Bcl2表達(dá)對(duì)不同細(xì)胞來(lái)源的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理特征和預(yù)后的影響

1、Bcl2表達(dá)對(duì)不同細(xì)胞來(lái)源的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理特征和預(yù)后的影響                    作者：裴媛媛，楊文秀，王松，薄麗，孟青【摘要】  目的： 了解Bcl2表達(dá)對(duì)不同基因表達(dá)譜細(xì)胞來(lái)源的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）臨床病理特征和預(yù)后的影響。方法： 收集42例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織，常規(guī)HE及免疫組織化學(xué)染色，觀察DLBCL的組織形態(tài)特點(diǎn)、腫瘤細(xì)胞的免疫表型和Bcl2的表達(dá)；搜集臨

2、床病理資料和隨訪，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果： 42例DLBCL中31例表達(dá)Bcl2（73.8%），生發(fā)中心細(xì)胞來(lái)源樣（14/17）和活化后細(xì)胞來(lái)源樣（17/25）DLBCL病例之間Bcl2表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但Bcl2陽(yáng)性和陰性病例之間臨床分期有明顯差別，Bcl2陽(yáng)性病例臨床分期明顯晚于陰性病例(P0.05)；原發(fā)于結(jié)外的DLBCL淋巴結(jié)累及者多為Bcl2陽(yáng)性病例（5/6），Bcl2陽(yáng)性DLBCL病例的生存狀況有差于陰性病例的趨勢(shì)（P=0.06）。結(jié)論： DLBCL中Bcl2表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)譜沒有明顯關(guān)系，但與DLBCL的臨床病理過程和預(yù)后有關(guān)，可能是判斷DLBCL預(yù)后的相關(guān)因子。 【關(guān)

3、鍵詞】  淋巴瘤； Bcl2； 病理學(xué)； 預(yù)后Abstract Objective: To investigate the influence of Bcl2 expression on clinicopathological features and prognosis of diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) developed from different cell origins. Methods: Tissues of 42 cases of DLBCL were screened from 180 cases of B cell n

4、onHodgkin lymphoma. Sections were stained with routine HE method, and immunophenotypes of neoplastic cell, such as CD20, CD3, CD10, Bcl6, Bcl2 and MUM1, were examined with immunohistochemistry (IHC) stained sections. The clinical and pathological data of all cases were collected. Some patients were

5、followed up. Statistical analysis was done. Results: The expression of Bcl2 was found in 31 out of 42 case of DLBCL (73.8%). There was no statistically significant difference of Bcl2 expression between GBClike (14/17) and ABClike (17/25) DLBCL. The relation of Bcl2 expression with age, sex, site of

6、DLBCL was not found, but it was associated with clinical staging of the disease. The stages of Bcl2positive DLBCL cases were later than those of Bcl2negative DLBCL cases (P0.05). Most of the DLBCL cases that originated outside nodes showed positive expression of Bcl2 (5/6). There was a tendency that

7、 the survival status of Bcl2positive cases was worse than that of Bcl2negative cases (P=0.06). Conclusions: The expression of Bcl2 in DLBCL doesnt associate with the gene expression spectra obviously, but it affects the clinical course and prognosis of DLBCL. Bcl2 may be one of predictive factors fo

8、r prognosis of DLBCL.Key words lymphoma; bcl2; pathology; prognosis    彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（Diffuse large B cell lymphoma, DLBCL）是外周成熟B細(xì)胞淋巴瘤中最常見的類型，是一組異質(zhì)性淋巴瘤，在2008年淋巴造血組織腫瘤分類中被分成了十余種亞型1,不同DLBCL亞型的病因、發(fā)生機(jī)制、臨床過程和預(yù)后不盡相同。Bcl2是從B細(xì)胞淋巴瘤中被首先發(fā)現(xiàn)的癌基因，是重要的凋亡抑制基因，主要通過線粒體途徑抑制細(xì)胞凋亡。過去研究認(rèn)為，Bcl2特異地在惰性的濾泡性淋巴瘤中表達(dá)，通過抑制細(xì)胞凋

9、亡而參與濾泡性淋巴瘤的發(fā)生機(jī)制?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，Bcl2在多種惰性小B細(xì)胞淋巴瘤和侵襲性的DLBCL中都有表達(dá)，其表達(dá)對(duì)這些淋巴瘤產(chǎn)生的影響目前尚未完全清楚。有報(bào)道認(rèn)為，Bcl2表達(dá)可能影響DLBCL的化療效果和臨床過程2，3，但研究結(jié)果不盡一致，Bcl2表達(dá)對(duì)不同細(xì)胞來(lái)源的DLBCL的影響還未見報(bào)道。收集2001-2007年DLBCL病例進(jìn)行研究，觀察Bcl2表達(dá)對(duì)DLBCL細(xì)胞來(lái)源、臨床病理特征和預(yù)后等是否產(chǎn)生影響，是否可以作為判斷DLBCL預(yù)后的相關(guān)因子。1  資料和方法1.1  資料 收集2001-2007年診斷的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤180例，常規(guī)HE切片觀察，

10、檢查腫瘤細(xì)胞的免疫表型，按照2008年WHO淋巴造血組織腫瘤分類進(jìn)行病例復(fù)查和篩選。篩選工作由兩位資深的病理科醫(yī)師完成，淋巴瘤的臨床分期參照修正的Ann arbor 分期進(jìn)行，根據(jù)Bcl2表達(dá)情況對(duì)研究病例進(jìn)行分組，根據(jù)腫瘤細(xì)胞CD10、Bcl6和MUM1的表達(dá)情況確定DLBCL的細(xì)胞來(lái)源。CD10和Bcl 6陽(yáng)性（或Bcl 6及CD10單獨(dú)陽(yáng)性）、而MUM1陰性者劃為生發(fā)中心細(xì)胞來(lái)源（GBC），CD10和Bcl6陰性（或Bcl6陽(yáng)性）、而MUM1陽(yáng)性者劃為活化后細(xì)胞來(lái)源（ABC）。1.2  方法   1.2.1  常規(guī)蘇木素伊紅染色 按常用病

11、理技術(shù)操作規(guī)范進(jìn)行。切片、脫蠟、梯度酒精下行入水、蘇木素染色、分化、伊紅染色、脫水、透明封片。1.2.2  免疫組織化學(xué)染色 采用SP三步法，以Tris乙二胺四乙酸（EDTA）（pH 9.0）或枸掾酸（pH 6.0）為修復(fù)液，進(jìn)行高壓熱修復(fù)。DAB顯色，用PBS液代替一抗作為空白對(duì)照。全部病例都標(biāo)記CD20、CD3、CD10、MUM1、Bcl6和Bcl2。所用一抗Bcl6購(gòu)自北京中杉金橋公司，其余均為DAKO產(chǎn)品?？贵w稀釋度CD10為180，Bcl6為150，其余均為1150，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限公司。免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷：CD20、CD10、CD3陽(yáng)性信

12、號(hào)定位于細(xì)胞膜，Bcl6、MUM1陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，Bcl2陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞漿。以Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于腫瘤細(xì)胞的20%為陽(yáng)性。1.2.3  隨訪 主要采用電話隨訪、信訪或到病人家中探訪，以病人診斷之日為隨訪開始時(shí)間，以2009年7月18日為隨訪結(jié)束時(shí)間。貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)  34卷   6期裴媛媛等  Bcl2表達(dá)對(duì)不同細(xì)胞來(lái)源的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理特征和預(yù)后的影響1.2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析  應(yīng)用SPSS 11.5軟件包進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料均采用2檢驗(yàn)，生存分析采用KaplanMeier方法繪制生存曲線，生

13、存曲線的比較采用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)（Log Rank test），以P值0.05為差異有顯著性。         2  結(jié)果2.1  臨床病理資料   180例B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤中，42例符合診斷標(biāo)準(zhǔn)、具有相對(duì)完整的臨床病理資料的病例被納入研究。42例DLBCL中，男27例，女15例，男女之比為1.8:1, 發(fā)病年齡1691歲，中位發(fā)病年齡59.5歲。原發(fā)于淋巴結(jié)內(nèi)15例，原發(fā)于結(jié)外27例。臨床分期I期4例，II期8例，III期20例，IV期10例。27例原發(fā)于淋巴結(jié)外的DLBC

14、L中6例有淋巴結(jié)累及。光學(xué)顯微鏡下觀察DLBCL腫瘤細(xì)胞彌漫分布，原有的組織結(jié)構(gòu)破壞，腫瘤細(xì)胞為中等或大細(xì)胞，細(xì)胞圓形或類圓形，細(xì)胞核為泡狀核、染色質(zhì)細(xì)膩、見多個(gè)貼近核膜的小核仁或中位的大核仁。腫瘤細(xì)胞免疫表型為：全部病例CD20陽(yáng)性及C3陰性， 17例CD10陽(yáng)性，23例Bcl6陽(yáng)性，25例MUM1陽(yáng)性。2.2  Bcl2表達(dá)與DLBCL臨床病理特征   42例DLBCL中，31例不同程度地表達(dá)Bcl2(31/42, 73.8%)(圖1)，6例出現(xiàn)淋巴結(jié)累及的結(jié)外DLBCL中5例表達(dá)Bcl2。Bcl2表達(dá)與DLBCL部分臨床病理特征的關(guān)系見表1。表1 

15、 Bcl2表達(dá)與DLBCL臨床病理特征的關(guān)系（略）2.3  隨訪結(jié)果     42例DLBCL中有26例獲隨訪資料，獲訪率61.9%，隨訪時(shí)間237月。26例獲訪病例中，存活16例，復(fù)發(fā)3例，死亡10例，均死于DLBCL，中位生存時(shí)間17月。10例死亡病例中，來(lái)源于GBC細(xì)胞和ABC細(xì)胞的DLBCL各占5例，9例Bcl2陽(yáng)性，1例Bcl2陰性。3例復(fù)發(fā)病例中，2例來(lái)源于ABC細(xì)胞，1例來(lái)源于GBC細(xì)胞，3例均為Bcl2陽(yáng)性。26例中7例接受手術(shù)治療，其中2例術(shù)后輔以化療，6例接受了單純CHOP方案化療，2例接受CHOP方案化療和放療，5例接受中藥治療，1

16、例接受骨髓移植，5例放棄治療。根據(jù)DLBCL病例的Bcl2表達(dá)和細(xì)胞來(lái)源情況繪制生存率曲線并進(jìn)行生存分析，結(jié)果見圖2、3。3  討論   DLBCL是發(fā)病率很高的侵襲性淋巴瘤。在DLBCL的十幾個(gè)亞類型中，非特指的DLBCL是最多見的亞類。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)圖譜，非特指DLBCL被分成了GBC樣和ABC樣DLBCL。目前主要通過免疫組織化學(xué)標(biāo)記來(lái)進(jìn)行劃分，常用的抗體為CD10、Bcl6和MUM1。CD10和Bcl6是GBC樣的標(biāo)記，MUM1則是ABC樣B細(xì)胞的主要標(biāo)記。研究認(rèn)為，ABC樣DLBCL的臨床過程和預(yù)后較GBC樣DLBCL差，GBC有50%以上的5年

17、生存率，是低臨床風(fēng)險(xiǎn)的DLBCL，而ABC樣DLBCL病人僅有不到20%的5年生存率，具有較晚的臨床分期，原發(fā)于結(jié)外者具有較高的淋巴結(jié)累及率，是具有高臨床風(fēng)險(xiǎn)的DLBCL57。Bcl2是凋亡抑制基因，在濾泡性淋巴瘤中由于t(14;18) 染色體易位的出現(xiàn)，使18號(hào)染色體上的Bcl2基因易位到免疫球蛋白重鏈基因的強(qiáng)啟動(dòng)子下，導(dǎo)致Bcl2基因的高表達(dá)。在研究和工作中發(fā)現(xiàn)，Bcl2在一些惰性的小B細(xì)胞淋巴瘤和DLBCL中都有不同程度的表達(dá)，有報(bào)道認(rèn)為Bcl2是DLBCL治療中相關(guān)的耐藥基因。目前，Bcl2表達(dá)對(duì)不同類型非特指DLBCL的影響很少見到報(bào)道，此次研究發(fā)現(xiàn)，在DLBCL中具有較高的Bcl2

18、表達(dá)，表達(dá)率為73.8%(31/42)，在GBC樣和ABC樣DLBCL病例之間，Bcl2的表達(dá)沒有明顯差異（GBC樣為14/17，ABC樣為17/25）。Bcl2表達(dá)對(duì)DLBCL的發(fā)病年齡、性別及原發(fā)部位等沒有明顯影響，但Bcl2表達(dá)和不表達(dá)病例之間臨床分期有明顯差別，Bcl2陽(yáng)性的DLBCL臨床分期明顯晚于Bcl2陰性的DLBCL，原發(fā)于結(jié)外的DLBCL淋巴結(jié)累及者大多數(shù)是Bcl2陽(yáng)性表達(dá)病例（5/6），說明Bcl2表達(dá)對(duì)DLBCL的臨床過程有明顯影響，這和文獻(xiàn)報(bào)道一致。此次研究還發(fā)現(xiàn)，ABC樣DLBCL病例多于GBC樣DLBCL病例。生存分析發(fā)現(xiàn)，GBC樣DLBCL的中位生存時(shí)間是28月，

19、ABC樣DLBCL中位生存時(shí)間是24月，兩組病人的生存率曲線比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），Bcl2陽(yáng)性表達(dá)的DLBCL中位生存時(shí)間為36個(gè)月，而Bcl2陰性表達(dá)病例的中位生存時(shí)間為22月，兩組病人的生存率曲線比較亦未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P=0.06，提示Bcl2陽(yáng)性表達(dá)病例的生存狀況有差于陰性表達(dá)病例的趨勢(shì)，生存分析結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道不盡一致，這可能與本次獲訪病例數(shù)偏少和隨訪時(shí)間短有關(guān)系，DLBCL病例的中位生存時(shí)間較短可能與研究病例中ABC樣DLBCL病例較多，而GBC樣DLBCL病例較少有關(guān)，也可能與貴州山區(qū)經(jīng)濟(jì)貧困和醫(yī)療條件落后有關(guān)系，這有待于擴(kuò)大研究范圍、延長(zhǎng)隨訪時(shí)間進(jìn)行深入的研究?！緟⒖嘉?/p>

20、獻(xiàn)】  1Sweredlow SH, Campo E，Harris NL, et al. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues M4th Edition, IARC Press, 2008: 214-217, 233-237.施姍姍，胡長(zhǎng)路，余元?jiǎng)?等. Bcl2IgH和IgH基因重排與非霍奇金淋巴瘤診斷和化療效果的相關(guān)性研究J.臨床腫瘤學(xué)雜志,2009 (1):55-58蔣會(huì)勇，李慧靈，胡海,等. 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl2基因擴(kuò)增的檢測(cè)J. 中華病理學(xué)雜志，2007（2）：84-89.陳天明.現(xiàn)代病理診斷規(guī)范與操作技術(shù)M.2版.北京：中國(guó)科學(xué)文化出版社，2005:304-325Hans CP, Weisenburger DD, Greiner TC, et al. Confirmation of the moleular classification of diffuse large B cell lymp