細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素的配制方法

1、細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素的配制方法、常用培養(yǎng)基1、 LB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用INNaOH（? 1ml ）調(diào)整pH至7.0 ，再補(bǔ)足水至1L 。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。2 、 SOB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1mol/L 氯化鉀2.5ml用水補(bǔ)足體積到1ml 滅過菌的1L。分成 100ml1mol/L 氯化鎂。的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加3、 SOC培 養(yǎng)基成分、方法同SOB 培養(yǎng)基的配制，只

2、是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每加 1ml 滅過菌的1mol/L 氯化鎂外，再加2ml 滅菌的1mol/L 葡萄糖（用水補(bǔ)足到100ml ，用 0.22um 的濾膜過濾除菌）。18g100ml 的小份中葡萄糖溶于足夠水中，再4、 TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中 :蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60 C,再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 中，使終體積為 100ml 。高壓滅菌或用的溶液（ 2.31g 的 KH2PO40.22um 的濾膜過濾除菌）。和12.54gK2HPO4溶在足量的水5、2X Y 培

3、養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中 :蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用INNaOH ( ? 1ml ) 調(diào)整 pH 至 7.0 ，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L 。6、 YPD 培 養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水補(bǔ)足體積為1L 后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加 1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉。二、常用抗生素 氨芐青霉素 ( ampicillin )( 100mg/ml

4、)溶解 1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于 -20 C 貯存。常以25ug/ml? 50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。羧芐青霉素 ( carbenicillin )( 50mg/ml )溶解 0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至以10ml 。分裝成小份于 -20C 貯存。常25ug/ml ?50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。甲氧西林 ( methicillin )(100mg/ml )溶解 1g 甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20C 貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml 氨芐 青霉素一

5、起添加于生長培養(yǎng)基?？敲顾?( kanamycin)(10mg/ml )溶解 0.1g 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20C 貯存。常以10ug/ml50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。氯霉素 (chloramphenicol)(25mg/ml )溶解 0.25g 氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至 12.5ug/ml ? 25ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。鏈霉素 (streptomycin)(50mg/ml )溶解 0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至常以 10ug/ml ? 50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。萘啶酮酸

6、( nalidixicacid)(5mg/ml )溶解 0.05g 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至15ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。10ml 。分裝成小份于 -20 C 貯存。常以10ml 。分裝成小份于 -20 C 貯存。10ml 。分裝成小份于 -20 C 貯存。常以四環(huán)素（ tetracyyline）（ 10mg/ml ）溶解 0.1g 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇，定容至10ml 。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20 C 貯存。常以10ug/ml ? 50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，

7、先在鹽水瓶或血清瓶加入10ml雙蒸水，高壓，冷卻后加入0.1g卡那霉素，混勻，濾膜過濾到試管中，再以1ml/ 管分裝到EP管中待用。抗生素儲存液工作濃度（mg/ml ）保存條件嚴(yán)緊型質(zhì)粒（ ug/ml ）松馳型質(zhì)粒 （ ug/ml ）氨芐青霉素 50 （溶于水 ）-20 C20 60 羧芐青霉素50（溶于水 ） -20 C 2060氯霉素 34（溶于乙醇 ） -20 C 25170 卡那霉素 10（溶于水 ） -20 C1050 鏈霉素 10（溶于水 ）-20 C 1050四環(huán)素 5（溶于甲醇 ） -20 C 1050抗生素儲存液工作濃度 （mg/ml ） 保存條件嚴(yán)緊型質(zhì)粒松馳型質(zhì)粒（ug/ml ）（ug/ml ）氨卞冃霉素50（溶于水 ）-20 C2060羧芐青霉素50（溶于水 ）-20 C2060氯霉素34（溶于乙醇 ）-20C25170卡那霉素10（溶于水 ）-20C1050鏈霉素10（溶于水 ）-20C1050四環(huán)素5（溶于甲醇 ）-20C1050利福平配法：濃度： 50 mg/ml配制量： 50ml配制方法：1 ?稱取 2.5g利福平置于 50ml 塑料離心管中。2