P27蛋白在宮頸鱗狀細胞癌中的表達

1、P27蛋白在宮頸鱗狀細胞癌中的表達作者：毛榮軍，李啟明，房慧琳，王桂芳 作者單位：廣州中醫(yī)藥大學附屬佛山中醫(yī)院病理科，廣東佛山528305;廣東省佛山市順德桂洲醫(yī)院婦產科，廣東佛山528305【摘要】 目的 探討P27蛋白表達與宮頸鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展的關系。方法 采用SP法免疫組化分別檢測宮頸鱗狀細胞癌、癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常鱗狀上皮及非癌旁正常鱗狀上皮組織中P27蛋白的表達。結果 宮頸鱗狀細胞癌、癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常鱗狀上皮及非癌旁正常鱗狀上皮組織中P27陽性表達率分別為35.00%(21/60)、38.89%(14/36)、77.78%(42/54)、80.00%(

2、8/10)，其中宮頸鱗狀細胞癌及癌旁高級別鱗狀上皮病變P27陽性表達率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮相比差異均有顯著性(P0.05或0.01)。P27陽性表達率下降與組織學分級、腫瘤大小、腫瘤浸潤及淋巴轉移有關(P均0.05)。結論 P27在宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要的作用，體現在P27蛋白表達降低或缺失時易導致宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生和轉移，因此檢測P27蛋白表達可作為宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展及預后評估的一個有用指標?！娟P鍵詞】 宮頸腫瘤;癌，鱗狀細胞;P27蛋白Expression of P27 protein in cervical squamous carcinoma tis

3、suesMAO Rong-jun, LI Qi-ming, FANG Hui-lin, WANG Gui-fang1. Department of Pathology, Affiliated Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Foshan, Guangdong 528305, China;2. Department of Obstetrics and Gynecology, Guizhou Hospital of Shunde

4、 Districtin Foshan City, Foshan, Guangdong 528305, ChinaAbstract: Objective To investigate the relationship between the expression of P27 protein and the oncogenesis and development of cervical squamous carcinoma (CSC). Methods The expression of P27 was detected by using SP immunohistochemical stain

5、ing in paraffin sections from cases of CSC, high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) and corresponding normal squamous tissues (CNST) closely adjacent to carcinoma, and other normal squamous tissues (ONST). Results The positive rates of P27 protein expression in SCS, HSIL, CNST and ONST wer

6、e 35% (21/60), 38.89% (14/36), 77.78% (42/54) and 80% (8/10), respectively. The comparison of positive rates among SCS, HSIL and CNST, ONST showed significant differences (P0.05 or 0.01). The decreased expression of P27 protein was associated with histologic grading, tumor size, invasion and metasta

7、sis of SCS (all P0.05). Conclusion P27 protein might play an important suppressing role in the genesis and development of CSC, the down-regulated expression of CSC might easily lead to lymphnode metastasis and tumorous invasion, expression of P27 could be helpful in predictin the biological behavior

8、 and prognosis of CSC.Key words: cervical neoplasms; carcinoma, squamous cell; P27 protein宮頸鱗狀細胞癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，多種因素長期的共同作用促進了宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生與發(fā)展，在此過程中涉及多基因、多分子水平的改變，其中包括癌基因的激活和抑癌基因的失活，導致了細胞無限制地生長，從而引起腫瘤的發(fā)生。在細胞生長過程中，對G1期的調控是細胞周期的關鍵調控點。P27是細胞周期G1 期重要的負向調控因子，是近年來發(fā)現被認為是一種新的候選抑癌基因。目前，它在宮頸鱗狀細胞癌中的研究較少，尚無深入研究的文

9、獻報道。基于此，我們采用免疫組化法檢測了宮頸鱗狀細胞癌組織及其癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常宮頸鱗狀上皮、非癌旁正常鱗狀上皮中的P27蛋白，以期為研究宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展和評估預后提供新的理論依據。1 材料與方法1.1 組織標本及處理方法材料選用本院、順德桂洲醫(yī)院及廣州金域醫(yī)學檢驗中心2001年1月2007年1月手術切除送檢的60例宮頸鱗狀細胞癌標本，其中36例帶有癌旁高級別鱗狀上皮病變，54例帶有癌旁正常鱗狀上皮。60例患者中，年齡2968歲，平均45歲，所有標本均經病理證實為宮頸鱗狀細胞癌，術前均未作放療和化療處理。另取10例非癌旁正常宮頸組織的鱗狀上皮標本作為對照組。所有標本均經

10、10%中性福爾馬林液固定、取材、常規(guī)脫水、透明和包埋，連續(xù)切片，厚度為5m。組織切片置于預先涂有多聚賴氨酸的載玻片烤干備用。1.2 免疫組化學染色法采用鏈菌素親生物素過氧化物酶法(SP法，按說明進行操作)，以北京中杉公司提供的已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作為空白對照。1.3 結果判斷免疫組化染色片，隨機選擇10個高倍視野，計數1000個腫瘤細胞中陽性細胞百分率，細胞核和(或)胞漿內有棕黃或黃色染色顆粒者為P27蛋白陽性細胞。無棕色或黃色染色顆粒者為P27陰性細胞。陽性細胞10%定為陽性片，10%為陰性片。1.4 統(tǒng)計學處理采用2檢驗進行統(tǒng)計學處理。2 結果2.1 P27蛋白在非癌旁

11、正常宮頸鱗狀上皮、癌旁正常鱗狀上皮、癌旁高級別鱗狀上皮病變及宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達 宮頸鱗狀細胞癌中P27陽性表達率低于癌旁及非癌旁正常(P0.05);癌旁高級別鱗狀上皮病變P27蛋白陽性表達率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮差異有顯著性(P45歲P27蛋白陽性表達率比較差異無顯著性(P0.05);腫瘤直徑3cm與3cm P27蛋白陽性表達率比較差異有高度顯著性(P0.01);無宮頸外組織浸潤與有宮頸外浸潤P27蛋白陽性表達率比較差異有高度顯著性(P0.01);在病理組織分級中，宮頸鱗狀細胞癌級與級、級P27蛋白陽性表達率比較差異有高度顯著性(P0.01);無淋巴結轉移與有淋巴結轉移P27蛋

12、白陽性表達率比較差異有高度顯著性(P0.01)，見表2。表2 宮頸鱗狀細胞癌的臨床病理因素與P27蛋白的表達項目nP27陰性陽性陽性率(略)3 討論Polyak等1在1994年最先發(fā)現了P27，它是一個分子量為27kDa的熱穩(wěn)定蛋白質，人的P27-cDNA，長約594bp ，編碼198個氨基酸的蛋白質，其主要功能是作為CDK抑制因子參與細胞周期的調控，對細胞周期的調控要作用在G1/S期，對靶分子的作用發(fā)生于細胞核內。P27在胞漿內的異常定位可導致P27失活及降解增加2。由于P27在細胞周期中起負性調控因子的作用，因此被認為是一種抑癌基因，具有抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的特性。但是，有關P27在人類腫瘤

13、的大量研究中卻發(fā)現P27基因的缺失、突變與重排在人類腫瘤細胞中是罕見現象，P27蛋白水平的調節(jié)主要發(fā)生于轉錄后的翻譯和降解過程3，其與腫瘤的關系主要體現在其蛋白水平及活性上。有些研究發(fā)現46，P27蛋白在皮膚黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌的表達水平是反映腫瘤侵襲性的標志，其表達的減少與預后不良關系密切，但尚有研究報道7，在膀胱尿路上皮癌中隨著組織學分級的增加，P27蛋白表達明顯增高。本實驗研究發(fā)現，P27在非癌旁及癌旁正常宮頸鱗狀上皮中的陽性表達率分別為80.00%(8/10)及77.78%(42/54)，而在癌旁高級別鱗狀上皮病變及鱗狀細胞癌組織中P27蛋白陽性表達率為38.89%(14/36)及

14、35.00%(21/60)，宮頸鱗狀細胞癌中P27陽性表達率明顯低于癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮組織，差異具有顯著性(P0.05)。癌旁高級別鱗狀上皮病變P27蛋白陽性表達率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮差異亦有顯著性(P0.05或0.01)，顯示了P27蛋白表達水平的下降與宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展有關，提示P27在宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生中起重要作用。由此可推出，P27蛋白的表達越少，P27蛋白功能越受到抑制，由此可能破壞其負調控細胞周期的功能，導致細胞周期失調，S期細胞增多，DNA合成相應增多，從而細胞過度增生，阻止細胞凋亡，導致細胞無限增殖和腫瘤形成。本實驗還發(fā)現，P27蛋白表達與宮頸鱗狀

15、細胞癌的腫瘤大小、臨床病理分級、宮頸外浸潤及淋巴結轉移等有關(P均0.05)，提示P27蛋白表達降低的宮頸鱗狀細胞癌更易使腫瘤快速生長及發(fā)生宮頸外浸潤和淋巴結轉移。因此可認為，P27高表達是宮頸鱗狀細胞癌預后良好的一個獨立指標，其原因可能為P27的低表達，對G1/S期轉換的抑制作用減弱，使細胞更易進入S期;低水平的P27使G0期細胞恢復進入細胞周期;P27表達能影響細胞間接觸，下調P27能抑制細胞粘附從而促進腫瘤細胞擴散。綜上所述，P27蛋白與宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切關系，可成為一個預測術后復發(fā)的指標。P27基因的發(fā)現為研究腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、診斷治療及預后評估等提供了一個新的熱點，但

16、是P27的作用機理尚未徹底清楚。因此，深入研究P27基因對宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生機制、發(fā)展過程及其防治都具有重要意義?！緟⒖嘉墨I】Polyak K, Lee MH, Erdjument-Bromage H,et al. Cloning of P27,a cyclin-dependent kinase inhibitor and a protential mediator of extracellular autimitogenic signals J.Cell,1994,78:59-66.Liang J, Zubovitz J, Petrocelli T, et al. PKBP Akt pho

17、sphorylates P27, impairs nuclear import of p27 and opposes p27 mediated G1 arrest J. Nat Med,2002,8(10):1153-1160.Nakayama KI, Hatakeyama S, Nakayama K. Regulatiou of the cell cycle at the G1-Stransition by proteolysis of cyclinE and P27 Kipl J. Bioche in BiophysRes Commun,2001,282(4):853-860.Sanki

18、A, Li W, Colman M, et al.Reduced expression of p16 and p27 is correlated with tumour progression in cutaneous melanoma J. Pathology,2007,39(6):551-557.Kouvaraki MA, Korapati AL, Rassidakis GZ, et al. Potential role of Jun activation domain-binding protein 1 as a negative regulator of p27kip1 in pancreatic adenocarcinoma J. Cancer Res,2006,66(17):8581-8589.Sasaki T, Katayose Y, Yamamoto K, et al.