糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血漿血管內(nèi)皮生長因子檢測分析

1、    糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血漿血管內(nèi)皮生長因子檢測分析        摘要目的:檢測糖尿病患者血漿血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量并探討它與糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobinc,GHbAlc)、微量白蛋白尿等的關(guān)系及在糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:收集74例型糖尿病患者和18例正常人的血漿標(biāo)本,檢測血中VEGF、GHb

2、Alc、FBS和尿中微量白蛋白(microalbumin,ALB)、肌酐(Cr)尿微量白蛋白指數(shù)(urinary microalbumin excretion index,ALB/Cr,or A/C)等。結(jié)果:1.VEGF、ALB、A/C在對照組、無視網(wǎng)膜病變(non-diabetic retinopathy,NDR)組、背景型DR(background-DR,BDR)組中逐漸升高,BDR 組的VEGF比對照組顯著增高,增生型DR(proliferative-DR,PDR)組的ALB、A/C比NDR組顯著增高;2.正常人群檢測不到ALB(5mg/ml),糖尿病患者各組中能不同程度的檢出ALB,

3、甚至超出儀器能測出的最高值(300mg/ml),各組間的檢出率有顯著差異;3.VEGF與GHbAlc、ALB及A/C成正相關(guān),與年齡、病程、FBS、Cr等均無相關(guān)性。結(jié)論:VEGF在糖尿病微血管病變的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。關(guān)鍵詞糖尿病視網(wǎng)膜病;內(nèi)皮,血管;內(nèi)皮生長因子;白蛋白尿中分類號R 774.1 The measurement of plasma vascular endothelial growth factor in retinopathy diabeticHuang HoubinZhang KanglanZhang Shenglan(Dept.of Ophthalmology,th

4、e General Hospital of Jinan Command,PLA,250031)AbstractKey wordsDiabetic retinopathy;Endothelium,vascular;Endothelial growth factors;Albuminuria糖尿病患者常出現(xiàn)全身微循環(huán)障礙,眼部尤其是視網(wǎng)膜的微循環(huán)障礙表現(xiàn)為糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR),病變嚴(yán)重者常出現(xiàn)新生血管,成為糖尿病性失明的重要原因。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是新近確定的一種具有刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖及新生血管形成的生長因子,它與DR的關(guān)系正受到眼科學(xué)界的矚目

5、。我們檢測了型糖尿病患者血中VEGF和糖化血紅蛋白(GHbAlc)的含量及尿中微量白蛋白(ALB)、肌酐(Cr)的含量和尿微量白蛋白指數(shù)(urinary microalbumin excretion index,ALB/Cr,or A/C)的變化,觀察它們之間以及與DR的關(guān)系,以進(jìn)一步明確全身微循環(huán)代謝異常對DR發(fā)病的影響,揭示DR的可能發(fā)病機理,并為臨床診治DR提供一定的理論依據(jù)。1資料與方法1.1研究對象患者組:非胰島素依賴性糖尿病患者74例,男33例,女41例,2284歲,平均56.24歲,病程1周35年,平均6.34年,均由我院內(nèi)分泌科確診,診斷按1985年WHO標(biāo)準(zhǔn),DR診斷按198

6、5年全國眼底病協(xié)作組制定的標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)直接眼底鏡檢查和熒光素眼底血管造影結(jié)果將患者分為3組:無視網(wǎng)膜病變組(non-DR,NDR)33例,其中男16例,女17例,2284歲,平均50.24歲,病程2周8年,平均2.37年;背景型DR組(background-DR,BDR)29例,其中男10例,女19例,3082歲,平均61.10歲,病程1周至35年,平均7.74年;增生型DR組(proliferative-DR,PDR)12例,男7例,女5例,3471歲,平均59.78歲,病程1020年,平均13.90年。對照組:18例,男8例,女10例,2580歲,平均57.6歲,眼部及全身檢查正常。1.2方

7、法清晨靜息狀態(tài)下抽取空腹肘靜脈血3ml,置于含10%EDTA-2Na 30l和4萬IU/ml的抑肽酶40l試管中混勻,42000r/min離心10min,分離出血漿置20凍存待檢,收集血液的試管均無熱原和內(nèi)毒素。同期測量空腹血糖(fasting blood sugar,FBS),并采取尿液標(biāo)本測量ALB、Cr,記錄年齡、性別、病程等臨床資料。FBS用葡萄糖氧化酶法測定,GHbAlc及ALB、Cr用美國Bayer公司生產(chǎn)的專用藥盒并采用配套的DCA 2000分析儀由專人檢測。VEGF試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供,采用以抗體夾心ELISA法檢測,最小可測人VEGF30pg/ml,所有操作均

8、嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。b統(tǒng)計學(xué)處理在SPSS9.0軟件上進(jìn)行分析,經(jīng)正態(tài)性D檢驗,VEGF的資料呈對數(shù)正態(tài)分布,所有數(shù)據(jù)均經(jīng)對數(shù)變換后再進(jìn)行處理,用幾何均數(shù)(G)和四分位數(shù)間距(Q)表示;ALB、A/C等資料均不符合正態(tài)分布,因此,其結(jié)果用中位數(shù)(Md)和四分位數(shù)間距(Q)表示;其余呈正態(tài)分布的資料用±s表示。對所有資料進(jìn)行方差分析或非參數(shù)秩和檢驗并進(jìn)行相關(guān)分析。2結(jié)果2.1VEGF、ALB、A/C的含量在對照組、NDR、BDR組中逐漸升高,BDR組的VEGF比對照組顯著增高,PDR組的ALB、A/C比NDR組顯著增高,Cr、GHbAlc、FBS在糖尿病患者的各組間差異無顯著性,但

9、糖尿病患者的GHbAlc、FBS比正常對照組顯著增高,見表1。2.2微量白蛋白正常對照組尿中檢測不到(低于儀器能測出的最低值5mg/ml);在NDR組中8例(24.2%)尿ALB5mg/ml,1例(3.0%)高于儀器能測出的最高值(300mg/ml),呈顯性蛋白尿;BDR組中2例(6.9%)5mg/ml,3例(10.3%)300mg/ml;在PDR組中均檢測出有尿微量白蛋白,300mg/ml者3例(25.0%)。將上述百分率進(jìn)行2檢驗,2=10.11,P0.05。2.3在糖尿病患者中,VEGF的對數(shù)值與GHbAlc、ALB及A/C呈正相關(guān),(r=0.336,P0.05;r=0.492,P0.0

10、1;r=0.365,P0.05),lgVEGF與年齡、病程、FBS、Cr等無相關(guān)性(r分別為0.118,0.187,0.081,0.180)。表1各組患者VEGF、GHbAlc、ALB、Cr、A/C的比較組別nVEGF(/pg.ml-1)Alb(/pg.ml-1)Cr(c/mmol.ml-1)A/C(mg/mmol)GHbAlc(%)FBS(c/mmol.ml-1)GQMdQMdQ對照1887.452.5137.55.00-5.67±0.624.80±0.85NDR33105.165.0155.016.708.448.08.43±5.222.490.856.688

11、.40±0.82*11.14±4.38*BDR29134.5*61.0216.521.3511.093.56.14±4.127.811.7925.339.17±1.57*12.17±5.08*PDR12115.562.0155.047.7517.3165.05.10±4.5323.703.4093.989.10±1.85*,12.28±3.79* *P0.05*P0.01vs對照P0.05vsPDR組 3討論VEGF是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異的有絲裂肽,它能特異性地促使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、移行,并改變細(xì)胞外基質(zhì),以促使新生血

12、管生長。在DR、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、虹膜紅變和新生血管性青光眼、老年黃斑變性、脈絡(luò)膜新生血管等眼部病變及腫瘤的血管生長中起著重要的作用。VEGF還是維持正常器官生長發(fā)育,胚胎形成和組織創(chuàng)傷修復(fù)等的重要因子1,因此,在正常人的外周血中也存在一定量的VEGF。VEGF廣泛分布于機體內(nèi)的眼、腦、心(尤其是心肌細(xì)胞)、肺、腎、腎上腺、肝、脾、胃以及腹腔的巨噬細(xì)胞等許多組織和細(xì)胞中。糖尿病作為全身性疾病,其外周血中VEGF含量增高,是全身代謝紊亂的結(jié)果。長期高血糖可使體內(nèi)的許多蛋白質(zhì)包括白蛋白、晶狀體蛋白等發(fā)生非酶性糖化,使這些蛋白質(zhì)分子產(chǎn)生交聯(lián)與聚合。血紅蛋白和紅細(xì)胞膜蛋白的非酶糖化,改變了紅細(xì)胞膜的組

13、成與結(jié)構(gòu),使膜流動性減小及酶活性降低,影響紅細(xì)胞膜的生理功能和微循環(huán),影響血紅蛋白與氧的結(jié)合與交換;而膠原蛋白非酶糖化可使腎小球及微血管基底膜增厚,組織血管硬化,也影響血管內(nèi)外氧的交換,進(jìn)而導(dǎo)致廣泛缺氧,刺激VEGF分泌增多。Aiello2發(fā)現(xiàn),DR患者眼內(nèi)液中VEGF的濃度顯著增高,在尚未出現(xiàn)視網(wǎng)膜病變時,VEGF即已增加,在活動性PDR期達(dá)高峰,但在靜止性PDR,眼內(nèi)液中VEGF濃度又降低。本實驗也表明,在NDR期外周血中的VEGF即有增加的趨勢,至BDR期顯著增加,但PDR期較低。本實驗所收集的PDR患者例數(shù)較少,僅1例出現(xiàn)較嚴(yán)重的玻璃體出血,1例出現(xiàn)虹膜新生血管,可能與PDR期VEGF

14、值較低有關(guān)。VEGF增高不僅可促使DR的發(fā)生發(fā)展,而且在糖尿病引起的其它并發(fā)癥中也起著重要作用。ALB增多是糖尿病性腎病(diabetic nephropathy,DN)的早期征象,A/C是早期診斷DN的敏感指標(biāo)3。我們的研究表明,ALB、A/C隨DR病變的發(fā)展而逐漸升高,比NDR增高顯著,這與以往的報道一致4，5,說明DR和DN作為糖尿病性微血管病變的兩個主要部分,彼此之間有一定的相關(guān)性和平行性。有學(xué)者甚至認(rèn)為,尿A/C的異?？赡苁浅霈F(xiàn)PDR的預(yù)兆6，7。我們還發(fā)現(xiàn),VEGF與ALB及A/C呈正相關(guān),但與Cr無關(guān)。VEGF具有很強的血管通透作用,其作用是組胺的5000倍。因此,糖尿病時VEG

15、F增多可能使腎小球通透性增加,白蛋白滲出增多,引起腎小球性蛋白尿,對DR的發(fā)生發(fā)展也起著一定的促進(jìn)作用。由于VEGF是新生血管產(chǎn)生的必需因子,因此,目前學(xué)者們正從不同途徑尋求抑制VEGF的藥物以抑制新生血管的形成。本實驗提示:由于糖尿病引起了外周血中VEGF的變化并與一系列糖尿病并發(fā)癥有關(guān),因此,我們認(rèn)為,應(yīng)用VEGF抑制劑治療DR時,宜選用全身用藥方式或全身用藥聯(lián)合局部用藥,以降低全身血液循環(huán)中VEGF的濃度。全身用藥方法簡便,能通過血液循環(huán)到達(dá)眼球后節(jié),而局部點眼等方式藥物到達(dá)眼球后節(jié)的有效濃度難以保障,而且采用口服方式可長期全身給藥,便于糖尿病患者的長期治療。更重要的是,全身用藥可通過血

16、液循環(huán)抑制腎臟中VEGF的作用,對改善腎臟血液循環(huán)、減少蛋白滲出,促使DR好轉(zhuǎn)可能起重要作用。作者簡介：黃厚斌(1973-)男,江西于 都人,濟南軍區(qū)總醫(yī)院眼科醫(yī)師,主要從事玻璃體視網(wǎng)膜疾病的研究。黃厚斌(濟南軍區(qū)總醫(yī)院眼科,250031)張康蘭(濟南軍區(qū)總醫(yī)院眼科,250031)張勝蘭(濟南軍區(qū)總醫(yī)院眼科,250031)參考文獻(xiàn)1，Neufeld G,Cohen T,Gengrinovetch S,et al.Vascular endothelial growth factor (VEGF)and its receptors.JASEB,1999,13(1):9-222，Aiello LP,

17、Avery RL,Arrigg PG,et al.Vascular endothelial growth factor in ocular fluid of patients with diabetic retinopathy and other retinal disorders.N Engl J Med,1994,331(22):1480-14873，史虹莉.NIDDM患者中肥胖與早期腎臟病變的關(guān)系.上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,1995,22:3944，Martin P.Glomerular and tubular protein uria in type diabetic patient with and without retinopathy.Ann Clin Biochem,1992,29:2655，Skrha J.Albuminuria and NAG activity in a prospective study of type diabetes.Vnitr Lek,1993,39