GA9論文蛋白相互作用 轉錄活性 乳腺癌 組蛋白修飾

1、GA9論文：雌激素受體共調節(jié)因子GA9的功能研究【中文摘要】雌激素受體ER是一種核受體類轉錄因子,主要調節(jié)與雌激素有關基因的轉錄,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,是乳腺癌治療的靶標和預后的指標之一。ER分為ERa和ERp兩種,兩者在結構和功能上有相似之處,但又不完全相同,都含兩個重要的轉錄激活結構域AF1和AF2。AF1和AF2的有效轉錄激活作用依賴于與其它蛋白質的相互作用。目前,乳腺癌的內分泌治療主要是通過降低ER轉錄活性來實現(xiàn)的,因此ER共調節(jié)因子的發(fā)現(xiàn)和功能研究對于有效開發(fā)治療乳腺癌的藥物具有重大意義。在人類的許多重大疾病包括腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,DNA和組蛋白修飾等表觀遺傳修飾也

2、具有非常重要的作用。多數(shù)表觀遺傳的改變是可逆的,這就為疾病的治療提供了樂觀的前景。其中,組蛋白修飾有豐富的多樣性并且在基因表達調控中發(fā)揮重要作用,這些修飾可影響組蛋白與DNA的親和性,進而改變染色質的狀態(tài),或者影響轉錄因子與DNA序列的結合,最終導致下游基因轉錄激活或抑制。越來越多證據(jù)表明,組蛋白修飾與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關,因此,對組蛋白修飾的進一步研究,對于腫瘤等重大疾病的診斷、防治和預后判斷有重要意義,為腫瘤的治療及相應藥物開發(fā)研究提供了新的靶標。GA9是一個未.【英文摘要】Estrogen receptor(ER) is a member of a large superfamily of

3、 nuclear receptors that regulate the transcription of estrogen-responsive genes. ER is an effective treatment target as well as a prognostic factor of breast cancer. There are two forms of ER, ERa and ER,which exhibit similar, yet distinct, structural and functional features. Both ERs have two impor

4、tant transcription activation function regions, AF1 and AF2. The effective transactivation of AF1 and AF2 depends on their interaction with other protei.【關鍵詞】GA9 ER 蛋白相互作用 轉錄活性 乳腺癌 組蛋白修飾【英文關鍵詞】GA9 ER protein interaction transcriptional activity breast cancer histone modification【索購全文】聯(lián)系Q1：138113721

5、Q2：139938848【目錄】雌激素受體共調節(jié)因子GA9的功能研究摘要3-4ABSTRACT4-5英文縮寫詞說明6-10第一部分 前言10-171.1 研究背景10-16 雌激素10 雌激素受體分類及結構域10-11 ER的轉錄調控機制11-12 ER共調節(jié)因子12-13 乳腺癌的治療13 核心組蛋白修飾13-161.2 研究目的及意義16-17第二部分 GA9在乳腺癌組織細胞中的表達情況17-242.1 實驗材料及儀器17-19 細胞株及乳腺癌組織標本切片17 細胞培養(yǎng)試劑17 抗體17 其它分子生物學試劑和化學試劑17 主要實驗儀器及試劑盒17-18 主要工作液配方18-192.2 實驗

6、方法19-21 細胞培養(yǎng)19-20 Western blot分析20 細胞免疫熒光20 組織免疫20-212.3 實驗結果21-23 GA9在乳腺癌細胞系中的表達情況21-22 細胞內源GA9在乳腺癌細胞中的定位22 GA9在乳腺癌患者組織中的表達22-232.4 討論23-24第三部分 GA9與ER的相互作用及其對ER活性的調節(jié)作用24-433.1 實驗材料及儀器24-27 引物合成及序列測定24 菌株和細胞系24 質粒24 分子生物學工具酶24 常用試劑盒24-25 細胞培養(yǎng)試劑25 抗體25 其他試劑25 主要實驗儀器25 主要工作液配方25-273.2 實驗方法27-32 重組質粒的構

7、建27-29 siRNAs表達載體的構建29 哺乳動物細胞的轉染29-30 Western blot分析(同前)30 GST融合蛋白在大腸桿菌DH5中的表達鑒定30 GST融合蛋白的純化30 GST沉淀(pull down)分析30 免疫共沉淀30-31 熒光素酶和-半乳糖苷酶活性測定31 轉錄激活活性檢測31-32 RNA的提取32 實時定量PCR(Real-time PCR)323.3 實驗結果32-41 GST-GA9八個缺失突變體的表達鑒定32 GST-pull down實驗驗證GA9與ER和ER存在體外相互作用32-33 GST-pull down實驗確定GA9與ER體外相互作用的區(qū)

8、域33 免疫共沉淀實驗驗證GA9與ER和ER在體內的相互作用33-34 雌激素(E2)對GA9與ER和ER在體內相互作用的影響34 與GA9相互作用的ER和ER區(qū)域的定位34-35 內源性免疫共沉淀實驗驗證GA9與ER在體內的相互作用35-36 過表達GA9能抑制ER的轉錄活性36-37 GA9對ER轉錄活性的抑制存在劑量效應37 過表達GA9能抑制ER或ER的轉錄活性37-38 GA9降低ERE報告基因的活性依賴于ER38-39 GA9 siRNAs的表達鑒定39 敲低GA9升高ER的轉錄活性39-40 GA9對ER下游基因表達的影響40-413.4 討論41-43第四部分 GA9與核心組蛋白修飾43-474.1 實驗材料及儀器434.2 實驗方法434.3 實驗結果43-