西洋參葉20s原人參二醇組皂苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心室重構(gòu)的影響

1、西洋參葉20s原人參二醇組皂苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心室重構(gòu)的影響                         作者：盧應(yīng) 董均樹 李秀江 劉婭 睢大員【摘要】 目的 研究西洋參葉20s原人參二醇組皂苷（PQDS）對(duì)大鼠急性心肌梗死晚期缺血再灌注后心室重構(gòu)的影響及機(jī)制。方法 大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支2 h后，松扎再灌注28 d制備急性心肌梗死晚期缺血再灌注后心室重

2、構(gòu)模型，同時(shí)應(yīng)用PQDS治療，給藥28 d后測(cè)定心室重構(gòu)大鼠心臟形態(tài)學(xué)參數(shù)，血漿血管緊張素(AT)及內(nèi)皮素（ET）水平。結(jié)果 與心室重構(gòu)模型組比較，PQDS 50、100 mg·kg-1·d-1均能顯著降低非梗死區(qū)室間隔厚度及左室腔面積/左室總面積比值（P<0.05及P<0.01），減少梗死區(qū)膠原沉積（P<0.05），降低非梗死區(qū)型及型膠原蛋白比值（P<0.05），并顯著降低血漿AT及ET水平（P<0.05及P<0.01）。兩組間各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著差異。 結(jié)論 PQDS能夠抑制大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死晚期缺血再灌注后的心室重構(gòu)，其機(jī)制可能與降低血漿

3、AT及ET水平，改善膠原重構(gòu)相關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 20s原人參二醇組皂苷；心肌梗死；晚期缺血再灌注；心室重構(gòu)急性心肌梗死，尤其大面積透壁性心肌梗死可產(chǎn)生心室重構(gòu)1。心室重構(gòu)與心臟破裂、室壁瘤形成、心臟擴(kuò)大、心力衰竭和心律失常，甚至死亡等嚴(yán)重并發(fā)癥有關(guān)2。西洋參葉20s原人參二醇組皂苷（PQDS）是由五加科人參屬植物西洋參（Panax quinquefolium L.）葉總皂苷分離純化而來(lái)。文獻(xiàn)表明3，4，PQDS對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗死具有明顯保護(hù)作用。但PQDS長(zhǎng)期給藥對(duì)心肌晚期缺血再灌注后心室重構(gòu)的影響尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大鼠急性心肌梗死后晚期缺血再灌注建立心室重構(gòu)模型，觀察心臟形態(tài)學(xué)指標(biāo)及血生化

4、指標(biāo)的變化，探討PQDS對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心室重構(gòu)的防治作用。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，體重250300 g，雌雄各半，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2 藥品與試劑 PQDS（含量不低于85%），由吉林大學(xué)化學(xué)學(xué)院天然藥物化學(xué)研究室提供，批號(hào)20040605；福辛普利鈉片，中美上海施貴寶制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20031006；大鼠抗型及型膠原多抗，由武漢博士德抗體公司提供；鏈霉菌抗生物素蛋白過(guò)氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒，由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供；內(nèi)皮素(ET)及血管緊張素(AT)放射免疫分析藥盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。1.3 心室重構(gòu)模型制

5、備 大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎參照文獻(xiàn)5方法稍加改進(jìn)。在乙醚吸入麻醉下，大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)。于大鼠左胸第34肋間開胸，暴露心臟，0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支（位于左冠狀動(dòng)脈起點(diǎn)下12 mm），連同直徑為1.2 mm的乳膠管一同結(jié)扎，結(jié)扎后將心臟送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，開胸時(shí)間不超過(guò)30 s。假手術(shù)組僅置縫線而不結(jié)扎冠脈。各組動(dòng)物在左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎后2 h重新吸入乙醚麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)，開胸，暴露心臟，將結(jié)扎線切斷后取出直徑為1.2 mm的乳膠管，迅速關(guān)胸。假手術(shù)組二次開胸后暴露心臟，迅速關(guān)胸。1.4 方法 造模前、造模后2 h及造模后3 d，行心電圖肢導(dǎo)+V1、V3、V5

6、導(dǎo)聯(lián)檢查，術(shù)后ST段較術(shù)前明顯抬高者，模型成功；采用文獻(xiàn)方法6，符合中到大范圍心梗標(biāo)準(zhǔn)者（即I及aVL 有Q波且>1 mV，或胸前導(dǎo)聯(lián)R波之和<10 mV）進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。假手術(shù)組（S）及急性心肌梗死后晚期再灌注組（L）：生理鹽水1 ml·kg-1·d-1，腹腔注射；陽(yáng)性藥對(duì)照組（F）：福辛普利鈉20 mg·kg-1·d-1，灌胃；PQDS低劑量組（P50）：PQDS 50 mg·kg-1·d-1，腹腔注射；PQDS高劑量組（P100）：PQDS 100 mg·kg-1·d-1，腹腔注射。于模型成立后立即開始

7、給藥，每日1次，連續(xù)28 d。常規(guī)飼養(yǎng)，于第28天以3%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈插管采血，按試劑盒方法測(cè)定血漿AT 及ET含量。迅速切除經(jīng)上述處理的大鼠心臟，浸入30 mmol/L的冰 KCl溶液中，使心臟停跳于舒張期，沿房室溝切除左右心房，在生理鹽水中洗去血液，濾紙吸干，稱重心室，并計(jì)算心室臟器系數(shù)（心室重/體重）。將標(biāo)本置于11%甲醛液中固定，石臘包埋，切片，HE染色、Masson染色及I型、型膠原免疫組化染色，光鏡下進(jìn)行病理分析。取梗死最為明顯的心肌層面病理切片，應(yīng)用HPIAS1000高清晰度病理圖文分析系統(tǒng)（同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)研制）。于室間隔中點(diǎn)測(cè)定非梗死區(qū)室間隔厚度

8、（NIST），同時(shí)測(cè)定左室腔面積（LVCA）及左室（包括左心及左右心交界區(qū)室間隔）總面積（TLAV）。測(cè)定梗死區(qū)及非梗死區(qū)心內(nèi)膜及心外膜周長(zhǎng)，以百分?jǐn)?shù)表示梗死面積（IS）：IS=（梗死區(qū)心內(nèi)膜周長(zhǎng)/左心室心內(nèi)膜周長(zhǎng)+梗死區(qū)心外膜周長(zhǎng)/左心室心外膜周長(zhǎng)）/2×100%7。測(cè)定非梗死區(qū)型及型膠原比。                         &#

9、160;   1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，采用兩組間比較t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2 結(jié)果2.1 PQDS對(duì)大鼠體重、心室重量及心臟系數(shù)的影響 與S組比較，L組心室重量及心臟系數(shù)明顯增加（P<0.01）。與L組比較，PQDS 50、100 mg/kg能明顯降低心室重量及心室臟器系數(shù)（P<0.05或P<0.01），其作用與陽(yáng)性藥物福辛普利相當(dāng)，見表1。2.2 PQDS對(duì)大鼠膠原重構(gòu)的影響 在Masson染色上，可見形成深綠色的膠原纖維。部分膠原間尚存活心肌。梗死區(qū)膠原含量占心室面積比（%），L組33.5±2.6，P50

10、組29.8±3.2，P100組30.4±2.4，F(xiàn)組30.5±1.9。與L組大鼠比較，PQDS顯著減少膠原在梗死區(qū)的沉積（P<0.05）。P50、P100組及F組之間均無(wú)顯著差異。 型及型膠原蛋白免疫組化染色可見，在正常的心肌中，僅在間質(zhì)以及血管外周可以看到少量的膠原；在心肌梗死后，膠原聚集首先在梗死區(qū)，并向周圍逐漸發(fā)展。28 d時(shí)，梗死區(qū)以I型膠原染色為主，與L組大鼠比較，PQDS 50、100 mg/kg使I型膠原染色明顯減少。型膠原染色較為細(xì)小，各組間無(wú)明顯差異。與S組(2.03±0.38)大鼠比較，L組非梗死區(qū)I型及型膠原蛋白比值(2.69

11、±0.44)明顯增大（P<0.01）。與L組大鼠比較，PQDS顯著改善非梗死區(qū)I型及型膠原蛋白的比值（P<0.05），P50組2.20±0.36，P100組2.29±0.28，P50、P100組及F組(2.27±0.34)之間均無(wú)顯著差異。2.3 PQDS對(duì)大鼠心室形態(tài)的影響 與S組相比，L組IS、NIST、LVCA、TLAV、LVCA/TLAV均明顯增加（P<0.01）。與模型組相比，PQDS 50、100 mg/kg不能降低梗死面積（P>0.05），但可顯著降低NIST、LVCA、LVCA/TLAV（P<0.05或P&l

12、t;0.01），有限制TLAV擴(kuò)大趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。P50、P100組及F組之間均無(wú)顯著差異，見表2。表1 PQDS對(duì)模型大鼠體重、心室重量及心臟系數(shù)的影響（略）表2 PQDS對(duì)模型大鼠心臟形態(tài)學(xué)的影響（略）2.4 PQDS對(duì)大鼠血漿AT及ET水平的影響 與S組相比，L組AT及ET血漿水平顯著升高（P<0.01）。與L組比較，PQDS 50、100 mg/kg能明顯降低血漿AT及ET水平（P<0.05及P<0.01）。P50、P100組及F組之間均無(wú)顯著差異，見表3。表3 PQDS對(duì)血漿ET及AT水平的影響（略）3 討論 心室重構(gòu)的慢性期，不但影響心室的梗死區(qū)，而且還影響

13、非梗死區(qū)，這導(dǎo)致對(duì)非梗死心肌室壁應(yīng)力及血液動(dòng)力學(xué)負(fù)荷增加，并且伴隨左室肥厚及擴(kuò)張導(dǎo)致的左室?guī)缀涡螒B(tài)學(xué)的一系列改變8。本實(shí)驗(yàn)顯示，急性心肌梗死后晚期缺血再灌注的梗死心肌仍然存在心室重構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)中P50、P100組與L組相比，心室重量、心室臟器系數(shù)明顯降低，顯著抑制了非梗死區(qū)室間隔肥厚，降低了LVCA/TLAV比值，抑制了左室離心性肥厚。 心室重構(gòu)包括心肌間質(zhì)的重構(gòu)，其中心肌間質(zhì)的主要成分是心肌膠原網(wǎng)絡(luò)，心肌間質(zhì)重構(gòu)的重點(diǎn)也主要是心肌膠原網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)。其與舒張期心室僵硬度的增加相關(guān)，是造成心室舒張功能障礙的主要原因之一9。心肌梗死后心肌修復(fù)的膠原主要為型及型膠原10。I型膠原與心肌僵硬度有關(guān)，型膠原與

14、心肌彈性有關(guān)。心肌膠原網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞間及冠狀動(dòng)脈血管周圍膠原纖維增多，、型膠原比例增加9。而膠原比值的增加勢(shì)必會(huì)影響心肌的僵硬度，降低左室順應(yīng)性，最終降低舒張功能。本實(shí)驗(yàn)中P50、P100組與L組相比，顯著減少了梗死區(qū)膠原蛋白的沉積，改善了I型及型膠原蛋白比值，限制了晚期缺血再灌注心肌的膠原重構(gòu)。                         

15、     心肌梗死后心肌局部及循環(huán) RAAS系統(tǒng)均被激活，促進(jìn)膠原增生。有研究表明AT可直接作用于成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)其增生，還可以通過(guò)刺激去甲腎上腺素從心臟神經(jīng)末梢以及內(nèi)皮細(xì)胞釋放ET來(lái)間接促進(jìn)膠原沉積11。本實(shí)驗(yàn)中，P50、P100組與L組相比，顯著降低大鼠血漿AT、ET水平，抑制心室重構(gòu)，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。【參考文獻(xiàn)】 1 Sabbah HN，Goldstein S.Ventricular remodeling：consequences and therapyJ.Eur Heart J，1993；14(Supplement C):249.2 孟淑玲.急性

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