類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RA3336抗體角質(zhì)蛋白抗體及抗核周因子的相關(guān)性初步研究

1、    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RA33/36抗體，角質(zhì)蛋白 抗體及抗核周因子的相關(guān)性初步研究        【 摘要 】目的對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清中的RA33/36抗體，角質(zhì)蛋白抗體(AKA)及抗核周因子(APF)進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)這些抗體間的相關(guān)性進(jìn)行探討。 方法采用免疫印跡法檢測(cè)血清RA33/36抗體；采用IIF法檢測(cè)AKA及APF抗體；采用卡方檢驗(yàn)及Fisher?s檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。 結(jié)果RA患者血清中RA33/36抗體陽(yáng)性率為35.6%(16/45)，

2、AKA(180)陽(yáng)性率為31.1%(14/45)，APF的陽(yáng)性率為53.3%(24/45)。 結(jié)論雖然RA患者血清中可出現(xiàn)上述三種抗體，但三者間無相關(guān)性。【 主題詞 】RA33/36抗體角質(zhì)蛋白抗體抗核周因子類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 Study on the correlation between anti-RA33/36 antibody,anti-keratin antibody and anti-preinuclear factor in rheumatoid arthritis patients Tian Xinping,Jiang Ming,Song Qinfang,et al.Rheumato

3、logy and Immunology Department,Peking Union Medical College(PUMC) Hospital,PUMC,CAMS,Beijing100730Abstract Three auto-antibodies,anti-RA33/36 antibody,anti-keratin antibody(AKA) and anti-perinuclear factor(APF) in the sera of 45 Rhematoid Arthrits Patients were tested by Western-blot assay and indir

4、ect immunofluosence method.The association between these antibodies was assessed.The results showed the positive rates of anti-RA33/36 antibody,AKA and APF were 35.6%(16/45),31.3%(14.45) and 53.3%(24/45),respectively.This indicated that no significant correlation could be found between these autoant

5、ibodies although they could present in RA patients simultaneously.Subject words Rheumatoid arthritis Anti-RA33/36 antibody Antikeratin antibody Anti-perinuclear antibody 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是我國(guó)最常見的風(fēng)濕病，其發(fā)生率為0.3%。雖然對(duì)它的認(rèn)識(shí)已有近千年的歷史，但長(zhǎng)期以來，除類風(fēng)濕因子(RF)外，在RA患者血清中幾乎未發(fā)現(xiàn)其它自身抗體，因此，RA的診斷基本是以臨床表現(xiàn)及X線表現(xiàn)為依據(jù)。人們?cè)谠嚢l(fā)現(xiàn)RA患者血清自身抗體方面作出

6、了很多努力。近來漸發(fā)現(xiàn)RA患者血清內(nèi)有RA33/36抗體，角質(zhì)蛋白抗體(AKA)及抗核周因子(APF)。本研究不僅對(duì)RA患者血清中這三種抗體進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)三者間的相關(guān)性進(jìn)行了探討。材料和方法1.RA患者組：共45例，為我院門診就診患者，診斷符合1987年ARA RA分類標(biāo)準(zhǔn)1，其中女41例，男4例，男女=110.3，平均年齡為47.5歲(1568歲)，平均病程9.6年。2.方法(1)免疫印跡法檢測(cè)血清RA33/36抗體：抗原提取自艾氏腹水瘤細(xì)胞，具體方法見參考文獻(xiàn)2。(2)IIF法檢測(cè)AKA及APF抗體：實(shí)驗(yàn)材料、抗原來源及具體方法參見參考文獻(xiàn)3及4。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)：采用卡方檢驗(yàn)及Fishe

7、r?s精確檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果1.RA33/36抗體結(jié)果判定：由于在RA及其它疾病中亦可出現(xiàn)RA33/36抗體，而當(dāng)分子量為33×103與36×103抗體同時(shí)出現(xiàn)時(shí)，則在RA患者中特異性較高，因此，我們僅將同時(shí)出現(xiàn)RA33/36×103二條帶時(shí)判斷為陽(yáng)性；以此為標(biāo)準(zhǔn)，共16例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為35.6%(16/45)。2.AKA結(jié)果判定：將棘細(xì)胞層及角質(zhì)層均出現(xiàn)熒光染色，二者界限清楚且亮度相差明顯時(shí)判斷為陽(yáng)性。當(dāng)患者血清稀釋度較低時(shí)，易出現(xiàn)非特異染色，因此，我們將血清稀釋至180時(shí)仍陽(yáng)性者判斷為陽(yáng)性，這雖然降低了敏感性，卻提高了特異性。共有14例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為31

8、.3%(14/45)。3.APF：凡是細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)熒光染色陽(yáng)性顆粒者為陽(yáng)性；共24例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為53.3%(24/45)。4.RA33/36抗體、AKA及APF的相關(guān)性比較：見附表。從表中可以看出，三種抗體間無明顯相關(guān)性。附表抗RA33/36、AKA和APF的相關(guān)性比較Table. Correlations among anti-RA33/36,anti-AKA and anti-APFRA33/36(+)RA33/36(-)APF(+)APF(-)AKA(+)5968AKA(-)1120P=0.411813P=0.84AKA(+)AKA(-)APF(+)APF(+)RA33/36(+)5

9、11106RA33/36(-)920P=0.231415P=0.79RA33/36(+)RA33/36(-)AKA(+)AKA(-)APF(+)1014618APF(-)615P=0.09813P=0.09討論1964年Nienhuis和Mandema首次在RA患者中檢測(cè)出了一種不明成分的抗體，由于這些抗體出現(xiàn)于細(xì)胞核周圍，故將其稱為抗核周因子，即APF。之后發(fā)現(xiàn)APF對(duì)RA診斷的特異性為72.7%905，6，因此，APF不乏為一種可用于診斷RA的指標(biāo)。但由于APF的作用底物材料不易獲得，其抗原成分也不清楚，因此該抗體未能廣泛用于臨床診斷7。1970年Young等人以Wistar大鼠食管下1/

10、3段的橫切面為底物，用間接免疫熒光(IIF)法在RA患者血清中發(fā)現(xiàn)了一種局限于角質(zhì)層的抗體，將其稱為角質(zhì)蛋白抗體，即AKA，并認(rèn)為它對(duì)RA的診斷具有較高的特異性8。1989年Vincent等的研究發(fā)現(xiàn)只有在角質(zhì)層顯示線狀或板層狀的強(qiáng)熒光，而棘細(xì)胞層可能同時(shí)出現(xiàn)弱熒光時(shí)，才能認(rèn)為AKA陽(yáng)性，并認(rèn)為此時(shí)的AKA對(duì)RA診斷具有特異性。進(jìn)一步的臨床研究發(fā)現(xiàn)，AKA陽(yáng)性患者表現(xiàn)為ESR增快，CRP(C反應(yīng)蛋白)增高，循環(huán)免疫復(fù)合物增多，所伴發(fā)的關(guān)節(jié)外表現(xiàn)較多，預(yù)后較AKA陰性者差。并認(rèn)為AKA是判斷RA預(yù)后的指標(biāo)之一。此外還發(fā)現(xiàn)，AKA陽(yáng)性的健康人經(jīng)隨診后，有一部分可發(fā)展為典型的RA。因此，AKA可能是

11、RA的早期診斷指標(biāo)之一9。RA33/36抗體是1989年Hassfeld在RA患者血清內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種自身抗體，有分子量為33×103和36×103二種成分，認(rèn)為當(dāng)二種成分同時(shí)出現(xiàn)時(shí)，對(duì)RA診斷的特異性較高。RA33/36抗體出現(xiàn)于RA病程早期，見于33%的RA患者，一旦出現(xiàn)即不再消失；與患者年齡和病程無關(guān)，與RA的病情嚴(yán)重性無關(guān)，與RF不具相關(guān)性10。因此，RA33/36抗體可作為RA早期診斷的指標(biāo)，但它與臨床表現(xiàn)無明顯相關(guān)性。雖然人們先后發(fā)現(xiàn)了上述三種自身抗體，但對(duì)三者間的相關(guān)性并未進(jìn)行深入的研究。一般認(rèn)為，APF由于其敏感性和特異性較高，可用于RA的篩選；而AKA與患者的

12、病情有關(guān)，可用于對(duì)患者病情及預(yù)后的判斷，由于AKA和RA33/36抗體出現(xiàn)于RA患者早期，故有助于早期診斷。本研究表明，雖然RA患者中可出現(xiàn)上述三種抗體，但這三種抗體的出現(xiàn)無明顯相關(guān)性。在研究中我們還發(fā)現(xiàn)，在一個(gè)患者中可檢測(cè)出一種、二種抗體，甚至可同時(shí)出現(xiàn)上述三種抗體，但也有一部分患者體內(nèi)檢測(cè)不出上述任何抗體。目前為止，未發(fā)現(xiàn)這二組患者的臨床表現(xiàn)有明顯差異，這可能與本研究納入患者人數(shù)較少有關(guān)。近來人們對(duì)HLA-類基因與RA發(fā)病及其臨床表現(xiàn)的相關(guān)性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)DR基因與RF的陽(yáng)性率相關(guān)11。但我們的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，DR基因與其它自身抗體如RA33/36抗體、AKA及APF的出現(xiàn)無關(guān)。這些抗體的

13、出現(xiàn)是否與類基因的其它位點(diǎn)如DQ、DP有關(guān)，或與其它基因有關(guān)，尚需進(jìn)一步研究。 作者單位：100730 北京，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科(田新平，蔣明，宋琴芳)；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)科(李永哲，崔京濤)參考文獻(xiàn)1Arnett FC,Edworth SM,Bloch DA，et al.The american association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988,31315-324.2周志杰，蔣明，宋琴芳.抗

14、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎36kD和33kD抗體對(duì)RA診斷意義的研究.中華內(nèi)科學(xué)雜志，1994，33(4)251-255.3周志杰，蔣明，王慧珍，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的抗角質(zhì)蛋白抗體角質(zhì)層.中華內(nèi)科學(xué)雜志，1995，34(5)330-332.4梅樹恩，蔣明，王慧珍，等.抗核周因子對(duì)RA的診斷意義.中華醫(yī)學(xué)雜志，1995，75(8)507.5Veys EM,Dekeyser F,De Vlank,et al.The anti-perinuclear factor.Clin Exp Rheumatol,1991,8429-432.6Gaby C,Prieur AM and Meger O.Occurence of

15、anti-perinuclear,anti-keratin and anti-RA33 antibodies in Juvenile chronic arthritis.Ann Rheum Dis,1993,52785-792.7Youinou P and Goff PL.There lability of the anti-perinuclear factor test despite the inconstantly of the targeted antigens.J Rheumatol,1994,211190-1196.8Young BJJ,Malya RK,Leslie RDG,et al.Anti-keratin antibodies in rheumatoid arthritis.BMJ,1979,297-99.9Paimela L,Gripenberg M,Kurki P,et al.Antikeratin antibodies:diagnostic and prognostic marker of early rheumato