白細胞介素6對HL-60細胞NF-κB p65活性的影響

1、白細胞介素6對HL-60細胞NF-B p65活性的影響摘要nbsp;:目的nbsp;nbsp;研究白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）對粒細胞白血病細胞系HL-60核因子-Bnbsp;p65（NF-Bnbsp;p65）活性的影響，以探討IL-6在白血病發(fā)生、發(fā)展中的作用。nbsp;方法nbsp;nbsp;指數(shù)生長期HL-60細胞置于96孔培養(yǎng)板內(nèi)RPMI-1640培 高吉照，薛天陽，許偉 徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2006 年 2 月 第 26 卷 第 1 期 摘要 :目的 研究白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）對粒細胞白血病細胞系HL-60核因子-B p65（NF-B

2、 p65）活性的影響，以探討IL-6在白血病發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法 指數(shù)生長期HL-60細胞置于96孔培養(yǎng)板內(nèi)RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)2h后，分為A、B2組。A組加PBS液繼續(xù)培養(yǎng)3h;B組分別加0.5、5、50g.L的IL-6繼續(xù)培養(yǎng)3h。用流式細胞儀（FCM）檢測HL-60細胞NF-B p65的活化率。 結(jié)果 IL-6濃度為5、50g.L時誘導(dǎo)的HL-60細胞NF-B p65活化率分別為（16.812.73）%、（22.374.29）%，與對照組（8.442.20）%相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）;3種IL-6濃度組間的NF-B p65活化率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。

3、 結(jié)論 IL-6有誘導(dǎo)HL-60細胞NF-B p65活化的作用，且存在劑量依賴趨勢。 關(guān)鍵詞 :白細胞介素6;HL-60細胞;核因子-B p65;活化 The effect of interleukin-6on NF-B p65activity of HL-60cells GAO Ji-zhao，XUE Tian-yang，XU Wei （Department of Pediatrics，Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College，Xuzhou，Jiangsu221002，China） Abstract:Objective To explore

4、the effects of interleukin-6（IL-6）on the activity of nuclear factor kappa B p65（NF-B p65）in HL-60cells.Methods After being cultured in RPMI-1640for2h，the HL-60cells were divided into A and B groups.The culture was continued for3h，with PBS being added in the media of group A，and IL-6.0.5，5and50g.L ad

5、ded in the media of the respective subgroups of group B.The activation of NF-b p65of HL-60cells was deter-mined by flow cytometry（FCM）.Results The rates of activation of NF-B p65in HL-60cells cultured with IL-65and50g.L were（16.812.73）%and（22.374.29）%，respectively，higher than the control（8.442.20）%（

6、P0.05）.Conclusion IL-6increases the activation of NF-B p65of HL-60cells in dose-dependent manner. Key words:interleukin-6;HL-60cells;nuclear factor-B p65;activation 急性白血病是兒童最常見的惡性腫瘤，是一組惡性克隆性疾病，年發(fā)病率（34）.10萬，每年新增病例至少1萬例。目前，治療兒童白血病的方法主要是化療。隨著化療方案的不斷改進，不少小兒白血病的預(yù)后已有明顯改善，其中小兒急性淋巴細胞白血病5年無病生存率（event free su

7、rvival，EFS）從20世紀(jì)70年代的幾乎是0提高到目前的70%以上。然而復(fù)發(fā)和耐藥一直困擾著醫(yī)務(wù)工作者，因此仍然需要不斷探索，以進一步提高白血病患兒的長期無病生存率及生活質(zhì)量。 1 材料和方法 1.1 材料和儀器 HL-60細胞購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，兔抗人NF-B p65單克隆抗體（一抗）、羊抗兔單克隆抗體（二抗）、IL-6均購自北京萊博生物實驗材料有限公司。流式細胞儀為美國Calibur公司產(chǎn)品。1.2 方法 1.2.1 細胞傳代 HL-60細胞在RPMI-1640培養(yǎng)基（含15%胎牛血清，2g.L碳酸氫鈉，300mg.L葡萄糖，青、鏈霉素各200U.L）中傳代培養(yǎng)，每34

8、天傳代1次。培養(yǎng)條件:5%CO 2 ，飽和濕度，37。 1.2.2 HL-60細胞NF-B p65活化 指數(shù)生長期HL-60細胞110 6 .L，置于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔各1ml培養(yǎng)2h后，分為2組。A組加PBS液0.1ml;B組又分為3組，分別加入終濃度為0.5、5、50g.L的IL-6各0.1ml，各組繼續(xù)培養(yǎng)3h后待測NF-B p65活化率。實驗重復(fù)3遍。 1.2.3 流式細胞儀檢測NF-B p65活性 分別取各組樣本1ml，1500r.min離心10min，棄上清;PBS洗滌2次;加150稀釋的NF-B p65一抗（兔抗人單抗）100l，室溫孵育30min，PBS洗滌2次;加150稀釋

9、的FITC標(biāo)記的二抗（鼠抗兔單抗），室溫避光孵育30min，PBS洗滌2次;1%副醛固定細胞，4冰箱保存，3天內(nèi)用流式細胞儀檢測。每組實驗均設(shè)陰性對照，陰性對照組只加二抗，不加一抗，余處理同實驗組。 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5分析統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，試驗數(shù)據(jù)首先進行方差齊性檢驗和兩兩比較SNK法檢驗，兩獨立樣本均數(shù)采用t檢驗，試驗數(shù)據(jù)用xs，檢驗水準(zhǔn):=0.05。 2 結(jié)果 IL-6在濃度為5、50g.L時誘導(dǎo)的HL-60細胞NF-B p65活化率與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。3種IL-6濃度組間HL-60細胞NF-B p65活化率方差齊性檢驗F=165.15，P=0

10、.000;3組間兩兩比較P均0.05，*P0.05;IL-6組兩兩比較:P均0.05 3 討論 NF-B是一種多效性的轉(zhuǎn)錄因子，參與炎癥、免疫、應(yīng)激、細胞的增殖和細胞凋亡等多種生理、病理過程的基因調(diào)節(jié)。NF-B家族由NF-B.Rel（p65）蛋白家族中的成員以同源或異源二聚體形式存在。1996年，國外3個實驗小組報道NF-B是腫瘤壞死因子（TNF）和化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡耐受的重要因子13 。通常情況下，NF-B和其抑制因子IB以非活性形式存在于各型細胞的細胞質(zhì)中，只有被激活后，才從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)位進入細胞核發(fā)揮作用。 IL-6生物學(xué)功能多樣，有促進B細胞分化和急性期蛋白生成、刺激造血、參與炎癥反

11、應(yīng)等作用。IL-6一貫被認為是凋亡抑制因子，它可抑制TGF-、野生型p53誘導(dǎo)的急性髓系白血病細胞的凋亡。 IL-6和NF-B之間相互影響，相互作用，共同調(diào)節(jié)腫瘤細胞增殖、分化和凋亡4-5 。IL-6的分泌有賴于NF-B的活化，而IL-6反過來又促進NF-B的活性，使腫瘤細胞免于凋亡，因而IL-6和NF-B相互促進，形成惡性循環(huán)。IL-6促進HL-60細胞NF-B活化的機制尚不明確，可能是通過JAKs-STATs和Ras-MAPK途徑。IL-6誘導(dǎo)形成的受體復(fù)合物在胞質(zhì)內(nèi)形成了JAKs的結(jié)合面，JAKs與受體復(fù)合物結(jié)合后出現(xiàn)JAKs-受體，JAKs-JAKs的交叉磷酸化和自身磷酸化，再通過磷酸

12、化活化的JAKs募集并活化STATs?；罨腟TATs形成同源或異源二聚體從胞質(zhì)移位入細胞核并結(jié)合在特定基因的啟動子上，激發(fā)基因轉(zhuǎn)錄。同時，磷酸化的受體可為具有SH2結(jié)構(gòu)的其他蛋白提供結(jié)合位點，如HCP、Shc等，并誘導(dǎo)它們的磷酸化活化，再通過Grb2-mSos-Shc募集并磷酸化活化Ras-raf-1-MAP-KK-MAPK，活化NF-B6-7 。 我們的試驗結(jié)果顯示，IL-6在濃度為5、50g.L時促進HL-60細胞NF-B活化;而濃度為0.5g.L時HL-60細胞NF-B p65蛋白活化率與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這與國外文獻報道一致。 參考文獻 : 1 Beg AA，Baltimo

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