食管癌組織中血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)對樹突狀細(xì)胞的影響

1、食管癌組織中血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)對樹突狀細(xì)胞的影響    作者：楊文鋒, 李道堂, 李靜, 陳緒霞, 王善政 【關(guān)鍵詞】 食管腫瘤;,血管內(nèi)皮生長因子;,樹突狀細(xì)胞;,S100蛋白 Theeffectsofvascularendothelialgrowth factor on dendritic cells in esophageal tumor tissue Abstract AIM: To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF) a

2、nd S100 protein positive dendritic cell (DC) in esophagelal tumor tissue. METHODS: VEGF and S100 protein in 94 patients with esophageal carcinoma were detected by HRP Labelled streptavidin biotin(LSAB) immunohistochemical method. RESULTS: Postive rate of VEGF in esophageal tumor tissues was 74.46%(7

3、0/94); and the later the clinical stage and the lower the differentiation level was the more VEGF was(r=0.864, 0.803, respectively; P<0.05); while the later the clinical stage and the lower the differentiation level was, the less number of S100 DCs existed (r=-0.763, -0.908, respectively; P<0.

4、05). Furthermore, there was a reverse correlation between the expression of VEGF and S100 DC (r=-0.817, P<0.05). CONCLUSION: There may be a reverse relationship between the expression of VEGF and S100 DC in esophageal tumor tissue, VEGF could decrease the number of S100 DC and impair the immunolo

5、gical function of the body.Keywordsesophageal carcinoma; vascular endothelial growth factor(VEGF); dendritic cell; S100 protein 摘 要 目的: 研究食管癌組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)對樹突狀細(xì)胞（DC）的影響。方法: 對94例食管癌組織采用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素生物素法(LSAB), 分別檢測VEGF、 S100蛋白的表達(dá)水平, 并分析VEGF與S100 DC的相關(guān)性。結(jié)果: 食管癌組織中VEGF的表達(dá)率為74.46%（70/94）, V

6、EGF的表達(dá)與患者的臨床分期及癌組織的分化呈正相關(guān)（r=0.864, 0.803, P<0.05）。臨床分期越晚, 病癌組織的分化越低, 癌組織內(nèi)S100 DC的密度越?。╮=-0.763, -0.908, P<0.05）。隨著癌組織內(nèi)VEGF表達(dá)量的上升, S100 DC的密度降低, 二者呈負(fù)相關(guān)（r=-0.817, P<0.05）。結(jié)論: 食管癌組織中VEGF的表達(dá)可降低S100 DC的密度, 從而影響機(jī)體的免疫功能。 關(guān)鍵詞食管腫瘤; 血管內(nèi)皮生長因子; 樹突狀細(xì)胞; S100蛋白    腫瘤細(xì)胞大量產(chǎn)生的血管內(nèi)皮生長因子（vas

7、cular endothelial growth factor, VEGF）, 不僅有助于腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移, 而且還影響樹突狀細(xì)胞（DC）的抗原提呈能力。本研究以S100蛋白作為DC的標(biāo)志物, 采用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素生物素法(LSAB), 檢測了94例食管癌組織中VEGF、 S100蛋白的表達(dá)水平, 分析VEGF對S100 DC的影響。 1 材料和方法 1.1 研究對象 選擇2002年1月2004年12月, 在山東省腫瘤醫(yī)院和山東大學(xué)齊魯醫(yī)院胸外科住院接受外科手術(shù)的94例食管癌患者, 男76例, 女18例, 年齡3775歲, 中位年齡56歲, 術(shù)前均未進(jìn)行過任何抗腫瘤治

8、療。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）1997年修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期, 其中期24例, 期20例, 期50例。病理學(xué)檢查:鱗癌82例, 腺癌12例; 高分化者24例, 中分化者34例,    低分化者36例。 1.2 試劑 抗VEGF多克隆抗體（能同時(shí)識別VEGF121、 165和189）、 抗S100單克隆抗體（mAb）、 LSAB免疫組化染色法檢測試劑盒、 DAB顯色試劑盒及羊抗兔lgG,    均為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。 1.3 方法 VEGF和S100蛋白的檢測均按LSAB試劑盒中的說明進(jìn)行。將

9、94例食管癌組織經(jīng)40 g/L的多聚甲醛固定、 石蠟包埋及連續(xù)切片（片厚4 m）后, 加3 mL/L H2O2甲醇溶液于室溫溫育10 min以滅活內(nèi)源性過氧化酶的活性。然后滴加10 g/L胰蛋白酶及100 mL/L山羊血清封閉特異性位點(diǎn)。依次滴加抗VEGF多克隆抗體、 抗S100蛋白mAb（37溫育1 h或4冰箱過夜）、 1200生物素化的山羊抗兔lgG（37溫育1 h）及HRP標(biāo)記的親合素（37溫育1 h）。加DAB顯色后, 經(jīng)逐級酒精脫水、 二甲苯透明及中性樹膠封片, 觀察結(jié)果。免疫組化LSAB法檢測癌組織內(nèi)VEGF的表達(dá), 參照Inoue等1報(bào)道的免疫組化染色法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn), 以同一切

10、片中的平滑肌細(xì)胞為陽性對照（內(nèi)對照）。腫瘤細(xì)胞染色的強(qiáng)度等于或低于平滑肌細(xì)胞者為陰性, 高于平滑肌細(xì)胞者為陽性。再根據(jù)×400 視野中連續(xù)計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽性腫瘤細(xì)胞的比例, 將VEGF表達(dá)的水平再分為3個(gè)級別: 腫瘤細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞的染色強(qiáng)度30%者為1 ; 70%者為2 ; >70%者為3 。再分別計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野中陽性細(xì)胞的數(shù)目, 取其均值作為陽性細(xì)胞分布的密度。S100蛋白的表達(dá)以分散地存在于腫瘤細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)染呈棕黃色的細(xì)胞為陽性2。并隨機(jī)在癌周及癌間質(zhì)區(qū)中DC的密集區(qū), 于高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野中的S100 DC, 取其均值作為癌組織中S100 DC的密度。

11、<6個(gè)者為1 , 715個(gè)者為2 , 16個(gè)以上者為3 。    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 等級資料相關(guān)分析用秩相關(guān)分析法進(jìn)行, P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2 結(jié)果 免疫組化染色顯示, VEGF表達(dá)陽性者在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中染呈棕黃色或棕褐色。94例腫瘤組織切片中, VEGF表達(dá)陽性者70例(陽性率為74.46%), 其中, 1 者18例, 2 者30例, 3 者22例。VEGF的表達(dá)與患者的臨床分期及癌組織的分化呈正相關(guān)（r=0.864, 0.803）, 即臨床分期越晚, 癌組織的病理分化越低, 癌組織中VEGF的表達(dá)越顯著（P<0

12、.05, 表1, 圖1）。食管癌組織中DC上S100蛋白的表達(dá): 1 者36例, 2 者 28例, 3 者 30例。臨床分期越晚及癌組織的分化程度越低者, 癌組織中S100 DC的數(shù)量越少, 即癌組織中S100 DC的密度與患者的臨床分期及癌組織的分化程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.763,-0.908,P<0.05,表1,圖2）。食管癌組織中S100 DC的密度與VEGF的表達(dá)呈負(fù)相關(guān), 即VEGF表達(dá)量上升者, S100 DC的密度降低（r=-0.817, P<0.05, 表2）。 表1 食管癌組織中 VEGF、 S100 DC的表達(dá)與患者臨床分期及病理分化的相關(guān)性略 圖1 食管癌組織

13、內(nèi)VEGF的表達(dá)略    表2 食管癌組織中VEGF的表達(dá)與DC密度的相關(guān)性略 圖2 食管癌組織內(nèi)S100 DC的表達(dá)略 3 討論 VEGF是一種二聚體糖蛋白, 能特異性地引起血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)血管生成。其在乳腺癌和肝癌等組織中呈高表達(dá), 通過誘導(dǎo)腫瘤血管的形成, 在原位腫瘤的形成、 生長以及轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。徐衛(wèi)國等3報(bào)道, 食管癌細(xì)胞中VEGF的表達(dá)率為63.4%, 表達(dá)率高者, 患者的預(yù)后明顯不良。本研究表明, 食管癌組織中VEGF的表達(dá)率為74.46%, 且與腫瘤患者的臨床分期呈正相關(guān), 與Noguchi等4的報(bào)道類似。DC是目前已知的

14、機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞, 能激活靜息期T細(xì)胞, 促進(jìn)T輔助細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的生成, 在誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)中起重要的作用5。Ishigami等6報(bào)道, 在食管癌患者中, 癌組織中浸潤DC的密度與患者的臨床特征、 預(yù)后有一定的相關(guān)性, 即臨床分期越早, 癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)S100 DC的密度越高。本研究顯示, S100 DC的密度與食管癌患者的臨床分期呈負(fù)相關(guān)。Takahashi 等7研究表明, 在胃癌組織中, S100 DC的密度低、 VEGF表達(dá)高的患者預(yù)后差, S100 DC的密度與腫瘤組織中VEGF的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。Ohm等8發(fā)現(xiàn), 腫瘤產(chǎn)生的VEGF可通過抑制細(xì)胞因子Flt

15、3配體（FL）誘導(dǎo)核轉(zhuǎn)錄因子（NFB）活化而對DC產(chǎn)生影響。在體內(nèi)VEGF可通過抑制FL而影響造血前體細(xì)胞分化成DC,使體內(nèi)DC的數(shù)量減少。在體外, 經(jīng)VEGF預(yù)先作用后, 由造血前體細(xì)胞衍生的DC成熟度降低。本研究顯示,    癌組織中VEGF呈高表達(dá), S100 DC的密度降低, 二者呈負(fù)相關(guān), 提示食管癌組織中表達(dá)的VEGF可通過減少S100 DC的數(shù)量, 而抑制機(jī)體的免疫功能。以上表明, 在腫瘤生成和轉(zhuǎn)移的過程中, VEGF可抑制腫瘤組織內(nèi)S100 DC的分化、 發(fā)育和成熟, 從而降低機(jī)體對癌細(xì)胞產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。  

16、60; 參考文獻(xiàn): 1 Inoue K, Ozeki Y, Suganuma T, et al. Vascular endothelial growth factor expression in primary esophageal squamous cell carcinoma. association with angiogenesis and tumor progressionJ. Cancer, 1997, 79(2): 206-213. 2 張曉智, 安懷倫, 張學(xué)斌. 食管癌及其區(qū)域淋巴結(jié)中S100 樹突狀細(xì)胞的免疫組化研究J. 西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1998, 19（2）

17、: 215-218. 3 徐衛(wèi)國, 張力建, 謝玉泉. 血管內(nèi)皮生長因子在原發(fā)性食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義J .中華醫(yī)學(xué)雜志, 2001, 81(14): 860-862. 4 Noguchi T, Takeno S, Shibata T, et al. VEGFC expression correlates with histological differentiation and metastasis in squamous cell carcinoma of the esophagusJ. Oncol Rep, 2002, 9(5): 995-999. 5 盛立霞, 邱國強(qiáng), 謝曉寶, 等. 兩種白血病細(xì)胞抗原負(fù)載DC的體外誘導(dǎo)特異性CTL應(yīng)答的比較J. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2005, 21(2): 205-209. 6 Ishigami S, Natsugoe S, Matsumoto M, et al. Clinical implications of intratumoral dendritic cell infiltration in esophageal squamous cell carcinomaJ. Oncol Rep, 2003, 10(5): 1237-1240. 7 Takahashi A, Kono K, Ita