酸性染料比色法測(cè)定虎舌紅中總生物堿的含量

1、    酸性染料比色法測(cè)定虎舌紅中總生物堿的含量【摘要】 目的建立測(cè)定虎舌紅總生物堿的含量測(cè)定 方法 。方法采用溶劑萃取酸性染料比色法測(cè)定，以去氫飛廉堿（C16H22N4O2）為對(duì)照品，溴甲酚綠為酸性染料，用氯仿萃取，檢測(cè)波長(zhǎng)418 nm。結(jié)果去氫飛廉堿在0.7214.02 mg/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=19.254X-1.6247,r=0.999 5(n=5)，平均回收率為101.65%，RSD為0.75%（n=5）。結(jié)論所建立方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、選擇性強(qiáng)。 【關(guān)鍵詞】 虎舌紅總生物堿； 酸性染料比色法； 去氫飛廉堿Abstract

2、：ObjectiveTo establish a method for quantitative determination of the total alkaloids in the root of Ardisia mamillata.Methods The  content was determined by solvent extraction and acid dye colorimetiy, with Acanthoine Ruscope-ine （C16H22N4O2） as a control criterion and bromocresol green a

3、s the acid dye, and the wavelength was at 418 nm. ResultsAcanthoine Ruscope-ine showed a good linear relationship with absorbance  when  its concentration was within 0.7214.02 mg/L. The regression equation established was Y=19.254X-1.624 7,r=0.999 5(n=5). The recovery of Acanthoi

4、ne Ruscope-ine was 101.65%,RSD was 0.75% (n=5).ConclusionThis method is easy, accurate and specific.Key words：Ardisia mamillata total Alkaloid; Acid Dye Colorimetiy; Acanthoine Ruscope-ine 虎舌紅Ardisia mamillata，又名紅毛氈、寶鼎紅、天仙紅衣、毛涼傘、金絲紅珠等，為紫金?？谱辖鹋?。原產(chǎn)我國，分布于福建、廣西、廣東、云南、四川、貴州、江西等地?；⑸嗉t葉片紫紅色，果實(shí)鮮紅色，葉果并美，是室內(nèi)觀

5、葉植物的首選佳品1。云南中草藥選中記載虎舌紅全草可入藥，有清熱利濕、活血止血、去腐生肌等功效，對(duì)跌打損傷、風(fēng)濕骨痛、肺癆咳嗽、疳積肝炎均有療效2，生物堿是其主要活性成分3。本文以虎舌紅中的主要成分總生物堿為指標(biāo)，建立虎舌紅總生物堿的含量測(cè)定方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。1 器材752C紫外-可見分光光度計(jì)(上海第三 分析 析儀器廠)；PHS-2型酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)；FA-1004 電子 天平(上海精密 科學(xué) 儀器有限公司)。 實(shí)驗(yàn)所用虎舌紅全草采于封開黑石頂森林保護(hù)區(qū)，經(jīng)本校植物 研究 室鑒定為紫金?？?Myrsinacese)、紫金牛屬（Ardisia）虎舌紅（A.mamillata）。去氫飛廉堿

6、對(duì)照品（ 中國 藥品生物制品檢定所）；溴甲酚綠（北京化工廠）；其它試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 供試液制備2.1.1 供試品溶液的配制 稱取虎舌紅粉末200 g，用10倍量pH=3的75%乙醇分3次加熱回流提取，3 h/次，得醇取液，60下減壓濃縮得浸膏；用2%鹽酸溶解，過濾除去不溶性非堿性脂溶性雜質(zhì)，用乙醚、氯仿洗滌3次除去親脂性非生物堿類成分，然后加濃氨水調(diào)pH值為67，過濾除去鞣質(zhì)類雜質(zhì)沉淀，再用氨水調(diào)pH至1011后，用氯仿萃取，萃取液置50 ml容量瓶中，用1 mol·L-1醋酸鈉調(diào)至pH值為5.5，搖勻，用pH 5.5醋酸-醋酸鈉緩沖液稀釋至刻度，即得供試品溶液。

7、2.1.2 對(duì)照品溶液的配制精密稱取去氫飛廉堿20 mg，置50 ml容量瓶中，加pH 5.5醋酸-醋酸鈉緩沖液溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品貯備液。精密吸取1 ml貯備液置50 ml容量瓶中，加上述緩沖液稀釋至刻度，得對(duì)照品溶液。2.1.3 酸性染料、緩沖溶液的配制酸性染料選擇常用的溴甲酚綠或溴麝香草酚藍(lán)，其溶液均按中國藥典方法4配制。pH 4.5，pH 5.0，pH 5.5，pH 6.0醋酸-醋酸鈉緩沖液均按 文獻(xiàn) 方法配制。2.2 實(shí)驗(yàn)條件的選擇2.2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定取對(duì)照品溶液、供試品溶液20l置25 ml具塞試管中，精密加入pH 5.5醋酸-醋酸鈉緩沖液3 ml，溴甲酚綠染料2 ml

8、，氯仿10 ml，密塞，劇烈振搖2 min，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置2 h，分取氯仿層，于200900 nm之間進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液、虎舌紅供試品提取液在418 nm處吸收最強(qiáng)，最終選定418 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，吸收光譜見圖1。a虎舌紅供試品溶液 b對(duì)照品溶液圖1 供試品溶液、對(duì)照品溶液波長(zhǎng)掃描圖（略）2.2.2 酸性染料用量的選擇精密吸取對(duì)照品溶液1 ml，分別精密加入0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 mg·ml-1的溴甲酚綠溶液2 ml，其余同樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，酸性染料達(dá)0.9 mg·ml-1時(shí)有最大吸收。2.2.3 緩沖液pH值的

9、選擇取0.1 mol·L-1醋酸鈉溶液與0.1 mol·L-1醋酸溶液配制成pH值分別為4.5，5.0，5.5，6.0，6.5的緩沖液；精密吸取2 ml對(duì)照品溶液，分別加入不同pH值的緩沖液3 ml及其配制的溴甲酚綠溶液2 ml，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作。結(jié)果表明，當(dāng)緩沖液pH值為5.5時(shí)，吸光度最大，即靈敏度最高。2.3 線性范圍的考察精密吸取對(duì)照品溶液（2.0 g/L）0.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0，35.0，40.0，45.0，50.0 l分別置于25 ml具塞試管中，分別加入pH 5.5醋酸-醋酸鈉緩沖液3 ml，酸性染料溶液2 ml，氯

10、仿10 ml，密塞，劇烈振搖2 min，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，靜置2 h，分取氯仿層于418 nm測(cè)定吸光度。以去氫飛廉堿對(duì)照品濃度對(duì)吸光度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=19.254X-1.6247，r=0.999 5（n=5）。結(jié)果表明，去氫飛廉堿在0.7214.02 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.4 精密度考察精密吸取同一供試品溶液5份，每份25 l，按照2.3項(xiàng)下的 方法 進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度， 計(jì)算 樣品含量，RSD為1.68%（n=5）。表明該方法精密度良好。2.5 重現(xiàn)性考察取同一批供試樣品，按2.1.1項(xiàng)下配制成供試品溶液，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，得以去氫飛廉堿計(jì)的總生物堿平均含

11、量為16.61%，RSD為2.51%。表明該方法重現(xiàn)性良好。2.6 樣品穩(wěn)定性考察精密吸取供試品溶液25 l，分別在制備后1，2，4，6，8，10，12，24，48 h時(shí)按照2.3項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，得總生物堿平均含量為16.46%，RSD為1.70%，結(jié)果表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。2.7 樣品含量測(cè)定精密稱取3批樣品（自制），按2.1.1項(xiàng)方法制備，再分別吸取25 l，按照2.3項(xiàng)的方法進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算出虎舌紅（以去氫飛廉堿計(jì)）總生物堿含量為16.45%，結(jié)果見表1。表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）2.8 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱定虎舌紅粉末0.1 g（相當(dāng)于虎舌紅總

12、生物堿1.681 mg），置于10 ml容量瓶中，用0.1 moL/L鹽酸溶解并定容制備成樣品溶液，取樣品溶液5份，每份10 l，分別加入濃度為2.032 g/L對(duì)照品溶液30 l，按2.3項(xiàng)方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算平均回收率為101.65%，RSD為0.75%。結(jié)果見表2。3 討論 中國 藥典1995版中生物堿的含量測(cè)定采用氨水堿化后氯仿提取的方法，因虎舌紅總生物堿有一定的水溶性，用氯仿難以提取完全，使測(cè)定結(jié)果偏低。而酸性染料分光光度法使虎舌紅總生物堿在微酸性條件下，與溴甲酚綠絡(luò)合成可被氯仿萃取的有色離子對(duì)，在418 nm處有最大吸收。該方法專屬性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確5。表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

13、（略）虎舌紅總堿在酸性條件下游離成生物堿后，若用酸堿滴定法，則有測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)、取樣量大、操作步驟多、氯仿用量大、滴定終點(diǎn)不易掌握等缺點(diǎn)；而酸性染料比色法簡(jiǎn)便、易操作，準(zhǔn)確度高。在實(shí)驗(yàn)過程中，樣品加入溴甲酚綠緩沖液及氯仿后，要充分振搖2 min，以保證生物堿與溴甲酚綠形成的離子對(duì)充分轉(zhuǎn)移到氯仿中，使萃取完全。在樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，樣品在被堿化12 h內(nèi)含量基本沒有改變，24 h時(shí)開始有下降，48 h時(shí)含量下降10%，因此進(jìn)行測(cè)定時(shí)應(yīng)在樣品處理12 h內(nèi)。實(shí)驗(yàn)表明，使用酸性染料比色法測(cè)定，具有良好的線性關(guān)系，且方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于虎舌紅總生物堿的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。【 參考  文獻(xiàn) 】1 盧其能.虎舌紅的生物學(xué)特性與組織培養(yǎng) 研究 J.江西林業(yè) 科技 ,2002，1:5.2