爬山虎葉中黃酮類化合物提取條件初探與含量測定畢業(yè)論文

1、 . . . 楚 雄 師 學(xué) 院本 科 生 畢 業(yè) 論 文 題 目：爬山虎葉中黃酮類化合物提取條件初探與含量測定 專 業(yè)： 科 學(xué) 教 育 學(xué) 號： 學(xué)生： 國 杰 指導(dǎo)教師： 宋 建 梅 職稱： 副 教 授 論文字?jǐn)?shù)： 4877字 完成日期 ： 2011 年 5 月教 務(wù) 處 印 制目錄摘要I關(guān)鍵詞IAbstractIIKey wordsII前言11實(shí)驗(yàn)部分21.1原料、試劑與儀器21.1.1原料21.1.2試劑21.1.3儀器21.2實(shí)驗(yàn)部分21.2.1原料處理21.2.2 黃酮類化合物的提取21.2.3 定性鑒定21.2.4 0.2mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制21.2.5 最大吸收波長的

2、選擇21.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制31.2.7 黃酮含量的測定31.3 單因素實(shí)驗(yàn)31.3.1 乙醇濃度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響31.3.2 回流時(shí)間對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響31.3.3 物料比對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響31.3.4 提取溫度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響31.4 正交實(shí)驗(yàn)32結(jié)果與分析32.1 定性檢驗(yàn)結(jié)果42.2 最大吸收波長的選擇結(jié)果42.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果與分析與黃酮含量計(jì)算公式42.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果與分析42.3.2 黃酮含量計(jì)算公式52.4 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析52.4.1 乙醇濃度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響52.

3、4.2 回流時(shí)間對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響52.4.3 料液比對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響62.4.4 提取溫度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響62.5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析63結(jié)論7參考文獻(xiàn)8致99 / 13爬山虎葉中黃酮類化合物提取條件初探與含量測定摘要：采用乙醇作為溶劑，用回流法從爬山虎葉中提取黃酮類化合物，初步探究了乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間、料液比四個(gè)因素對爬山虎葉中黃酮類化合物提取的影響，并進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)。采用顯色法進(jìn)行定性檢驗(yàn)，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對照品進(jìn)行含量測定。結(jié)果顯示，提取液中含黃酮類化合物，最優(yōu)提取條件為：提取溫度為80、料液比為1:20、乙醇濃度為75%、提取時(shí)

4、間為3.0h，此時(shí)，測得黃酮含量為1.766%。關(guān)鍵詞：回流法；爬山虎葉；黃酮類化合物；定性檢驗(yàn)；提取條件；含量測定。The total flavonoid withdraws condition preliminary study and content measurement in the tiger leafAbstract:Using ethanol as solvent, From ivy leaf with reflux method extracting flavonoids compounds, Preliminary explored ethanol concentratio

5、n, extracting temperature, extraction time, material than four factors on the ivy leaf extract in the influence of flavonoid compounds, and the orthogonal experiment. Using qualitative colour-display method, rutin standard product inspection on ethanol-water content determination. The results show,

6、extract contains flavonoids, when extraction temperature for 80 , than for material liquid 1:20, ethanol concentration of 75%, extracting time for 3.0 h, flavonoids content is 1.766%.Key words:Reflux method; Climb a mountain a tiger leaf; Flavonoid compound; Qualitative analysis of content; Qualitat

7、ive inspection; Extraction conditions;Determination of total flavonoids.朗讀顯示對應(yīng)的拉丁字符的拼音爬山虎葉中黃酮類化合物提取條件初探與含量測定前言黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物中，是許多中草藥的有效成分。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病 、抗炎鎮(zhèn)痛等作用1。從中草藥中提取分離黃酮類化合物的工作開展得較為廣泛，國主要是從銀杏葉和大豆中提取黃酮類化合物，而國外對黃酮的提取原料圍較大，除了銀杏葉和大豆外，還可以從山楂葉、荷葉、芹菜葉等材料中提取黃酮類化合物。近年來，國也開展了這方面的工作，有不少科研人

8、員做了這方面的研究和報(bào)道。將大量的廢棄物作為再生資源，在減少資源浪費(fèi)的同時(shí)，降低了黃酮的生產(chǎn)成本，對于黃酮的資源開發(fā)有著十分重要的意義2。爬山虎又名小紅藤、爬樹龍、大血藤，為葡萄科、爬山虎屬植物，具有通經(jīng)活絡(luò)，祛風(fēng)除濕，解毒的作用3。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，爬山虎中含有大量的黃酮類化合物，其中葉的含量最高4。因此，探討研究爬山虎葉中總黃酮的提取條件，提高這一植物資源的利用率，為其開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和指導(dǎo)，具有重要意義。據(jù)所查資料，對爬山虎中黃酮類化合物提取條件的研究未有報(bào)道。所以，本課題以爬山虎葉為原料，乙醇作為溶劑，采用回流法5提取爬山虎葉中的黃酮類化合物，對其進(jìn)行定性檢驗(yàn)6，從料液比、提取液乙醇的體積分

9、數(shù)、回流時(shí)間、回流溫度四個(gè)方面探究了提取條件，并以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對照品，用分光光度計(jì)測定提取液的吸光度，進(jìn)而計(jì)算黃酮類化合物的含量。1實(shí)驗(yàn)部分1.1原料、試劑與儀器1.1.1原料：三葉爬山虎（采于師學(xué)院）1.1.2試劑：無水乙醇（AR） 濃鹽酸(AR) 濃氨水(AR) 蘆?。?biāo)準(zhǔn)品） 亞硝酸鈉(AR) 氫氧化鈉(AR) 硝酸鋁(AR) 三氯化鋁(AR) 鎂粉(AR)1.1.3儀器：722型光柵分光光度計(jì)（青華科技儀器） 恒溫水浴鍋（金壇市自動化儀器廠） 電子天平（奧豪斯儀器） 索氏提取器1.2實(shí)驗(yàn)部分1.2.1原料處理將爬山虎葉洗凈后，置于陰涼處晾干，粉碎備用。1.2.2 黃酮類化合物的提取稱取3

10、.0g粉碎后的爬山虎葉粉末，用濾紙包好，置于索氏提取器中，用一定體積、一定濃度的乙醇溶液，在一定溫度下，回流提取一定時(shí)間，提取液用乙醚脫色后，蒸發(fā)濃縮，待冷卻后，移入100mL容量瓶中，洗滌液一并移入，用相應(yīng)濃度的乙醇稀釋至100mL，搖勻，得黃酮提取液。每個(gè)因素下平行試驗(yàn)三次。1.2.3 定性鑒定鋁鹽反應(yīng)：取提取液1mL于試管中，加幾滴硝酸鋁溶液，振蕩。若溶液呈黃色，說明含有黃酮。氫氧化鈉反應(yīng)：取提取液1mL于試管，加氫氧化鈉溶液，振蕩。若溶液呈亮黃色，說明含黃酮。鐵離子反應(yīng)：取提取液1mL于試管中，加鐵離子溶液，振蕩。若溶液呈墨綠色，說明含黃酮。濃氨水反應(yīng)：取提取液1mL于試管中，加幾滴濃

11、氨水溶液，振蕩。若溶液呈黃色，說明含黃酮。鹽酸-鋅反應(yīng)：取提取液1mL于試管中，先加少量鋅粉，再加幾滴濃鹽酸溶液，微熱。若溶液呈橙黃色，說明含有黃酮。1.2.40.2mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制將蘆丁置于干燥潔凈的燒杯，于干燥箱中，在120下恒重1.5h，取出置于干燥器中冷卻，冷卻后準(zhǔn)確稱取0.0200g蘆丁置于燒杯中，用90%的乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻備用。1.2.5 最大吸收波長的選擇準(zhǔn)確移取1.00mL提取液于10mL比色管中，加入0.30mL 5%亞硝酸鈉溶液，放置6分鐘后，加入0.30mL10%硝酸鋁溶液，放置6分鐘后，加入4.0mL4%氫氧化鈉溶液，用95%乙醇

12、溶液稀釋至刻度，再放置10分鐘，以試劑為參比，在430550nm波長圍測定吸光度。1.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密移取0.2mg/mL蘆丁對照液0.20，0.40，0.60，0.80mL于10mL比色管中，加入0.30mL5%亞硝酸鈉溶液，放置6分鐘，加入0.30mL10%硝酸鋁溶液，放置6分鐘，加入4.0mL4%氫氧化鈉溶液，用95%乙醇溶液稀釋至刻度，再放置10分鐘，以試劑為參比，在一定波長下分別測吸光度。1.2.7 黃酮含量的測定準(zhǔn)確移取1.00mL稀釋后的提取液于10mL比色管中，加入0.30mL5%亞硝酸鈉溶液，放置6分鐘后，加入0.30mL10%硝酸鋁溶液，放置6分鐘后，加入4m

13、L4%氫氧化鈉溶液，用相應(yīng)濃度的乙醇溶液稀釋至刻度，再放置10分鐘，以試劑為參比，在一定波長下測定吸光度，平行測定三次，結(jié)果取平均值，并計(jì)算含量。1.3 單因素實(shí)驗(yàn)1.3.1 乙醇濃度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響按照1.2.2所述實(shí)驗(yàn)方法，分別用95%，85%，80%，75%，70%的乙醇為提取劑，回流提取爬山虎葉中的黃酮類化合物，測定黃酮含量，以確定較適宜的乙醇濃度。1.3.2 回流時(shí)間對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響按照1.2.2所述試驗(yàn)方法，用1.3.1的所得體積分?jǐn)?shù)的乙醇，分別回流提取1.0h，1.5h，2.0h，2.5h，3.0h，3.5h，測定黃酮含量，以確定較適宜的回流時(shí)

14、間。1.3.3 物料比對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響按照1.2.2所述試驗(yàn)方法，用1.3.1和1.3.2所得的乙醇體積分?jǐn)?shù)和回流時(shí)間，分別按料液比（g/mL）1:10，1:15，1:20，1:25，1:30，在80下，回流提取爬山虎葉中的黃酮類化合物，測定黃酮含量，以確定較適宜的料液比。1.3.4 提取溫度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響按照1.2.2所述試驗(yàn)方法，用1.3.1、1.3.2和1.3.3所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別在70，75，80，85，90下，回流提取爬山虎葉中的黃酮類化合物，測定黃酮含量，以確定較適宜的提取溫度。1.4 正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，找出最佳提取條件。2結(jié)

15、果與分析2.1 定性檢驗(yàn)結(jié)果提取液定性檢驗(yàn)結(jié)果如下：表2-1 黃酮類化合物的定性鑒定試劑Al(NO3)3NaOHFe3+濃氨水HCl-Zn現(xiàn)象黃色亮黃色墨綠色黃色橙紅色通過5種顯色反應(yīng)，提取液顯色均與黃酮類化合物顯色一樣，說明提取液中的提取物含黃酮類化合物。2.2 最大吸收波長的選擇結(jié)果按實(shí)驗(yàn)1.2.5所得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，在420550nm圍的吸光度如圖2-1所示：圖2-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度與波長關(guān)系圖由圖2-1可知，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在500nm處有最大吸收峰，故選擇500nm為最大吸收波長。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果與分析與黃酮含量計(jì)算公式2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果與分析以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為

16、橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖2-2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蘆丁含量在00.05mg/mL圍與吸光度呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=-0.00676+11.07714x，R2=0.99977。2.3.2 黃酮含量計(jì)算公式CV1總黃酮含量= 10010-3100%V2 V1=10mL V2=1mL C測量液中黃酮的濃度圖2-2 吸光度與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液濃度的關(guān)系2.4 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.4.1 乙醇濃度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響據(jù)1.3.1，改變乙醇濃度，所得提取液的吸光度與黃酮含量如下：表2-2 乙醇濃度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響乙醇濃度（%）7075808590吸光度

17、黃酮含量（%）0.4931.5050.5081.7660.6271.9070.6191.8330.5911.799由表2-2可知，隨著乙醇濃度的增大，吸光度不斷增大，當(dāng)乙醇濃度為80%時(shí)吸光度達(dá)到最大，隨后依次減小，故較適宜乙醇濃度為80%。2.4.2 回流時(shí)間對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響據(jù)1.3.2，在不同回流時(shí)間下，所得提取液的吸光度和黃酮含量見表2-3。由表2-3可知，在1.03.0h圍，黃酮含量隨著回流時(shí)間的增加不斷的增大；在3.03.5h圍，黃酮含量隨回流時(shí)間的增加而逐漸減?。换亓鲿r(shí)間為3.0h時(shí)，黃酮含量最高。因此，3.0h為較適宜回流時(shí)間。表2-3 回流時(shí)間對提取爬山虎葉中

18、黃酮類化合物的影響回流時(shí)間（h）1.01.52.02.53.03.5吸光度黃酮含量（%）0.4911.4980.5681.7300.5971.8170.6221.8950.6271.9070.6251.9012.4.3 料液比對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響據(jù)1.3.3，在不同乙醇體積下提取爬山虎葉中黃酮類化合物，并計(jì)算其含量，所得結(jié)果如下：表2-4 料液比對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響料液比（g/mL）1:101:151:201:251:30吸光度黃酮含量（%）0.3951.2130.4721.4400.6271.9070.6151.8720.5921.802由表2-4可知，隨著料液比

19、的增大，黃酮含量增大，到1:20時(shí)達(dá)到最大，1:20以后隨著料液比的增大，黃酮含量逐漸減小，故較適宜的物料比為1:20。2.4.4 提取溫度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響據(jù)1.3.4，固定其它條件，改變溫度，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2-5。表2-5 提取溫度對提取爬山虎葉中黃酮類化合物的影響溫度（）7075808590吸光度黃酮含量（%）0.4521.3810.5871.7870.6271.9070.6151.8710.6031.835由表2-5可知，在7080之間，黃酮含量隨著溫度的升高而增加，而在8090之間，黃酮含量隨著溫度的升高而降低，因此溫度宜控制在80。2.5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析根據(jù)2

20、.4單因素的試驗(yàn)結(jié)果，以提取的黃酮類化合物含量為考察指標(biāo)，選定四因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。因素水平見表2-6，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2-7。從表2-7可以看出，本實(shí)驗(yàn)中A、B、C、D四個(gè)因素的主次關(guān)系是CA/DB，即C（提取溫度）為最重要的因素，其次是A（提取液濃度）或D（料液比），B（提取時(shí)間）影響最小。由正交表可以看出，以黃酮類化合物含量為目標(biāo)，最優(yōu)試驗(yàn)條件的組合是A1B2C2D2，即提取濃度為提75%，提取時(shí)間為3h，提取溫度為80，料液比為1:20，此條件下測得爬山虎葉中黃酮類化合物的含量為1.766%。表2-6 因素水平表水平A提取液濃度（%）B回流時(shí)間（h）C回流溫度（）D料液比1752.5751:152803.0801:203853.5851:25表2-7 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)序號因素黃酮類化合物的含量（%）A提取液濃度B提取時(shí)間C提取溫度D料液比111 1 11.524212 221.766313331.735421231.748522311.763623121.754731321.732832131.698933211.725K15.0255.0044.9765.012K25.2655.2