RP_HPLC法測定5_羥基色氨酸

1、RP-HP LC法測定52羥基色氨酸李多偉1,張小燕2,孫詩清1,王義潮1(1.西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,西安710069;2.西安皓天生物工程技術(shù)有限責(zé)任公司,西安710075摘要:建立了高效液相色譜法測定52羥基色氨酸。在優(yōu)化條件下,色譜柱:Symmetry C18柱;流動相:V(甲醇V(水=595;檢測波長:276nm。52羥基色氨酸對照品溶液在018410g的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系,r=019992;回收率為99194%,RS D=1135%。關(guān)鍵詞:52羥基色氨酸;反相高效液相色譜;測定中圖分類號:O657.7文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:100020720(20060520592035

2、2羥基色氨酸(簡稱5HTP,化學(xué)命名:52羥基232吲哚基22氨基丙酸1。目前市場上流行的褪黑激素,腦黃金等藥物在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為52羥基色氨酸,52羥基色氨酸是一類重要的精神類藥物。研究認(rèn)為,52羥基色氨酸具有影響睡眠、抗衰老、抗抑郁、調(diào)節(jié)免疫功能等多方面的作用2,3,近年來在國內(nèi)外醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用日益廣泛,其生產(chǎn)也得到了迅速發(fā)展。但是關(guān)于52羥基色氨酸的測定方法,文獻(xiàn)記載甚少。有報道采用分光光度法,用苯并戊三酮直接顯色后進(jìn)行比色分析定量1,方法較為費時,且靈敏度較差,本文根據(jù)色氨酸的性質(zhì)4,運用高效液相色譜法對52羥基色氨酸進(jìn)行測定。本法可為常規(guī)52羥基色氨酸的測定提供有價值的參考,同時對工

3、業(yè)產(chǎn)品進(jìn)行了分析,可達(dá)到更高的準(zhǔn)確度及更快的速度,為評定產(chǎn)品的質(zhì)量提供了重要的手段。1實驗部分1.1儀器與試劑美國Waters高效液相分析系統(tǒng)(Waters1525 Binary HP LC Pum p,Waters2487DualAbs orbance Detector,Breeze data analysis system;超聲波清洗機(jī)AS-320(Auto Science。52羥基色氨酸對照品(美國Sigma公司;樣品(標(biāo)號分別為:HT040320,HT040412,HT040509,HT040608,HT040702:由陜西天一生物技術(shù)有限公司提供;甲醇為色譜純;水為超純水。1.2色譜

4、條件色譜柱:Symmetry C18柱(4.6mm×150mm,5m;流動相:V(甲醇V(水=595;檢測波長: 276nm;柱溫:室溫;流速:1.0m Lmin。進(jìn)樣量: 20L。1.3溶液的制備1.3.1供試品溶液準(zhǔn)確稱取樣品15.0mg,用甲醇溶解并定容至50m L量瓶中,搖勻,進(jìn)樣前用0.45m微孔濾膜過濾。1.3.2對照品溶液準(zhǔn)確稱取5HTP對照品10.0 mg,置25m L容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,密塞,作為對照品溶液。準(zhǔn)確吸取此溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0m L于10m L容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,密塞,作為對照品稀釋液。2結(jié)果與討論

5、2.1流動相的選擇通過優(yōu)化,流動相V(甲醇V(水=595時,色譜峰峰形最好,52羥基色氨酸的保留時間約為7min。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線分別準(zhǔn)確吸取對照品稀釋液20L,按上述色譜條件測定,色譜圖見圖1。以對照品稀釋液95收稿日期:2005203214;修訂日期:2005204219作者簡介:李多偉(1959-,男,副教授52HTP 量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),作圖,得回歸方程:y =9172275×107+2135117×106m ,r =019992,5-HTP 在0.84g 點范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 圖15-HTP 對照品(a 和樣品(b 的HP LC 色譜圖Fig .

6、1Chrom atograms of (a stand ard of 5-HTP and (b sample of 5-HTP2.3精密度準(zhǔn)確吸取0.2mg m L 對照品溶液20L ,重復(fù)進(jìn)樣6次,5HTP 的峰面積值的RS D 為0.76%,保留時間的RS D 為0.35%。2.4重復(fù)性試驗對批號為HT 040320的樣品進(jìn)行6次平行試驗測定5HTP 含量,每次進(jìn)樣量為20L ,測的結(jié)果RS D 為1.25%,保留時間的RS D 為0.40%。2.5回收率試驗取已知量的樣液2m L ,共5份,分別準(zhǔn)確加5HTP 對照品溶液(準(zhǔn)確稱取5HTP 對照品10mg ,用甲醇定容至25m L 量瓶中

7、0.5m L ,按“2.1.1”項下方法操作制備溶液,按樣品測定方法進(jìn)行測定,平均回收率為99.94%,RS D 為1.35%。結(jié)果見表1。2.6樣品分析準(zhǔn)確稱取樣品15.0mg ,用甲醇溶解并定容至50m L 作為樣品溶液。按上述色譜條件,采用外標(biāo)法進(jìn)行定量測定,以峰面積計算樣品中5HTP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)。5批樣品測得的質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值分別為96121%,85165%,97181%,98169%,99112%;RS D 分別為1125%,1122%,1115%,1113%,1126%(n =3。表1回收率測定結(jié)果T ab .3R ecovers of contents of 5-HTP樣品52HTP

8、 量m g加入量m g實測量m g回收率%平均回收率%RS D%0.220.200.421100.20.180.200.37899.50.210.200.410100.099.94 1.350.200.200.402100.50.200.200.39899.5參考文獻(xiàn)1吳塞蘇,郝金宏,湯健健.光譜實驗室,2001,18(1:1212Ahmed Amer ,Jeff Breu ,Janine McDerm ott.PharmacologyBiochemistry and Behavior ,2004,77(1:1373T atsuo Harumi ,Shoji Matsushima.Journa

9、l of Chromatogra 2phy B ,2000,747(1-2:954文江平,唐愛國.國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢測學(xué)手冊,2000,23(6:359Determination of 52hydroxytrytophan by RP 2HP LCLI Duo 2wei31,ZH ANG Xiao 2yan 2,SUN Shi 2qing 1and WANG Yi 2chao 1(1.C ollege of Life Science ,N orthwest Uni 2versity ,X i an 710069;2.X i an H AOTI AN Bio 2engineering T

10、 echnology C o.Ltd.,X i an 710075,Fenxi Shiyanshi ,2006,25(5:5961Abstract :A high performance liquid chromatography (HP LC method was established for determination of 52Hydroxytrytophan.The optimal experiment condition was using C 18column (Symmetry C 18,4.6mm ×150mm ,506m,m obile phase of meth

11、anol2water(595and detection wavelength of276nm.The calibration curve was linear in the range of0.84.0g for5HTP(r=0.9992.The average recovery(n=5was99194%for5HTP(RS D= 1135%.K eyw ords:5HTP;RP-HP LC;Determination“第四屆國際華夏學(xué)者分析化學(xué)研討會”會議通知The Fourth I nternational Symposium of Worldwide Chinese Scholars onAnalytical Chemistry(ISWCSAC2006第四屆國際華夏學(xué)者分析化學(xué)研討會(ISWCS AC2006,原名國際華裔學(xué)者分析化學(xué)研討會,經(jīng)中華人民共和國外交部和中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會批準(zhǔn),將于2006年9月2226日在大連召開。此次會議的宗旨是進(jìn)一步加強海內(nèi)外華裔分析化學(xué)學(xué)者的相互了解與合作研究。會議期間將同時舉辦分析化學(xué)新產(chǎn)品、新技術(shù)展示會。充分展示分析化學(xué)、生命科學(xué)和