加味麻杏石甘湯對(duì)哮喘大鼠平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、加味麻杏石甘湯對(duì)哮喘大鼠平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】 目的:探討加味麻杏石甘湯(MG)對(duì)卵清蛋白所致實(shí)驗(yàn)大鼠支氣管哮喘血清及肺組織中NO、ET-1的調(diào)節(jié)作用。方法:采用腹腔注射卵蛋白和滅活百日咳桿菌,制成大鼠哮喘模型。在此基礎(chǔ)上,各組模型鼠分別給予不同的藥物“治療”,2周后處死測(cè)定各組大鼠血漿及肺組織NO、ET-1含量。結(jié)果:模型組血清及肺組織中NO、ET-1含量均增高，各用藥組均有所降低。各組血清NO含量相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，肺組織NO含量均降低，與模型組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。模型組血漿及肺組織ET-1含量與正常組相比明顯增高，差異

2、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);經(jīng)藥物治療后，各組與模型組比均能明顯降低血漿ET-1含量(P<0.01)。肺組織中NO含量與肺組織ET-1含量有明顯相關(guān)性(r=0.689，P<0.01)。結(jié)論:通過(guò)下調(diào)血漿和肺組織NO、ET-1的合成和釋放,從而減輕哮喘氣道炎癥及氣道上皮重建,降低氣道高反應(yīng)性,可能是MG治療哮喘的機(jī)制之一。 【關(guān)鍵詞】 加味麻杏石甘湯;支氣管哮喘;NO;ET-1支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞參與的非特異性慢性氣管炎癥。加味麻杏石甘湯是臨床上治療兒童支氣管哮喘的有效經(jīng)驗(yàn)方劑,臨床觀察小兒哮喘急性發(fā)

3、作時(shí)服用屢獲良效。本研究的主要目標(biāo)是觀察哮喘模型鼠血漿及肺組織中一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)的含量變化,探討加味麻杏石甘湯(MG)治療哮喘的作用機(jī)理，為MG治療小兒哮喘的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1 動(dòng)物分組及造模 60只雄性SD大鼠,體重180200 g,日齡2842 d(華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組、哮喘模型組、MG小劑量組、MG大劑量組、地塞米松組、MG與地米聯(lián)合組。參照崔龍?zhí)O等1介紹的造模方法，除正常對(duì)照組外，其余5組于第1天、第5天和第8天分3次腹腔注射抗原液1 mL致敏。第14天開(kāi)始將大鼠放入自制的不完全封閉的有機(jī)玻璃箱內(nèi)，予1

4、 %卵蛋白(OVA)溶液用超聲霧化器噴霧激發(fā)，每天1次，每次20 min，共激發(fā)12 d。正常對(duì)照組用等量的生理鹽水進(jìn)行激發(fā)。實(shí)驗(yàn)第17天開(kāi)始給藥，每次霧化吸入激發(fā)前半小時(shí)給予藥物干預(yù)，中藥組給予灌胃MG 每天4.24 g/kg，地塞米松組給予灌胃地塞米松每天0.75 mg/kg，以上各組大鼠給藥容量均為10 mL/kg，正常對(duì)照組和哮喘模型組灌胃等量生理鹽水，均每日1次,共8 d。1.2 主要儀器 402型霧化吸入器(上海合力醫(yī)療器械廠);-放射免疫計(jì)數(shù)器FJ-2021(西安二六二廠)1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 加味麻杏石甘湯由炙麻黃6 g、生石膏24 g、炒杏仁8 g、炒黃芩12 g、瓜蔞12 g、

5、蟬蛻10 g、地龍12 g、前胡10 g、炙枇杷葉12 g、甘草4 g組成。水煎，過(guò)濾，MG小劑量組濃縮至每毫升含生藥2.12 g(相當(dāng)于臨床30 kg兒童用量的10倍)，MG大劑量組濃縮至每毫升含生藥4.24 g(相當(dāng)于臨床30 kg兒童用量的20倍)，密封于無(wú)菌量瓶中，4 儲(chǔ)存?zhèn)溆?。地塞米松?0.75 mg×100片)研細(xì)末，用蒸餾水配成0.1875 mg/mL的溶液。1.4 標(biāo)本采集與測(cè)定1.4.1 血漿采集 各組大鼠斷頭取血，用一空白試管取血34 mL，靜置30 min后，在4 條件下低溫離心(3 000 r/min)15 min，取血清置于-20 冰箱保存待測(cè)NO;另用含

6、10 % EDTA二鈉和抑肽酶40 L(加入適量抑膚酶用以抑制血漿內(nèi)源性水解酶對(duì)待測(cè)物的降解)的試管取血2 mL，混勻后，在4 條件下離心(3 000 r/min)10 min，取血漿存于-20 冰箱保存待測(cè)ET-1。1.4.2 肺組織勻漿制備 取少量右肺組織用冰生理鹽水沖洗后稱重0.1 g左右，按19加4 生理鹽水，用玻璃勻漿器在4 條件下制備組織勻漿，3 000r/min離心10 min，提取上清液置于-20 冰箱保存待測(cè)。測(cè)定前，使樣本置于室溫中復(fù)融，再次于4 下離心(3 000r/min)5min，取上清液測(cè)NO、ET-1水平。1.4.3 血漿與肺組織中NO、ET-1含量測(cè)定 NO試劑

7、盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，ET-1購(gòu)自解放軍總醫(yī)院所科技開(kāi)發(fā)中心，放免指標(biāo)操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。NO測(cè)定采用硝酸還原法測(cè)定，ET-1測(cè)定采用放射免疫分析法。1.5 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，相關(guān)性分析采用Pearson方法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 各組血清及肺組織NO含量變化 模型組血清NO含量增高，各用藥組均有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組肺組織NO含量與正常組相比明顯增高(P&lt

8、;0.01);經(jīng)藥物治療后，各組肺組織NO含量均降低，與模型組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);MG大劑量組和地塞米松組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);MG小劑量組與MG大劑量組、地塞米松組、聯(lián)合用藥組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見(jiàn)表1。表1 各組血清及肺組織中NO含量(x±s)2.2 各組哮喘大鼠血漿及肺組織ET-1含量變化 模型組血漿ET-1含量與正常組相比明顯增高 (P<0.01);經(jīng)藥物治療后，各組與模型組比均能明顯降低血漿ET-1含量(P<0.01);MG大劑量組與小劑量組比差異統(tǒng)計(jì)

9、學(xué)意義(P<0.01);MG大劑量組與聯(lián)合用藥組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組肺組織ET-1含量與正常組相比明顯增高 (P<0.01);經(jīng)藥物治療后，各組與模型組比均能明顯降低(P<0.01);MG大劑量組與小劑量組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。肺組織中NO含量與肺組織ET-1含量有明顯相關(guān)性(r=0.689，P<0.01)。詳見(jiàn)表2。表2 各組哮喘大鼠血漿及肺組織中ET-1含量變化3 討論哮喘是由多種細(xì)胞參與的慢性非特異氣管道炎癥,以氣管高反應(yīng)性和可逆性氣管阻塞為特征的。內(nèi)源性NO是一種活性

10、很強(qiáng)的自由基，既是細(xì)胞信使分子，又是細(xì)胞毒性分子，在一定條件下參與組織炎癥及損傷2，導(dǎo)致氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道上皮損傷。哮喘患者呼出氣體中NO含量較正常人高23倍,且炎癥越明顯NO呼出濃度就越高,因此NO濃度的高低可幫助判斷氣道炎癥程度3。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：哮喘模型大鼠血清NO含量有所升高，而藥物干預(yù)各組血清中NO含量較哮喘組亦降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。哮喘模型大鼠肺組織NO含量明顯升高，而藥物干預(yù)各組血清中NO含量較哮喘組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ET能直接通過(guò)刺激氣道平滑肌細(xì)胞增生、肥厚，導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性;當(dāng)體內(nèi)ET升高時(shí)，ET可直接作用于平滑肌，也可促進(jìn)炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放，間接作用于

11、氣道，且ET-1水平與哮喘嚴(yán)重程度平行，提示ET可能是哮喘發(fā)病機(jī)制中的重要活性物質(zhì)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型組血漿和肺組織中ET-1明顯高于正常組，肺組織中ET-1水平升高倍數(shù)明顯高于血漿中ET-1升高的倍數(shù)，提示ET-1的增加可能主要源于氣道局部合成與釋放的增加。藥物干預(yù)后，各實(shí)驗(yàn)組血漿及肺組織ET-1均減低，表明加味麻杏石甘湯能有效降低哮喘大鼠血清及肺組織中ET-1含量水平，減輕哮喘大鼠炎癥反應(yīng)，并能通過(guò)降低氣道平滑肌收縮而起到降低氣道高反應(yīng)性的作用。另外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示肺組織中ET-1和NO均升高且呈正相關(guān)性，提示兩者關(guān)系密切，一方升高，另一方也升高，兩者相互促進(jìn)，加重氣道炎癥及支氣管痙攣，加重哮喘。綜上分析臨床應(yīng)用中藥加味麻杏石甘湯治療支氣管哮喘的機(jī)理,可能是通過(guò)降低肺組織NO含量，降低血漿及肺組織ET-1的合成和釋放,從而減輕哮喘氣道炎癥及氣道上皮重建,達(dá)到降低氣道高反應(yīng)性?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 崔龍?zhí)O,楊永清,陳漢平，等.過(guò)敏性哮喘大鼠模型的制備J.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué),2