食管鱗狀細(xì)胞癌中Wnt2、catenin、cmyc和cyclinD1的表達(dá)及臨床意義

1、食管鱗狀細(xì)胞癌中Wnt2、²catenin、c²myc和cyclinD1的表達(dá)及臨床意義        【摘要】     目的 研究Wnt2、2catenin及其下游的靶基因c2myc、cyclinD1在食管鱗癌中的表達(dá)情況，以期探討其在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。方法 用免疫組織化學(xué)SP法檢測40例食管鱗癌患者石蠟包埋的癌組織、癌旁組織及正常組織中Wnt2、2catenin、c2myc、cyclinD1表達(dá)情況，分析Wnt2、2cateni

2、n和c2myc、cyclinD1表達(dá)之間的相關(guān)性及與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 Wnt2、2catenin和c2myc、cyclinD1在食管癌組織、癌旁組織及食管正常組織中表達(dá)陽性率逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,2catenin和c2myc與腫瘤浸潤和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 Wnt2/2catenin /Tcf4通路在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，該通路有可能成為基因治療的潛在靶點(diǎn)。     【關(guān)鍵詞】  食管腫瘤 Wnt2 2catenin 免疫組織化學(xué)   &#

3、160;0  引言   食管癌是中國北方常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。食管鱗癌是其最常見組織學(xué)類型，Wnt/²catenin信號(hào)通路與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)1，尤其在食管鱗癌中缺少較為完整系統(tǒng)的研究，Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1為Wnt/²catenin信號(hào)通路中重要的組成成分，它們?cè)谡{(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化及調(diào)控細(xì)胞周期中起重要作用2²3，本研究將采用免疫組織化學(xué)的方法檢測Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1在食管鱗癌組織中的表達(dá)情

4、況，以探討其在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用及機(jī)制。1  資料與方法1.1  臨床資料   選取安陽市腫瘤醫(yī)院病理科提供的40例食管癌患者新鮮手術(shù)標(biāo)本,所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE病理確診均為食管鱗癌且每份標(biāo)本均有癌組織,癌旁組織及正常組織,患者年齡4574歲,中位年齡59.5歲,女18例，男22例,腫瘤組織中高分化6例,中分化19例,低分化15例,所有標(biāo)本術(shù)前均未行化療、放療，且無壞死腫瘤組織。1.2  試劑   免疫組化試劑羊抗人Wnt2，鼠抗人²catenin，鼠抗人cyclinD1，鼠抗人c

5、²myc試劑購自美國Santa CruZ公司，SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋公司。1.3  方法   采用免疫組化SP法,PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，抗原修復(fù)采用微波法，按照試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。   Wnt2免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)4:陽性信號(hào)定位于細(xì)胞漿，無染色或陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)>10%為陽性。   ²catenin免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn):參照Maruyama等5的方法，分別從細(xì)胞漿、細(xì)胞核及細(xì)胞膜三個(gè)方面進(jìn)行判斷：細(xì)胞膜陽性細(xì)胞率>70%為正常表達(dá)，反之為

6、表達(dá)減弱或缺失，細(xì)胞漿或細(xì)胞核陽性細(xì)胞率>10%為異位表達(dá)，總之細(xì)胞膜表達(dá)減弱或缺失及異位表達(dá)統(tǒng)稱為異常表達(dá)。   c²myc免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn):陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，胞漿內(nèi)出現(xiàn)中黃色細(xì)小顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。   cyclinD1免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn):陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，胞核內(nèi)出現(xiàn)中黃色細(xì)小顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各測得值±s表示，檢驗(yàn)用單因素方差分析、t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。所有結(jié)果均以P<0.05表示差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2  結(jié)果2.1  Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1在食管癌組織、癌旁組織及食管正常組織中的表達(dá)   SP免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果顯示，Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1在食管癌組織、癌旁組織及食管正常組織中表達(dá)水平依次降低，見圖1。Wnt2表達(dá)的陽性率分別為85% (34/40)、75% (30/40)、17.5% (7/40),²catenin表達(dá)的陽性率分別為90%(36/40)、77.5%(31/40)、15%(6/40),c²my

8、c表達(dá)的陽性率分別為 97.5%(39/40)、67.5%(27/40)、7.5%(3/40),cyclinD1表達(dá)的陽性率分別為52.5%(21/40)、32.5%(13/40)、12.5%(5/40),各組三者比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。表1  Wnt2 和²catenin在食管癌組織、癌旁組織及食管正常組織中的表達(dá)（略）Tab 1  Expression of Wnt2 and ²catenin protein in ESCC, para²carcer tissues and normal mucous membrane

9、 tissues表2  c²myc和cyclinD1在食管癌組織、癌旁組織及食管正常組織中的表達(dá)（略）Tab 2  Expression of c²myc and cyclinD1 protein in ESCC,para²carcer tissues and normal mucous membrane tissues2.2  Wnt2、²catenin、c²myc,cyclinD1在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征關(guān)系的探討   免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果表明，²catenin、c

10、²myc在蛋白水平的高表達(dá)與食管鱗癌的浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈相關(guān)性（P<0.05），而與腫瘤的分化程度及分期無顯著相關(guān)（P>0.05）,見表1，2。a, b, c and d are shown as Wnt2, ²catenin, c²myc，cyclinD1  and respectively圖1  食管癌組織中Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1的陽性表達(dá)  （SP×200）（略）Fig 1  Positive expression of Wnt2,

11、8;catenin,c²myc and cyclinD1 in Esophageal cancer tissues by immunohistochemistry  （SP×200）表1  食管鱗癌組織中Wnt2和²catenin 的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系（略）Tab 1  Relationship between the expression of Wnt2 and ²catenin protein and the clinicopathological characteristics in ESCC表2  食管

12、鱗癌組織中c²myc和cyclinD1的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系（略）Tab 2  Relationship between the expression of c²myc and cyclinD1 protein and the clinicopathological characteristics data in ESCC3  討論   Wnt通路是一條進(jìn)化上十分保守的信號(hào)傳導(dǎo)通路，其成員具有調(diào)控胚胎發(fā)育，參與細(xì)胞增殖與分化、遷徙和極性等多種重要作用，并具有高度的同源性，其異常激活或調(diào)節(jié)基因的失調(diào)均可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。²cat

13、enin是Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑中最為關(guān)鍵的調(diào)控子，其除了介導(dǎo)細(xì)胞粘附外還參與基因表達(dá)。c²myc和cyclinD1是Wnt通路下游的兩個(gè)關(guān)鍵的靶基因，在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移中扮演重要角色6，本研究旨在探討Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的四個(gè)關(guān)鍵因子在食管鱗癌中的表達(dá)及其與食管鱗癌臨床病理特征之間的關(guān)系。   本研究采用免疫組化SP法，分別對(duì)食管鱗癌組織、癌旁組織及食管正常黏膜組織中Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)從食管正常黏膜正常上皮組織到癌旁組織、食管鱗癌Wnt2、²catenin、c&

14、#178;myc及cyclinD1蛋白表達(dá)的陽性率呈逐漸上升趨勢，且隨著級(jí)別的升高其表達(dá)陽性率和陽性程度依次升高(P<0.01)，提示食管鱗癌的發(fā)生可能與Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路主要因子Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1高表達(dá)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中²catenin、c²myc蛋白的表達(dá)狀況與腫瘤的直徑、分期和發(fā)生部位無關(guān)（P0.05），但與浸潤深度和有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05），提示一定程度高表達(dá)²catenin、c²myc蛋白有助于食管鱗癌浸潤和轉(zhuǎn)移，而Wnt2和cyclinD1與腫瘤的直徑、分

15、期和發(fā)生部位、浸潤深度和有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P0.05）。   越來越多的證據(jù)表明，Wnt家族的多個(gè)成員在不同腫瘤的發(fā)展中有重要作用，在肺癌中常有Wnt1和Wnt2的過表達(dá)7，頭頸部鱗狀上皮癌中有Wnt1，5a,7a,10b,13的過表達(dá)8,而乳腺癌中則存在Wnt2和Wnt5a的高表達(dá)9，在肝癌中則存在Frizzle7的高表達(dá)，且其mRNA表達(dá)程度與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)10。目前，雖然wnt/²catenin信號(hào)通路在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用，但在食管鱗癌中的研究卻鮮有報(bào)道，我們研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵因子在食管鱗癌組織中均有不同程度的表達(dá)，Wnt

16、2在食管癌組織中高表達(dá)，在食管癌組織不同分期表達(dá)無差異，提示W(wǎng)nt2在食管鱗癌的早期發(fā)生和惡性表型的維持中起一定的作用。²catenin、c²myc、cyclinD1在食管正常黏膜組織、癌旁組織、食管鱗癌組織中的表達(dá)依次升高，且與組織浸潤深度和有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示三者可作為食管鱗癌預(yù)后的指標(biāo)之一。   總之，本研究結(jié)果顯示，Wnt2、²catenin、c²myc、cyclinD1在食管鱗癌組織中不同程度的表達(dá),但體內(nèi)Wnt信號(hào)傳遞網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性和分子調(diào)控的精確性并不是Wnt2、²catenin、c²myc、cy

17、clinD1單一因素和指標(biāo)所能完全解釋的,它們?cè)贓SCC發(fā)病的多個(gè)步驟中發(fā)揮作用,作用的機(jī)制和途徑也可能有所不同,因而進(jìn)一步研究Wnt信號(hào)通路與食管癌的發(fā)生發(fā)展的作用與機(jī)制，將為我們進(jìn)一步尋找新的食管鱗癌治療靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)支持。    【參考文獻(xiàn)】  1 Kolligs FT,Bommer G,Goke B.Wnt/2Catenin/Tcf Signaling:A Critical Pathway in Gastrointestinal TumorigenesisJ.Digestion,2002,66(3):1312144.2 Yue2

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