MDR1基因表達與賁門癌病理特征的關系

1、    MDR1基因表達與賁門癌病理特征的關系        摘要目的：探討賁門癌組織中多藥耐藥基因（MDR1)表達與其病理特征的關系。方法：應用逆轉錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)方法，對51例賁門癌組織、癌旁及35枚淋巴結中MDR1基因的表達進行檢測分析。結果：賁門癌組織中MDR1陽性18例(35.3），癌旁組織MDR1陽性 2例（3.9），兩者比較差異具有顯著性（P0.05）。21枚轉移淋巴結組織MDR1陽性6例（28.6），14枚非轉移淋巴結中未見MDR1陽性表達；MD

2、R1表達陽性與腫瘤大小、浸潤程度、病理分期及淋巴轉移與否雖無統(tǒng)計學意義，但在TNM、期和腫瘤侵犯深肌層以上的MDR1基因表達陽性率增高；低分化賁門癌的MDR1陽性分布明顯高于高分化腫瘤(P<0.05)。對部分病例隨訪發(fā)現(xiàn)，MDR1陽性者腫瘤復發(fā)與轉移的總發(fā)生率(46.2%)高于MDR1陰性者（21.1%）。結論：賁門癌組織中存在著原發(fā)性MDR1基因表達，并與轉移淋巴結組織的MDR1基因表達具有一致性，MDR1的表達除了表現(xiàn)腫瘤的多藥耐藥外，還可能是賁門癌惡性行為的觀察指標，提示預后不良。關鍵詞賁門腫瘤；基因，MDR1；基因表達中分類號文獻標識碼A文章編號1001-7399(2000)02

3、-0129-02 Expression of MDR1 gene and its relationship with pathological feature of cardiac carcinomaWang Yanming, Wang Aimin, Gao Ping, Chen Zhixia(Dept of Thoracic Surg, 252th Hospital of PLA, Baoding071000)ABSTRACTPurposeTo evaluate the expression of MDR1 gene and its relation to pathological feat

4、ure of cardiac cancer. Methods A serious of 51 resected tumor tissues from cardiac cancer patients and 51 paracancerous tissues and 35 lymph node tissues were analyzed for MDR1 gene expression by RT-PCR method. ResultsThe MDR1 positivity rate differed significantly between cardiac cancer tissue (35.

5、3%) and paracancerous tissue (3.9%) (P<0.05). The MDR1 positivity rate in metastatic lymph node was 28.6%. There was not positive expression of MDR1 gene expression in nonmetastatic lymph node. The MDR1 gene expression in undifferentiated tumor was significantly higher in comparison with well-dif

6、ferentiated (P<0.05). In deeper-muscle invaded by tumor, positivity rate of MDR1 gene expression (37.5%) was higher in comparison with invasion to superficial-muscle(18.2%). The MDR1 positivity rate in stage 、 tumor tissues (41%) wss still higher than that in stage 、(25%). In addition, positive e

7、xpression of MDR1 gene did not be associated with tumor size and lymph node metastases. The recurrence or metastasis rate with MDR1 positive cases was higher(46.2%) than that with MDR1 negative (21.1%) by follow up of these patients. ConclusionOverexpression of MDR1 gene in untreated cardiac cancer

8、is consistant with that of its metastatic lymph node tissues, and may be regarded as a prognositic marker.KEY WORDScardiac neoplasms; genes, MDR1; gene expression腫瘤的多藥耐藥性(MDR)是目前研究的熱點問題，有關報道多集中于腫瘤多藥耐藥基因(MDR1)表達與其耐藥性的探討，對于MDR1表達與腫瘤病理特征方面的研究較少。從1996年12月1998年12月，我們采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術,檢測了51例賁門癌、癌旁及35

9、枚腫大淋巴結組織中MDR1基因的表達，以探討賁門癌組織中MDR1表達與其病理特征的關系。1材料與方法1.1一般資料51例賁門癌中，男性39例，女性12例，平均年齡57歲。全部病例經病理檢查為賁門腺癌，術前均未行任何形式的抗腫瘤治療。標本取自手術結束時腫瘤組織，癌旁（距離腫瘤約3 cm）及隨機采取21例患者的35枚腫大淋巴結組織各1塊，即投入液氮保存。1.2主要試劑及儀器AMV逆轉錄酶、RNA酶抑制劑等均購自Promega公司；毛細管PCR儀為美國Idaho公司產品；MDR1引物由上海生工公司合成；凝膠成像系統(tǒng):Kodak digital science system dc-40。1.3RT-P

10、CR方法按照Chomczynski1方法提取組織RNA， cDNA合成采取用 20 l逆轉錄反應體系，42反應1 h， 95 5 min滅活AMV。RT-PCR參照Noonan2方法，PCR反應體系內含cDNA 2 l，10×buffer 2 l，4×dNTP 2 l，MDR1、-actin引物各2 l，Taq酶1U，用水補至20 l。PCR反應在0.2 ml薄壁管中進行，毛細管PCR儀擴增反應參數(shù)為：94預變性2 min、變性20 s，55退火20 s，72延伸30 s；30個循環(huán)；72后延伸7 min。1.4電泳及成像擴增產物在2瓊脂糖凝膠上電泳，凝膠成像系統(tǒng)進行定量分

11、析，MDR1/-actin比值表示MDR的相對表達水平，MDR1/-actin>0.5為陽性。1.5統(tǒng)計學方法MDR1陽性率比較行2檢驗。2結果不同組織中MDR1的RT-PCR擴增產物凝膠電泳結果，其擴增產物分別為536 bp和336 bp。在賁門癌組織中MDR1基因陽性表達是18例（35.3），癌旁組織MDR1陽性2例（3.9），癌組織的MDR1陽性率與癌旁組織比較差異有顯著性（P<0.05）；在35枚腫大淋巴結組織中，病理證實為癌轉移的21枚，6枚MDR1表達陽性（28.6），并且轉移淋巴結組織MDR1陽性者，相應癌組織中均陽性。而14枚非轉移淋巴結組織未檢測到MDR1陽性表達

12、。不同腫瘤大小及淋巴結轉移與否的MDR1陽性率相近;但在腫瘤侵犯深肌層或漿膜層的陽性率（37.5%）高于腫瘤侵犯淺肌層以下者（18.2%）;、期賁門癌的MDR1陽性率（41%）也高于、期（25%）;在不同分化賁門癌組織中，MDR1陽性表達分布分別是：高分化腺癌 6例（24%），中度分化 4例（33.3%），低分化 8例（57.1%）。低分化賁門癌的MDR1陽性率與高分化者比較差異有顯著性(P<0.05)。32例患者經術后12年追蹤隨防，13例癌組織MDR1陽性者，1例復發(fā)、5例遠處轉移，復發(fā)與轉移的總發(fā)生率為46.2%，并且在轉移淋巴結組織中MDR1陽性的3例均在術后1年內發(fā)生腫瘤復發(fā)或

13、轉移；而同期隨訪的19例MDR1陰性者，4例復發(fā)或轉移，發(fā)生率為21.1%。3討論腫瘤細胞的MDR機制復雜，MDR1作為腫瘤細胞的重要耐藥基因已被公認，而且在造血腫瘤中的研究較多3，4，但在賁門癌組織中的研究少見報道。本研究發(fā)現(xiàn)，MDR1在賁門癌組織中表達增高，與癌旁組織比較差異具有顯著性（P<0.05），表明賁門癌組織中具有原發(fā)的腫瘤耐藥性，這可能是病情進展過程中，腫瘤細胞自身MDR1基因擴增的結果，有人認為5MDR1在晚期腫瘤中表達增高，并可反映腫瘤的浸潤、轉移及預后。本組資料顯示，不同腫瘤大小和不同病理類型的賁門癌組織中MDR1陽性率相近，但在侵犯超過深肌層的腫瘤MDR1陽性率（3

14、7.5%）高于侵犯粘膜下和淺肌層者（18.5%），、期賁門癌的MDR1陽性率（41%）也高于、期（25%），這一結果似與上述報道相一致。另外，MDR1陽性還多見于低分化腫瘤中（P<0.05)，這說明MDR1基因表達不僅表現(xiàn)了賁門癌的多藥耐藥性，還可能反映了腫瘤細胞的惡性程度。從本組資料的整體分析看，MDR1表達與淋巴結的有否癌轉移并無明顯關系，但在有癌轉移的淋巴結組織中，MDR1基因表達與原發(fā)癌組織具有一致性。這提示淋巴結中MDR1陽性表達是腫瘤侵犯淋巴組織的信號，可預示術后腫瘤的復發(fā)、轉移傾向。雖然本組資料隨訪時間較短，病例數(shù)也少，生存率比較尚無統(tǒng)計學意義。但隨訪結果顯示：MDR1陽性

15、者復發(fā)、轉移率（46.2%）明顯高于MDR1陰性者（21.1%）,由此可見，MDR1表達可能提示賁門癌患者預后不良。作者簡介：王延明，男，主治醫(yī)師。研究方向：腫瘤的多藥耐藥性作者單位：王延明（河北省保定解放軍252醫(yī)院心胸外科）王愛民（中心實驗室071000）高萍（濟南55161部隊衛(wèi)生隊，保定071000）陳志霞（河北省保定解放軍252醫(yī)院心胸外科）參考文獻1，Chomczynski P, Sacchi N. Single step method of RNA isolation by acid guanuanianium thiocyante-phenol-chloroform extra

16、ction. Anal Biochem, 1987;162:1562，Noonan KE, Bech C, Holzmayer TA et al. Quantiative analysis of MDR1 gene expression in human tumor by polymerase chain reaction. Proc Natl Acad Sci USA,1990;87:71603，Kruh GD, Chan A, Myers K et al. Expression complementary DNA transfer establishes map as a multidrug resistance gene. Cancer Res,1994;54:16494，Abbaszadigan MR, Futsher BW, Klimechi WT et al. Analysis of multidrug resistance associated protein messenger RNA in norm