Agilent液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程

1、1 目的規(guī)范Agilent 1260系列高效液相色譜的日常使用和維護(hù)保養(yǎng)，保證儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，確保檢測工作的順利進(jìn)行。2 適用范圍適用于Agilent 1260系列高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。3 職責(zé)實(shí)驗(yàn)室分析人員負(fù)責(zé)Agilent 1260系列高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。4 系統(tǒng)組成4.1 Agilent 1260系列四元泵(G1311C)和脫氣機(jī)；4.2可變波長紫外檢測器（VWD G1314F）；4.3 Chemstation A.01.04 色譜工作站4.4國產(chǎn)柱溫箱（AT-550）色譜柱；4.5 電腦、打印機(jī)等輔助設(shè)備。5 定義無6 操作程序6.1開機(jī)前的準(zhǔn)備 檢查儀器校驗(yàn)

2、標(biāo)識，確認(rèn)儀器處于校驗(yàn)周期內(nèi)。檢查上次實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用記錄表和儀器狀態(tài)，確認(rèn)儀器處于正常狀態(tài)；流動相的制備：按高效液相色譜法流動相配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程配制需要的流動相。用前超聲脫氣（一般1020min）。更換流動相：將泵的吸濾器從舊流動相中取出，用新流動相沖洗后放入新流動相的儲液瓶中，并蓋好瓶蓋；將排液管的出口端放入廢液瓶中，并蓋好瓶蓋。供試溶液的配制：供試品用規(guī)定溶劑配制成供試品溶液。定量測定時，對照品溶液和供試品溶液均應(yīng)分別配制2份。如有必要，樣品需預(yù)處理，如過濾等，以免對色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染和色譜干擾。 選擇色譜柱：根據(jù)待檢供試品的檢測方法確定所需的色譜柱；檢查儀器上安裝的色譜柱是否與其相同，

3、若不同則需進(jìn)行更換。更換色譜柱拆卸原色譜柱：l 先握住色譜柱，再松動色譜柱出口端螺帽，取下出口端的管線；l 松動色譜柱入口端螺帽，取下入口端的管線；l 用止動塞將色譜柱的進(jìn)出口塞住擰緊后，將色譜柱放回原專用包裝盒內(nèi)。安裝新色譜柱：l 從專用包裝盒內(nèi)取出色譜柱，松動并取下色譜柱出入口的止動塞；l 將與進(jìn)樣器相連的管線一端插入色譜柱入口端，擰緊螺帽； (注意:安裝時色譜柱上的流向標(biāo)志應(yīng)與管路的流動相流向一致。)l 將與檢測器相連的管線一端插入色譜柱出口端，擰緊螺帽。6.2開機(jī)通電前應(yīng)檢查儀器設(shè)備之間的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。接通電源，打開計(jì)算機(jī)和打印機(jī)開關(guān)。等待計(jì)算機(jī)自檢完畢后，進(jìn)入

4、Windows桌面，依次打開泵、進(jìn)樣器、檢測器各模塊電源。打開柱溫箱開關(guān)。待各模塊自檢完成后，點(diǎn)擊Windows桌面“”圖標(biāo)進(jìn)入化學(xué)工作站畫面。確定儀器與工作站已連接，若未連接，需關(guān)閉工作站，重新連接。注意必須先打開檢測器，再連接工作站。從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面,也可單擊工作站畫面左側(cè)的“方法和運(yùn)行控制”項(xiàng)，進(jìn)入方法和運(yùn)行控制窗口。6.3 操作6.3.1 泵的開啟和設(shè)置打開Purge閥（逆時針），右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)流速：0ml/min，點(diǎn)擊“確定”。 右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“控制”選項(xiàng)，選中“啟動”，點(diǎn)擊“確定”，泵開始

5、啟動。待泵啟動完畢，泵的圖標(biāo)變綠色后，右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道設(shè)到100%，單擊“確定”。則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止（一般需要5min左右）。注意：為保護(hù)泵，不宜直接設(shè)置過高流速或直接將高流速降為低流速，宜緩慢梯度提高或降低流速；看柱前壓力，若大于10Bar，則應(yīng)更換排氣閥內(nèi)濾芯/過濾白頭。右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，將流速設(shè)為0ml/min，點(diǎn)擊“確定”，關(guān)閉Purge閥（順時針）。右鍵點(diǎn)擊四元泵下

6、面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)置使用的流動相比例和流速或選擇已有方法開始系統(tǒng)平衡。 點(diǎn)擊四元泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊“確定”。 方法編輯若已創(chuàng)建方法，可在“方法”菜單選擇“調(diào)用方法”，選擇相應(yīng)的方法。若無，需按下面步驟建立：6.3.2.1 從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法”，鉤選“方法信息”、“儀器/采集”、“運(yùn)行時選項(xiàng)表”三項(xiàng)，點(diǎn)擊確定； 出現(xiàn)“方法信息”對話框，如有需要可將方法的描述信息輸入，也可選擇不輸入任何信息，點(diǎn)擊確定；6.3.2.3 泵參數(shù)設(shè)定在“流量”處輸入流量,如1ml/min，在“溶劑 B”處輸入80.0,(A

7、=100-B-C-D) ,也可“插入 ”一行“時間表”,編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓,如300bar，以保護(hù)柱子。點(diǎn)擊“確定”進(jìn)入下一參數(shù)設(shè)定。 柱溫箱參數(shù)設(shè)定在柱溫箱上手動輸入規(guī)定的溫度即可。 紫外檢測器（VWD G1314F）參數(shù)設(shè)定在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm, 在“峰寬 (響應(yīng)時間)”下方點(diǎn)擊下拉式箭頭,選擇合適的響應(yīng)時間, 如>0.1min (2s)。 在“時間表” 中可以“插入”一行，輸入隨時間切換的波長，如1min ，波長=300nm。點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一參數(shù)設(shè)定。 在“ 運(yùn)行時選項(xiàng)表 ”中選中“ 數(shù)據(jù)采集”，點(diǎn)擊“確定”。 完整

8、方法編輯完畢。點(diǎn)擊“方法”菜單，選中“方法另存為”，輸入一方法名稱，點(diǎn)擊“確定”。 運(yùn)行樣品 從菜單 “視圖”中選中“在線信號”,選中“信號窗口1”,然后點(diǎn)擊“改變” 鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中,點(diǎn)擊“確定”。從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項(xiàng)，輸入操作者名稱；在“數(shù)據(jù)文件”中選擇“手動”或“前綴/計(jì)數(shù)器”。（區(qū)別:手動-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Pr在前綴/計(jì)數(shù)器-“前綴”框中輸入前綴，在“計(jì)數(shù)器”框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會自動命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002。）6.3.3.3 點(diǎn)擊“確定”，從“儀器”菜單選擇“系統(tǒng)開啟”。6.

9、3.3.4 手動進(jìn)樣6.3.4 數(shù)據(jù)處理雙擊電腦桌面的“”圖標(biāo)，進(jìn)入脫機(jī)工作站，從“視圖”菜單中選擇“數(shù)據(jù)分析”，或點(diǎn)擊屏幕左下方的“數(shù)據(jù)分析”，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。6.3.4.1 調(diào)用需要處理的數(shù)據(jù)：從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號”，或者點(diǎn)擊屏幕左上方的圖標(biāo)“”，跳出一個對話框，選擇相應(yīng)文件夾里的數(shù)據(jù)文件名稱，單擊“確定”即可。 調(diào)用方法：從“方法”菜單里選擇“調(diào)用方法”，或者點(diǎn)擊屏幕左上方的圖標(biāo)“”，跳出一個對話框，選擇相應(yīng)的方法名稱，單擊“確定”即可。 積分：從“積分”菜單中選擇“積分”，當(dāng)前數(shù)據(jù)被積分。若積分不是很理想，則從“積分”菜單中選擇“積分事件”，選擇合適的“斜率靈敏度”、“最小峰面

10、積”、“最小峰高”等。從“積分”菜單中選擇“積分”，則當(dāng)前數(shù)據(jù)被重新積分。6.3.4.3.3 如積分不理想，則重復(fù)和，直到滿意為止，此時點(diǎn)擊圖標(biāo)“”進(jìn)行積分參數(shù)的保存并退出積分參數(shù)設(shè)定界面。6.3.4.3.4 如果部分譜峰自動積分不是很理想，也可選擇手動積分。點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，繪制峰基線并積分；點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，切線撇去一個峰并積分（適合拖尾峰的處理）；點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，手動分裂已積分的峰（適合未基線分離的峰的處理）；點(diǎn)擊“”，刪除已積分的峰；點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，將當(dāng)前手動積分事件保存到數(shù)據(jù)文件中。其他數(shù)據(jù)處理方式詳見工作站說明書。6.3.5 打印報告6.3.5.1 打開打印機(jī)電源開關(guān)，從“報告”菜單中選擇“設(shè)

11、定報告”，或點(diǎn)擊屏幕中間的圖標(biāo)“”，跳出一對話框，選擇相應(yīng)的定量方法和報告格式，單擊確定后退出。 從“報告”菜單中選擇“打印報告”，或點(diǎn)擊屏幕中間的圖標(biāo)“”，則可預(yù)覽到報告。若報告中顯示的時間范圍及響應(yīng)范圍不合適，則可點(diǎn)擊“關(guān)閉”退出預(yù)覽。進(jìn)入“報告版面設(shè)計(jì)”界面，選擇相應(yīng)的報告格式，雙擊圖譜，點(diǎn)“自定義量程”，輸入合適的時間范圍和響應(yīng)范圍，并選擇“全部使用相同量程”，點(diǎn)擊“確定”并保存當(dāng)前模版后退出，再重新進(jìn)入“數(shù)據(jù)分析”界面，重新預(yù)覽報告，若時間范圍和響應(yīng)范圍均合適，單擊“打印報告”，即可。6.4 宏命令的使用 在“視圖”下拉單中調(diào)出“化學(xué)工作站工作日程表”； 輸入日期時間、命令并選好執(zhí)行

12、命令的模式，點(diǎn)擊保存圖標(biāo)；6.4.3 各宏命令代表意思及輸入方法： 開泵：pumpall on 關(guān)泵：pumpall off開燈：lampall on 關(guān)燈：lampall off載入一個方法：loadmethod xxx.M開始一個方法：startmethod xxx.M停止一個方法：stopmethod xxx.M關(guān)閉整個系統(tǒng)：standby。6.5.4 注意事項(xiàng)：日程表編輯完畢后，一定要保存，并且不能關(guān)閉；宏命令不區(qū)分大小寫。6.6 關(guān)機(jī)6.6.1 樣品測試完畢后，關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。l 5%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min;（若使用了無機(jī)鹽流動體系，則沖洗約30-

13、60min.）l 50%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min;l 80%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min。退出化學(xué)工作站，依次提示關(guān)泵及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開關(guān)。 做好儀器使用登記，并填寫實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用記錄表。6.7 系統(tǒng)日常維護(hù)和保養(yǎng)色譜柱 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、壓力范圍、溫度范圍、流動相類型等。流動相：5%乙腈/甲醇-水應(yīng)用棕色玻璃瓶存放，避免光照，防止長菌。試樣配制l 盡量用流動相配制試樣。l 必要時使用超聲波處理試樣，確保試樣完全溶解并混合均勻。l 若試樣中有肉眼可見的機(jī)械雜質(zhì)，則必須用針頭過濾器對試樣進(jìn)行過濾

14、（根據(jù)試樣的性質(zhì)選擇有機(jī)相或水相針頭過濾器）。l 對含有顆粒的固體樣品，經(jīng)研磨均勻后方可取樣。l 手動進(jìn)樣針：取樣前應(yīng)用試樣潤洗3次以上，使用后應(yīng)用甲醇/乙腈清洗3次以上。l 廢液處理：及時清理廢液瓶，以防廢液溢出。6.8儀器安全保障6.8.1 每天使用儀器之前，要打開Purge閥將各個通道沖洗45min左右；及時更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯(當(dāng)打開Purge Valve，流速為5ml/min壓力高于10bar時)。Purge閥在關(guān)閉狀態(tài)時，不宜過緊。6.8.3 當(dāng)儀器使用緩沖溶液作業(yè)時，要用水進(jìn)行過渡并將柱塞桿清洗開關(guān)打開。儀器暫停兩天以上不使用（包括兩天），過濾板最好選用甲醇浸泡。

15、避免使用不相溶的溶劑作流動相，避免水和緩沖液、酸、堿和含氯溶液在泵內(nèi)長時間的停留。 每次使用前后，應(yīng)檢查泵頭、并清洗除去污染物或析出的固體鹽。 避免在泵壓過高的狀態(tài)下長時間工作，如果流速較大且壓力較高，關(guān)閉泵以前需將流速逐漸降低以避免壓力波動過大，損壞色譜柱。 無壓力顯示或壓力波動較大時，不能進(jìn)行分析，應(yīng)檢查排氣閥是否關(guān)閉，泵中氣泡是否已排除，排除故障后方能進(jìn)行操作。如壓力升高，甚至自動停泵，應(yīng)檢查柱端有無污染、堵塞。 每次使用、維護(hù)完畢后，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)填寫使用記錄，包括柱子類型，遇到的問題、維護(hù)方法等。對實(shí)驗(yàn)中儀器的出錯，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)填寫具體的發(fā)生情況以及處理方法。未能處理的，應(yīng)向他人求證，并對下位使用者提出問題所在。每次使用儀器之前，應(yīng)當(dāng)查看使用記錄，確定有沒有尚未解決的儀器故障。儀器的移動，安裝，更新或升級應(yīng)當(dāng)由儀器負(fù)