRS獲取圖像。一 GelDoc

11、XRGelDoc XR是Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)中最常用，操作最簡便的儀器，它可以用來拍攝EB、SYBR Green等染料染的核酸電泳凝膠；Sypro Ruby、銀染、考馬斯亮藍等方法染的蛋白電泳凝膠；以及化學顯色的印記膜等。使用GelDoc XR之前，先接通電源，打開位于儀器背面右下角的電源開關；然后根據具體的應用不管使用何種模式，基本的操作過程都是這樣的：1 將樣品置于適當的載物平臺上2 關閉暗箱門3 調整濾光片4 打開相應光源5 接下來打開Quantity One軟件，選擇FileGelDoc XR，按以下順序操作：1 白光轉換屏有自己的電源開關，位于屏下方，打開后不必每次都關閉這個開

12、關。-8-io-Rad Quantity One軟件應用講義 按下Live/Focus，成像儀進入實時成像； 選擇照明模式，一般熒光樣品選擇UV,普通透射或反射樣品選擇White模式注意：該選項對圖像數據格式有影響，但不能代替光源選擇。 此功能有三個上下鍵按鈕：IRIS（光圈），ZOOM（縮放），F(xiàn)OCUS（聚焦），您可在軟件上直接調節(jié)或在儀器面板上手工調節(jié) 調節(jié)步驟：a 調大IRIS，以看到圖像b點ZOOM,將膠適當放大c 調節(jié)IRIS至合適大?。ㄒ话闱闆r下盡量選擇小光圈，因為小光圈景深大，圖像更清晰) d調節(jié)FOCUS，至圖像最清晰 單擊Auto Expose,系統(tǒng)將自動選擇曝光時間成像（

13、系統(tǒng)默認0.15%的像素飽和的成像時間為最佳時間，在Options對話框中可以修改該項設置），如不滿意，單擊Manual Expose，并輸入曝光時間（秒）-9-io-Rad Quantity One軟件應用講義 圖像曝光滿意后，按下“Freeze”按鈕。 按下“Analyze”按鈕，將彈出一個新窗口顯示圖像，以供分析。 第5步結束后，也可以按下“Save”鍵，保存圖像。 選擇合適的應用模式，鼠標點擊會彈出如下圖所示的菜單：a) 核酸凝膠或熒光染色的蛋白膠，選擇UV Transillumination b) 銀染、考染的蛋白膠，選擇White Transillumination-10-io-R

14、ad Quantity One軟件應用講義c) 不透明、不發(fā)光樣品，選擇White Epi Illuminationd) 信號較強的化學發(fā)光印記膜，選擇Chemiluminescencee) 信號較弱的化學發(fā)光印記膜，選擇Chemi Hi Sensitivityf) 如果要拍照特殊樣品，如信號很弱的化學發(fā)光印記膜，選擇Custom，并選擇需要的照明方式及像素捆綁等；注意，選擇完成后，要按下成像儀面板上相應的光源按鈕，同時根據以下原則調整濾光片位：在a、b兩種應用模式下，或在custom模式并選擇紫外或白光透射時，將濾光片選擇桿置于位置“I”處；其它模式或在custom模式并選擇側面白光或無照明

15、時，將濾光片選擇桿置于位置“O”處。 對焦，調節(jié)光圈，方法與GelDoc XR類似； 調節(jié)好以后，按下“freeze”； 獲取圖像，選擇自動曝光或手動曝光，方法與GelDoc XR類似。對化學發(fā)光檢測而言，信號較強的樣品也可以選擇自動或手動曝光，信號較弱的樣品最好使用“Live Acquire”功能。點擊該按鈕，彈出如下對話框：第一行，填入最長曝光時間（以秒為計）；第二行，填入初次曝光時間（以秒為計）；第三行，填入需要曝光的次數，每次曝光都是前幾次曝光時間的累加最后按“OK”鍵，開始曝光。注意：化學發(fā)光檢測需要關閉所有光源，并將光圈“IRIS”調至最大。另外，建議先用檢測普通非透明樣品的方法對

16、焦，再關閉光源，檢測化學發(fā)光 當這個選項被選中時，軟件將會使用動態(tài)平場技術消除圖像中間和四周的亮度差異。對于步驟當中的a)、b）兩種應用模式，曝光完成后軟件會提示是否使用以前做過的平場參照。除非近期剛做過相同方式的平場參照，否則選則“No”。接下來，軟件會提示取出樣品，放入熒光參照板，打開紫外光源。如圖所示：-11-io-Rad Quantity One軟件應用講義如果是在白光透射下做平場，則將樣品取出，保留白光板或白光轉換屏，打開相應光源。軟件會自動生成平場，并用平場技術校正剛剛攝取的圖像。關于動態(tài)平場更詳細的敘述請參考Quantity One軟件的Instruction Manual?；?/p>

17、圖像優(yōu)化通過圖像儀采集的圖像，可能會有偏斜、對比度不佳、數據關系錯誤等問題影響分析。所以新采集的圖像應經過優(yōu)化后再進行分析。優(yōu)化的基本過程是：Rotate（旋轉）Crop（裁剪）Transform（轉化）。另外，當數據關系錯誤的時候，需要改變之。詳細步驟見下。1旋轉（Rotate） 在ImageRotate菜單中選擇適當的旋轉角度，其中“Custom Rotation”工具可以實現(xiàn)任意角度的旋轉，點擊后，圖像上出現(xiàn)如下圖所示的情況：圖中出現(xiàn)一個白圈和黃色十字，鼠標靠近黃色箭頭，可以任意角度拖動這個箭頭。旁邊有個小窗口顯示所需要旋轉的角度和弧度，點擊“Rotate”按鈕旋轉即可完成，請保存旋轉后

18、圖像。2裁剪（Crop） 裁剪的目的是去掉電泳區(qū)域以外的部分，僅保留從電泳起點到前緣有泳道的部分。選擇ImageCrop，在圖像適當的范圍內畫一個方框。鼠標移動到框邊變成雙向的箭頭，可以改變框的大小和形狀。最后鼠標移動到框內，當鼠標變成一剪刀形的時候，單擊，選擇“拷貝并裁剪”。3轉化（Transform）優(yōu)化圖像顯示，便于肉眼觀察。選擇ImageTransform，會彈出右-12-io-Rad Quantity One軟件應用講義圖所示窗口：選擇“Auto-scale”，軟件會自動調整對比度至最優(yōu)2。除此之外，有時還必須檢查數據關系是否正確。即圖中黑色部分的數據是否高于白色部分。正常情況下是的

19、，但有時會反過來。這種情況往往出現(xiàn)在用軟件分析其它公司的圖像儀時或者使用GelDoc XR，第二步“Image Mode”選錯的情況下。方法是：1選擇ViewPlot DensityDensity at Cursor，在圖像中顏色較深的地方點擊一下，觀察彈出的灰度數值2再在顏色較淺的地方點擊一下，觀察灰度數值。3比較前次數值是否大于后次的，如果是，則不用再進行任何改動；如不是，選擇ImageInvert Data，按彈出的對話框的提示一步步往下做。最后進行一次“Transform”。圖像分析Quantity One的圖像分析功能相當強大，根據不同的需要，可以分為定量分析、條帶分析、相似性分析以

20、及克隆計數(用于藍白斑篩選)等等，而且每種分析法都有獨特的優(yōu)點和輸出方式。本章重點介紹常用的定量分析和條帶分析方法，其余更細更深的功能請參考軟件自帶的用戶手冊。一 定量分析（Volumn Analysis）定量分析是計算選定區(qū)域內信號強度的總和，是Quantity One最方便的定量工具。這種分析方式考慮全定區(qū)域的真實形狀，可用于電泳條帶、斑點、大型芯片以等圖像的定量。這種定量的方法可以扣除背景，可以按照用戶的標準曲線計算出條帶或斑點的濃度，但它不能計算分子量，也不能進行條帶匹配和相似性分析。Quantity One軟件稱這類定量的結果為Volume。Volume選定區(qū)域內所有像素信號強度的總

21、和×像素面積Volume的單位：int×mm2快捷指南Volumes Quick Guide，能夠指導您對任意所選區(qū)域進行定量分析,此分析可以報告多種結果，常用的結果是相對濃度和絕對濃度（須提供標準品）。具體的操作方法如下：1 選擇成像系統(tǒng)或打開已保存的文件(軟件可以控制Bio-Rad所有的成像系統(tǒng)如GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX,如不是Bio-Rad成像系統(tǒng)所攝取的圖象，將圖象保存為Tiff 2 這種對比度調整并不改變具體的灰度數據，只是將圖中最“淡”的點顯示成白色，最“深”的點顯示成黑色。-13-io-Rad Quantity On

22、e軟件應用講義3文件格式，軟件也可進行分析處理)2 Zoom Box，縮放，對圖象進行放大觀察3 選擇待分析區(qū)域：Volumn Contour Tool等高線勾勒區(qū)域，自動連接濃度濃度相同的點，如U1Volume Free hand Tool自由畫筆選擇區(qū)域，可以勾勒出無規(guī)則形狀,如U2Volume Rect Tool 矩形區(qū)域選擇，如U3Volumn Circle Tool圓形選擇區(qū)域，如U4按上面4種方法選擇需要定量的區(qū)域。5雙擊所選區(qū)域，出現(xiàn)如下窗口，定義樣品類型，如未知樣品Unkonwn(U1,U2即待計算樣品)，背景Background(B1,B2，軟件在算濃度時會將此區(qū)域的濃度自動

23、扣除) 或標準樣品Standard（Std1,Std2, 如果該樣品是濃度標準樣品，即定量標準，需在濃度concentration一欄輸入該樣品的濃度）。 3 必須是8位（bit）或16位（bit）無壓縮的tiff文件-14-io-Rad Quantity One軟件應用講義6 Select Tool選擇不同區(qū)域7 Print Image打印圖像8 Volume AnalysisReport 定量報告結果。打開出現(xiàn)如下窗口，選擇要報告的參數，主要有2個參數Volume、adj. Vol. (即adjusted volume) 和Concentration。Volume為定量值，adj. Vol

24、. 為扣除背景后的定量值，如有濃度標準樣品（Std），軟件可報告Concentration絕對濃度。參數選好后，按下按鈕“done”。-15-io-Rad Quantity One軟件應用講義打印 文本輸出7軟件報告如上圖所示：按右側輸出按鈕，可將表格保存成txt文件，按左側打印按鈕，可將報告打印出來。二條帶分析（Band Analysis）條帶分析是Quantity One最基本的分析工具，它可以自動識別電泳泳道和識別條帶，依據泳道的平均光密度和條帶寬度對每個條帶進行模式化定量。這種分析方式雖然不如定量分析來得方便，但這樣可以實現(xiàn)非常復雜的電泳分析，滿足各種不同的結果需要。這種方式的最大優(yōu)點

25、在于它可以完全拋棄人為主觀因素而進行全自動定量。 -16-io-Rad Quantity One軟件應用講義用條帶分析的方法進行定量的結果叫Trace Quantity（Trace Qty），計算方法是：首先軟件自動計算條帶上每一橫排像素的平均光密度和平均光密度分布曲線，然后每個具體條帶的定量值是平均光密度曲線的線下面積的積分，即：Trace Quantity平均光密度×條帶上下邊界的距離Trace Quantity的單位：OD*mm條帶分析中的條帶定量模型下面介紹用此功能對泳道內的所有條帶進行分子量確定，相對濃度分析1 打開已保存的文件(如不是Bio-Rad成像系統(tǒng)所攝取的圖象，將

26、圖象保存為Tiff 4文件格式，軟件也可進行分析處理) 4 必須是8位（bit）或16位（bit）無壓縮的tiff文件-17-io-Rad Quantity One軟件應用講義2 Zoom Box，縮放，對圖象進行放大觀察3 Transform轉化，調節(jié)圖象的對比度黑白4 確定泳道(lane),并對泳道進行各種調整（實際實驗中泳道往往不是垂直的而出現(xiàn)各種變形）。按下圖所示在軟件的工具欄中有一Lane Tool圖標，包含有更多泳道編輯工具。Lane Tool泳道編輯工具包 Band Tool 條帶編輯工具包5選擇Frame Lanes，輸入圖像實際泳道(lane)數并確認。此時圖像上泳道的位置上

27、會出現(xiàn)一條條紅線，每條紅線就代表一根泳道。6選擇Add/Adjust Anchors，此時泳道紅線上會出現(xiàn)一些小圓圈。這些小圓圈稱為錨定點(anchor)，錨定點規(guī)定了泳道走向。當泳道不直時，點擊出現(xiàn)彎曲的泳道部位，就可以增加錨定點。鼠標按住錨定點，可以拖動錨定點，讓每根紅線始終位于泳道的中間線上。7Lane Background去除泳道背景。點擊該按鈕，選擇一條適當的泳道點擊之，然后在彈出的對話框中選“All Lane On”，在“Rolling Disk Size”中填入適當的數值5。8Detect Band，檢測泳道內的條帶，打開出現(xiàn)如下窗口。通過調節(jié)sensitivity靈敏度可調節(jié)檢

28、測出的條帶數，調節(jié)Lane Width使代表表帶的紅色橫線與條帶寬度差不多寬。中間一行人工編輯按鈕可以用來增加/減少條帶、調節(jié)條帶的上、下邊界等。打開工具欄中Band Tool條帶編輯工具包可看到更多編輯工具（如上圖） 5 數值代表背景扣除數，值越大則背景扣除越少，被計入條帶定量值越多，反之則背景扣除越多。從經驗來看，該數值以240之間為宜。-18-io-Rad Quantity One軟件應用講義人工編輯按鈕9. Standard輸入分子量標準，軟件自帶有許多Bio-Rad的分子量標準，如你用的是自己的標準，進入New Standard建立新的分子量標準，軟件可以選擇標準單位是MW（蛋白質）

29、還是BP（核酸）等（左下圖）。在Protein-Standard對話框中輸入分子量數值，完成后單擊賦值圖標（右下圖），回到圖象文件上單擊標準樣品的泳道，軟件自動將所輸的分子量數值和泳道內的條帶一一對應。賦值圖標：告訴軟件哪條是分子量標準樣品的泳道 輸入分子量數值10. Band Attribute條帶屬性，在完成第9步以后，軟件已自動計算出了其他未知條帶的分子量,打開band attribute選擇要報告的參數，這里我們選擇Molecular Weight，圖象上可以看到所有條帶的分子量（紅顏色標記），標準分子量為藍色標記。-19-io-Rad Quantity One軟件應用講義11. Pr

30、int Image打印圖象12. All Lane Report所有泳道條帶結果報告。打開窗口，選擇要報告的參數，如Mol.Wt.（分子量，如左下圖），軟件將報告結果（右下圖），在報告的右下腳有一報告輸出工具，點擊可將報告結果輸出成TXT文本格式或輸出至剪貼板，可粘貼到EXCEL，WORD等文件分子量條帶定量 相對豐度（純度）條帶號下。注：Relative Qty輸出每個條帶的相對豐度，即在泳道中的占比，用百分數表示。但軟件有兩種相對豐度的計算方法，一種是單一條帶占整個泳道（包括不屬于任何條帶的部分）的百分比，另一種是單一條帶占泳道中所有條帶的百分比。前者所有條帶的百分比之和小于100，后者所

31、有條帶的百分比之和等于100。用戶可以根據需要選擇。方法是：選擇Edit Preferences Application。在“Relative Quantity Calculation”的選項里根據需要選擇。-20-io-Rad Quantity One軟件應用講義 報告結果輸出三、結果輸出分析數據輸出 分析數據、表格的輸出在Analyze菜單下，根據分析的方法不同，可以選擇輸出（Report）的結果，或者打印表格。具體的方法參考前兩部分的結果輸出步驟。圖像輸出 Quantity One軟件可以實現(xiàn)原始圖像以及進行了各種分析后的圖像的靈活輸出。圖像輸出的格式有兩種：JPEG格式和TIFF格式。

32、這兩種格式下的輸出有著不同的特點。JPEG格式：選擇FileExport to JPEG Image，在彈出的對話框（如左圖）中選擇合適的圖像質量，按下“Export”按鈕即可。圖像將輸出成不可進一步編輯，擴展名”.jpg”的文件。這種輸出方式的特點是可以做到“顯示即輸出”，圖像顯示多大范圍、有哪些標記，就輸出這樣的范圍，這些標記，如下圖。TIFF格式：選擇FileExport to TIFF Image，在彈出的對話框（如下圖）中如選擇“export view excluding overlays”，可輸出不帶分析標記的全部圖像，且可以選擇適當的分辨率（不能超過原始圖像的分辨率）；如選擇“e

33、xport view including overlays”，就可輸出帶分析標記的圖像，也可以做到“顯示即輸出”，但不能選擇分辨率。-21-io-Rad Quantity One軟件應用講義常見問題及處理：123 問：為什么我新買的Quantity One軟件幾天前還能用，現(xiàn)在只能使用最基本的功能了？ 答：可能是密碼未正確安裝，而試用期已過。 問：為什么我重新安裝Quantity One軟件后就不能使用了？ 答：可能是安裝了超過版本限制的高版本Quantity One。 問：我的密碼狗還在，可密碼找不到了，我該如何填寫密碼？答：可以暫時將電腦連到Internet上，打開Quantity One

34、軟件，選擇HelpRegisterCheck License，或直接打電話800-820-5567，向Bio-Rad工程師詢問。問：Quantity One軟件能否分析通過其它公司成像儀或掃描儀得到的照片？答：可以，但前提是照片必須是未經壓縮的TIFF (tif) 文件，且數據采集位數是8位或12位。 問：我拍出的圖片，條帶很明顯，為什么軟件總找不到？答：打開Quantity One軟件，鼠標放在圖像上，同時按下Ctrl.+T，看看條帶數據是否大于背景，如果不是，則參考基本圖像優(yōu)化，進行Invert Data。問：為什么我拍出來的照片，總有一根根很粗的背景？答：可能是應該使用濾光片而沒有使用，把照明燈管攝入照片。問：為什么我用ChemiDoc XRS拍出來的照片，總有一條條向電泳條帶的影子？答：可能是在以前使用動態(tài)平場功能時，未將樣品取出，導致參考背景始終有以前樣品的影子。問：為什么我的白光轉換屏不亮了？-22- 4 5 6 7 8io