腸道病毒EV71和柯薩奇病毒A16型(CA16)核酸檢測試劑盒

1、腸道病毒EV71和柯薩奇病毒A16型（CA16）核酸檢測試劑盒（RT-PCR-雙色熒光探針法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：腸道病毒EV71和柯薩奇病毒A16型（CA16）核酸檢測試劑盒（RT-PCR-雙色熒光探針法）英文名稱：Human Enterovirus 71（EV71）and Coxsackievirus A16 (CA16) Nucleotide Acid Detection Kit (RT-PCR double Fluorescence Taqman probes)【包裝規(guī)格】50人份/盒【用途】本試劑盒用于EV71和CA16的熒光RT-PCR 核酸檢測【主要組成成分】序號試劑盒組

2、成數(shù)量體積/人份1熒光RT-PCR反應(yīng)液625ll2逆轉(zhuǎn)錄酶25ll3Taq酶25ll4H2O 500ll5引物和探針150l3l【儲存條件及有效期】1） 試劑盒必須在冷凍條件下運輸2） 試劑盒保存：試劑盒需20C以下保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。3） 有效期：本試劑盒有效期12個月，請在有效期內(nèi)使用?！具m用儀器】全自動熒光PCR檢測儀，需含F(xiàn)AM和HEX通道檢測功能。【操作步驟】 1. 標本RNA提?。?可使用商業(yè)化試劑盒提取RNA,提取的RNA于-20以下保存，長期保存最好于-70條件下保存。 2. 反應(yīng)液的配置： 1)先將試劑解凍，從試劑盒中取出相應(yīng)的試劑，反應(yīng)液在室溫融化后，瞬時離心，按n+1

3、配置25l反應(yīng)體系（n=樣本數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照），每個測量反應(yīng)體系配置如下表： 內(nèi)容1份樣品的量n+1份樣品的量熒光RT-PCR反應(yīng)液ll (n+1)逆轉(zhuǎn)錄酶ll (n+1)Taq酶ll (n+1)引物和探針3l3l (n+1)H2O ll (n+1)2）將上述反應(yīng)液混勻離心后，按照每管20L分裝于各熒光PCR儀適用的PCR管中。3）加樣：將提取好的樣本RNA，分別加入上述分裝好的PCR反應(yīng)管中，模板量可根據(jù)樣本情況自行決定（臨床標本通常使用5ul模板量），不夠部分以水補足?？偡磻?yīng)體積25L。3.熒光RT-PCR循環(huán)條件設(shè)置程序循環(huán)數(shù)溫度反應(yīng)時間114230min21952min3

4、409510sec6035sec熒光檢測模式為FAM和HEX熒光4.對照設(shè)置（1）陰性對照：核酸提取時以滅菌雙蒸水代替標本。（2）陽性對照：陽性核酸作為模板RNA5.結(jié)果分析條件設(shè)定和結(jié)果判斷閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照擴增曲線的最高點，結(jié)果顯示陰性為準，或可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。Ct值無數(shù)值的標本為陰性樣本Ct值Ct值35.0的樣本建議重做。重做結(jié)果無數(shù)值者為陰性，否則為陽性。FAM熒光檢測陽性為CA16核酸陽性，HEX熒光檢測陽性為EV71核酸陽性?！咀⒁馐马棥?1. 實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按操作步驟執(zhí)行。 2. 整個實驗操作過程以及PCR實驗室的軟硬件設(shè)施應(yīng)符合衛(wèi)生部頒布臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法、臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范等法規(guī)的要求。 【聯(lián)系方式】