膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳法測定瞿黃液中大黃蒽醌的含量

1、    膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳法測定瞿黃液中大黃蒽醌的含量        摘要：采用膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳法測定瞿黃液中大黃素、大黃酚、大黃酸和大黃素甲醚的含量。以對(duì)氨基苯磺酸為內(nèi)標(biāo)，緩沖液為0.05 mol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.1 mol/L三羥甲基氨基甲烷(Tris)、0.03 mol/L磷酸氫二鈉，pH 8.2，溫度為25 ，恒定電壓為25 kV，進(jìn)樣量為10 kPa/s，檢測波長為254 nm。結(jié)果本方法的精密度、線性關(guān)系和回收率均較好，且簡便快速，可用于瞿黃液的

2、質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳法；大黃素；大黃酚；大黃酸；大黃素甲醚；瞿黃液中分類號(hào)：R 284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1000-5633(2000)01-0024-02瞿黃液是由瞿麥、大黃、黃芪、益母草等中藥提取精制而成的膀胱沖洗液，臨床上用于治療外傷性截癱并發(fā)尿路感染等，療效顯著1。本文采用膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳法(MECC)對(duì)瞿黃液中的大黃蒽醌進(jìn)行了定量分析研究，現(xiàn)報(bào)告如下。1實(shí)驗(yàn)材料1.1儀器HPCE-3D型三維高效毛細(xì)管電泳儀(美國惠普公司)，石英毛細(xì)管(內(nèi)徑50 m，有效長度56 cm，美國惠普公司)。1.2試藥對(duì)照品大黃素、大黃酚、大黃酸和大黃素甲醚均購自中國藥品生物制品檢

3、定所，內(nèi)標(biāo)物對(duì)氨基苯磺酸(優(yōu)級(jí)純)，瞿黃液為自制品，其它試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1測定條件    附對(duì)照品(A)及瞿黃液樣品(B)毛細(xì)管電泳1.大黃素2.對(duì)氨基苯磺酸(內(nèi)標(biāo))3.大黃酚4.大黃酸5.大黃素甲醚2.2樣品測定表1樣品含量測定結(jié)果(g/ml)成分批號(hào)970705970710970715大黃素12.511.911.3大黃酚5.76.15.2大黃酸46.847.346.2大黃素甲醚9.58.19.2     2.3精密度取瞿黃液樣品，按樣品測定項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，照選定的條件進(jìn)行測定，計(jì)算待測成分和日內(nèi)

4、、日間的標(biāo)峰面積的比值及待測成分遷移時(shí)間的 RSD，結(jié)果各成分的精密度較好，見表2。 表2日內(nèi)及日間的精密度測定結(jié)果(%)成分峰面積比值的RSD日內(nèi)日間(n5)(n10)遷移時(shí)間的RSD日內(nèi)日間(n5)(n10)大黃素1.21.90.60.9大黃酚1.21.40.70.8大黃酸2.02.11.51.8大黃素甲醚2.62.92.43.0     2.4線性關(guān)系精密稱取大黃素5 mg、大黃酚5 mg、大黃酸10 mg和大黃素甲醚2.5 mg，置50 ml量瓶中，加0.05 mol/L氫氧化鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，精密量取上述溶液0.2、0.4、0.6、0.

5、8、1.0 ml置10 ml量瓶中，各加入1 mg/ml對(duì)氨基苯磺酸內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，再加入0.05 mol/L氫氧化鈉液稀釋至刻度，搖勻。按選定的測定條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以待測成分及內(nèi)標(biāo)峰面積比值 Y與濃度 X進(jìn)行線性回歸，結(jié)果各成分在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見表3。2.5加樣回收率精密吸取已測定含量的瞿黃液25 ml，分別加入對(duì)照品大黃素100 g、大黃酚100 g、大黃酸200 g和大黃素甲醚100 g，按含量測定項(xiàng)下的方法測定，分別測得各成分的平均回收率，結(jié)果各成分的回收率較好，在95.5%97.7%之間，見表4。 表3各成分的線性范圍、回歸方程及相關(guān)系數(shù)成分線性范圍(g/ml)回歸

6、方程相關(guān)系數(shù)大黃素20100Y0.894 42.872 3X0.999 7大黃酚20100Y0.915 93.688 1X0.999 8大黃酸40200Y0.348 74.311 4X0.999 9大黃素甲醚1050Y-0.344 32.610 5X0.999 5     表4各組分的加樣回收率(n5，%)成分回收率RSD大黃素96.62.9大黃酚97.22.2大黃酸97.72.5大黃素甲醚95.53.3     2.6穩(wěn)定性取樣品按含量測定項(xiàng)下配制溶液在0、3、6、9 h各點(diǎn)進(jìn)行測定并計(jì)算，結(jié)果各成分在9 h內(nèi)保

7、持穩(wěn)定。 3討論中藥復(fù)方制劑中，所含成分復(fù)雜，采用HPLC法進(jìn)行測定時(shí)，往往因雜質(zhì)太多，容易污染液相柱，使柱效降低。而采用HPCE法進(jìn)行分析時(shí)，由于毛細(xì)管柱易沖洗再生，保持高效，使各成分之間的分離較佳。本實(shí)驗(yàn)中，各成分之間的分離較好，理論板數(shù)除大黃素甲醚約為60 000外，其余各成分峰均在100 000以上。HPCE法由于進(jìn)樣量小，影響遷移時(shí)間的因素很多，重復(fù)性較差。但在實(shí)際操作中，只要嚴(yán)格控制各種條件，仍可達(dá)到較滿意的結(jié)果。影響因素中電壓、進(jìn)樣量、柱溫均由儀器控制，影響不大，主要是在于如何控制緩沖液的變化，每次測定應(yīng)盡可能保持緩沖液的 pH、離子強(qiáng)度、體積等的一致性?；痦?xiàng)目：湖南省衛(wèi)生廳資助課題（96008）作者簡介：張艷(1964-)，女，湖南長沙人，湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院藥師，主要從事藥劑學(xué)研究。作者單位：張艷（湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 41