三效愈創(chuàng)軟膏抗炎抑菌藥效學(xué)研究

1、三效愈創(chuàng)軟膏抗炎抑菌藥效學(xué)研究【摘要】 目的 觀察不同濃度三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯小鼠炎癥模型、體外各種菌株、肺炎球菌小鼠模型的影響。方法 建立二甲苯小鼠炎癥模型,體外各種菌株、肺炎球菌小鼠模型,采取隨機對照的方法,檢測經(jīng)不同濃度三效愈創(chuàng)軟膏作用后小鼠耳廓腫脹程度、小鼠耳廓毛細血管通透性、多種菌株生長狀況和肺炎球菌小鼠死亡率的變化。結(jié)果 8%三效愈創(chuàng)軟膏組對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹具有明顯的抑制作用,與京萬紅相比無統(tǒng)計學(xué)意義；可顯著抑制二甲苯所致的鼠耳毛細血管通透性；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、傷寒桿菌均有不同程度的抑制或殺滅作用；顯著降低腹腔感染肺炎雙球菌小鼠的死亡率。

2、結(jié)論 三效愈創(chuàng)軟膏具有較好的抗炎、體內(nèi)外抑菌作用。 【關(guān)鍵詞】 三效愈創(chuàng)軟膏；抗炎抑菌；動物模型；清熱解毒 Abstract：Objective To observe the effects of Sanxiaoyuchuang ointment on the mice inflammatory model induced by Dimethylbenzene, bacteria strains in vitro and mice pneumococcus pneumonia model. Methods Mice inflammatory model induced by Dimethylb

3、enzene, in vitro bacteria strains model and mice pneumococcus pneumonia model were founded respectively, randomed and controlled methods were used, exposed to different dosages of Sanxiaoyuchuang ointment, the changes of auricle swelling degree, earcapillary vessel permeability, the growth rate of s

4、trains and pneumococcus pneumonia mices mortality were measured. Results 8% dose Sanxiaoyuchuang group had obvious inhibition effects on mice auricle swelling induced by Dimethylbenzene, it had no obvious difference compared with Jingwanhong group. It could also lower the mice earcapillary vessel pe

5、rmeability, inhibit or eradicate the colon bacillus, Staphylococcus aureus, cyanomycosis, Sonne dysetery, typhoid bacillus, and decrease the mortality rate of mice intraperitoneal injected by pneumococcus. Conclusion Sanxiaoyuchuang ointment has good anti- inflammatory and bacteriostasis (in vivo an

6、d in vitro) pharmacodynamics effects. Key words：Sanxiaoyuchuang ointment；anti-inflammatory and bacteriostasis；animal model；clearing away heat and toxic material 三效愈創(chuàng)軟膏是由大黃、白及、生地榆、沒藥、冰片等中藥的提取物與賦形劑混和制成的膏劑。該藥具有良好的消炎、消腫、抗感染的功能,對皮膚軟組織感染、多種開放性或閉合性損傷具有較好的療效。為了對該藥的進一步合理使用提供科學(xué)依據(jù),我們觀察了三效愈創(chuàng)軟膏的消炎、體內(nèi)外抑(殺)菌等作用。1

7、小鼠耳廓二甲苯致炎實驗1.1 材料 5%、8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏每100 g制劑含原藥材分別是5、8、10、15 g；三效愈創(chuàng)軟膏賦形劑主要成分為羊毛脂、凡士林等；8%含揮發(fā)油三效愈創(chuàng)軟膏(藥物由江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司提供)。京萬紅軟膏(天津達仁堂制藥廠生產(chǎn),批號970617)。體重2022 g的昆明種小鼠70只,雌雄不拘,山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。1.2 方法 動物隨機分為6組,每組10只。對照組：小鼠耳廓涂以賦形劑約0.05 mL/20 g。京萬紅組：小鼠耳廓涂以京萬紅軟膏約0.05 mL/20 g。5%、8%、10%、15%三效愈創(chuàng)軟膏組：小鼠耳廓分別涂以5%、8%、1

8、0%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏0.05 mL/20 g。含揮發(fā)油三效愈創(chuàng)軟膏：小鼠耳廓涂以8%三效愈創(chuàng)軟膏0.05 mL/20 g。參照文獻1-2,實驗當日各組涂藥1次,1 h后各組動物耳廓均以蒸餾水洗去藥液,用干棉球擦凈。小鼠右耳涂以二甲苯0.05 mL/只,左耳對照,15 min后處死動物。用直徑6 mm的打孔機將雙耳同部位等面積切下,稱左右耳片重量。兩耳片重量之差為腫脹程度,求出腫脹率。用Newman-keuls法進行統(tǒng)計學(xué)處理。1.3 結(jié)果 京萬紅、5%三效愈創(chuàng)軟膏、8%的三效愈創(chuàng)軟膏及8%含揮發(fā)油的三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹具有明顯的抑制作用；8%三效愈創(chuàng)軟膏、三效愈創(chuàng)軟膏揮

9、發(fā)油組與京萬紅相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；賦形劑及10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏無抗炎作用。見表1。表1 三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（略）2 小鼠耳毛細血管通透性實驗2.1 材料 三效愈創(chuàng)軟膏賦形劑,京萬紅(廠家同前),濃度為5%、8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏、三效愈創(chuàng)軟膏揮發(fā)油、二甲苯、0.5%的伊文斯蘭生理鹽水液。2.2 方法 分組同前。各組小鼠耳廓涂抹各自藥物1 h后,用0.5%的伊文斯蘭生理鹽水液按0.1 mL/kg尾靜脈注射,立即在小鼠左耳滴二甲苯2滴,15 min內(nèi)觀察耳廓顏色變化。根據(jù)其藍染程度按1、2、3級評分,用Kruskal-wallis法進行秩和檢驗1-2。

10、2.3 結(jié)果 8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏及三效愈創(chuàng)軟膏揮發(fā)油組均能顯著抑制二甲苯所致的鼠耳毛細血管通透性增加。京萬紅、5%三效愈創(chuàng)軟膏與賦形劑相比無統(tǒng)計學(xué)意義,見表2。表2 三效愈創(chuàng)軟膏對小鼠耳毛細血管通透性影響（略）3 抑(殺)菌作用3.1 材料 30%三效愈創(chuàng)軟膏水溶液,無菌試管,吸管；18%羊血瓊脂：以營養(yǎng)瓊脂為培養(yǎng)基加入新鮮脫纖維羊血至10%濃度,營養(yǎng)肉湯和10%自制小牛血清。濃度均為600萬個/mL的大腸桿菌、綠膿桿菌、傷寒(TH)桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌液。3.2 方法 取滅菌試管若干支,用2倍稀釋法將藥液稀釋至第17管,第18管為陽性對照管,不加藥液。每管加入

11、0.1 mL上述濃度的新鮮菌液。因藥物本身有顏色,我們將前12管中的培養(yǎng)液0.1 mL分別移種在新鮮的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,37 培養(yǎng)24 h1-2。3.3 結(jié)果 三效愈創(chuàng)軟膏對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、傷寒(TH)桿菌均有不同程度的抑制或殺滅作用(見表3)。表3 三效愈創(chuàng)軟膏抑(殺)菌效果（略）4 體內(nèi)抗菌實驗4.1 材料 5%、8%、10%的三效愈創(chuàng)軟膏原藥液,雙黃連復(fù)方制劑,生理鹽水。1822 g的昆明種小鼠40只,雌雄各半,山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。4.2 方法 將動物隨機分為5%、8%、10%的三效愈創(chuàng)原藥液及雙黃連復(fù)方制劑陽性對照、生理鹽水陰性對照組5組,

12、每組8只。試驗前各組動物分別灌胃給予受試藥物3 d,每日2次,0.3 mL/次。根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,選取80%90%小鼠致死量(LD80-90)的3×10-4億/mL的肺炎雙球菌,以0.5 mL腹腔注射感染小鼠,以1周內(nèi)死亡存活鼠數(shù)進行2檢驗以判斷藥物保護劑量。肺炎雙球菌由山西醫(yī)科大學(xué)微生物教研室提供,用血清作系列稀釋1-2。4.3 結(jié)果 與生理鹽水組、10%三效愈創(chuàng)原藥液組比較,8%三效愈創(chuàng)原藥液能顯著降低腹腔感染肺炎雙球菌小鼠的死亡率(見表4)。表4 三效愈創(chuàng)軟膏對腹腔感染肺炎雙球菌小鼠死亡率的影響（略）注：與生理鹽水組、10%三效愈創(chuàng)原藥液組比較,*P0.055 討論 三效愈創(chuàng)軟膏

13、由古今圖書集成、外科正宗中的太乙膏化裁而成。方中以大黃、黃柏等為君藥,清熱解毒、活血化瘀；蒲公英、地榆等為臣藥,行氣瀉火；佐以當歸、生地黃補血養(yǎng)血、涼血止痛；冰片、透骨草二藥共同為使,引藥力透達筋骨。全方共奏清火解毒、活血散瘀、消腫止痛、生肌斂瘡之效。以該方制作的軟膏和油紗劑型經(jīng)多年臨床觀察,對體表(皮膚軟組織)感染和創(chuàng)傷所致局部紅腫熱痛炎性癥狀有顯著的緩解和消除作用,并有促進創(chuàng)面愈合作用。本實驗觀察到,8%三效愈創(chuàng)軟膏組能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹；抑制伊文斯蘭小鼠耳廓毛細血管通透性；體外對金黃色葡萄球菌、傷寒(TH)桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌具有抑制或殺滅作用；顯著降低

14、腹腔感染肺炎雙球菌后死亡率,可能與該藥良好的抗炎、抗菌等功能有關(guān)。藥理研究表明3-5,大黃、黃柏、蒲公英、地榆等中藥煎劑對多種致病菌有良好的殺菌或抑制作用；對炎癥發(fā)展過程的各階段皆有一定的抑制作用。這與三效愈創(chuàng)軟膏的實驗結(jié)果基本一致。【參考文獻】 1 徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學(xué)M.第3版,北京：人民衛(wèi)生出版社,2003.911,16571666.2 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編S.1993.122.3 宋振民,常文華,任澤旺.蒲公英提取物對凝固酶陰性葡萄球菌的體外抗菌活性研究J.中成藥,2007,29(4)：584586.4 楊明煒,陸付耳,徐麗君

15、,等.20種清熱解毒中藥對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌體外抑菌的初步觀察J.中國藥師,2006,9(2)：141142.5 王開富,陸付耳,徐麗君,等.清熱解毒與養(yǎng)陰增液法對內(nèi)毒素脫毒相關(guān)分子HDL和ALP影響的研究J.中國病理生理雜志,2006,22(1)：135138.【摘要】 目的 觀察不同濃度三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯小鼠炎癥模型、體外各種菌株、肺炎球菌小鼠模型的影響。方法 建立二甲苯小鼠炎癥模型,體外各種菌株、肺炎球菌小鼠模型,采取隨機對照的方法,檢測經(jīng)不同濃度三效愈創(chuàng)軟膏作用后小鼠耳廓腫脹程度、小鼠耳廓毛細血管通透性、多種菌株生長狀況和肺炎球菌小鼠死亡率的變化。結(jié)果 8%三效愈創(chuàng)軟膏組對二甲

16、苯引起的小鼠耳廓腫脹具有明顯的抑制作用,與京萬紅相比無統(tǒng)計學(xué)意義；可顯著抑制二甲苯所致的鼠耳毛細血管通透性；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、傷寒桿菌均有不同程度的抑制或殺滅作用；顯著降低腹腔感染肺炎雙球菌小鼠的死亡率。結(jié)論 三效愈創(chuàng)軟膏具有較好的抗炎、體內(nèi)外抑菌作用。 【關(guān)鍵詞】 三效愈創(chuàng)軟膏；抗炎抑菌；動物模型；清熱解毒Antiinflammatory and Bacteriostasis Pharmacodynamics Effects Research of Sanxiaoyuchuang OintmentZHANG Jie, ZHANG Nan, GE Hai-t

17、aoHuanghe Institute of Materia Medica, Nanjing University, Nanjing 210093, China Abstract：Objective To observe the effects of Sanxiaoyuchuang ointment on the mice inflammatory model induced by Dimethylbenzene, bacteria strains in vitro and mice pneumococcus pneumonia model. Methods Mice inflammatory

18、 model induced by Dimethylbenzene, in vitro bacteria strains model and mice pneumococcus pneumonia model were founded respectively, randomed and controlled methods were used, exposed to different dosages of Sanxiaoyuchuang ointment, the changes of auricle swelling degree, earcapillary vessel permeab

19、ility, the growth rate of strains and pneumococcus pneumonia mices mortality were measured. Results 8% dose Sanxiaoyuchuang group had obvious inhibition effects on mice auricle swelling induced by Dimethylbenzene, it had no obvious difference compared with Jingwanhong group. It could also lower the

20、mice earcapillary vessel permeability, inhibit or eradicate the colon bacillus, Staphylococcus aureus, cyanomycosis, Sonne dysetery, typhoid bacillus, and decrease the mortality rate of mice intraperitoneal injected by pneumococcus. Conclusion Sanxiaoyuchuang ointment has good anti- inflammatory and

21、 bacteriostasis (in vivo and in vitro) pharmacodynamics effects. Key words：Sanxiaoyuchuang ointment；anti-inflammatory and bacteriostasis；animal model；clearing away heat and toxic material 三效愈創(chuàng)軟膏是由大黃、白及、生地榆、沒藥、冰片等中藥的提取物與賦形劑混和制成的膏劑。該藥具有良好的消炎、消腫、抗感染的功能,對皮膚軟組織感染、多種開放性或閉合性損傷具有較好的療效。為了對該藥的進一步合理使用提供科學(xué)依據(jù),我們

22、觀察了三效愈創(chuàng)軟膏的消炎、體內(nèi)外抑(殺)菌等作用。1 小鼠耳廓二甲苯致炎實驗1.1 材料 5%、8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏每100 g制劑含原藥材分別是5、8、10、15 g；三效愈創(chuàng)軟膏賦形劑主要成分為羊毛脂、凡士林等；8%含揮發(fā)油三效愈創(chuàng)軟膏(藥物由江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司提供)。京萬紅軟膏(天津達仁堂制藥廠生產(chǎn),批號970617)。體重2022 g的昆明種小鼠70只,雌雄不拘,山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。1.2 方法 動物隨機分為6組,每組10只。對照組：小鼠耳廓涂以賦形劑約0.05 mL/20 g。京萬紅組：小鼠耳廓涂以京萬紅軟膏約0.05 mL/20 g。5%、8%、10%

23、、15%三效愈創(chuàng)軟膏組：小鼠耳廓分別涂以5%、8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏0.05 mL/20 g。含揮發(fā)油三效愈創(chuàng)軟膏：小鼠耳廓涂以8%三效愈創(chuàng)軟膏0.05 mL/20 g。參照文獻1-2,實驗當日各組涂藥1次,1 h后各組動物耳廓均以蒸餾水洗去藥液,用干棉球擦凈。小鼠右耳涂以二甲苯0.05 mL/只,左耳對照,15 min后處死動物。用直徑6 mm的打孔機將雙耳同部位等面積切下,稱左右耳片重量。兩耳片重量之差為腫脹程度,求出腫脹率。用Newman-keuls法進行統(tǒng)計學(xué)處理。1.3 結(jié)果 京萬紅、5%三效愈創(chuàng)軟膏、8%的三效愈創(chuàng)軟膏及8%含揮發(fā)油的三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯引起的小鼠耳廓腫

24、脹具有明顯的抑制作用；8%三效愈創(chuàng)軟膏、三效愈創(chuàng)軟膏揮發(fā)油組與京萬紅相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；賦形劑及10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏無抗炎作用。見表1。表1 三效愈創(chuàng)軟膏對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（略）2 小鼠耳毛細血管通透性實驗2.1 材料 三效愈創(chuàng)軟膏賦形劑,京萬紅(廠家同前),濃度為5%、8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏、三效愈創(chuàng)軟膏揮發(fā)油、二甲苯、0.5%的伊文斯蘭生理鹽水液。2.2 方法 分組同前。各組小鼠耳廓涂抹各自藥物1 h后,用0.5%的伊文斯蘭生理鹽水液按0.1 mL/kg尾靜脈注射,立即在小鼠左耳滴二甲苯2滴,15 min內(nèi)觀察耳廓顏色變化。根據(jù)其藍染程度按1、2、3級評分

25、,用Kruskal-wallis法進行秩和檢驗1-2。2.3 結(jié)果 8%、10%、15%的三效愈創(chuàng)軟膏及三效愈創(chuàng)軟膏揮發(fā)油組均能顯著抑制二甲苯所致的鼠耳毛細血管通透性增加。京萬紅、5%三效愈創(chuàng)軟膏與賦形劑相比無統(tǒng)計學(xué)意義,見表2。表2 三效愈創(chuàng)軟膏對小鼠耳毛細血管通透性影響（略）3 抑(殺)菌作用3.1 材料 30%三效愈創(chuàng)軟膏水溶液,無菌試管,吸管；18%羊血瓊脂：以營養(yǎng)瓊脂為培養(yǎng)基加入新鮮脫纖維羊血至10%濃度,營養(yǎng)肉湯和10%自制小牛血清。濃度均為600萬個/mL的大腸桿菌、綠膿桿菌、傷寒(TH)桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌液。3.2 方法 取滅菌試管若干支,用2倍稀釋法將藥液稀

26、釋至第17管,第18管為陽性對照管,不加藥液。每管加入0.1 mL上述濃度的新鮮菌液。因藥物本身有顏色,我們將前12管中的培養(yǎng)液0.1 mL分別移種在新鮮的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,37 培養(yǎng)24 h1-2。3.3 結(jié)果 三效愈創(chuàng)軟膏對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、傷寒(TH)桿菌均有不同程度的抑制或殺滅作用(見表3)。表3 三效愈創(chuàng)軟膏抑(殺)菌效果（略）4 體內(nèi)抗菌實驗4.1 材料 5%、8%、10%的三效愈創(chuàng)軟膏原藥液,雙黃連復(fù)方制劑,生理鹽水。1822 g的昆明種小鼠40只,雌雄各半,山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。4.2 方法 將動物隨機分為5%、8%、10%的三效愈創(chuàng)原藥液及雙黃連復(fù)方制劑陽性對照、生理鹽水陰性對照組5組,每組8只。試驗前各組動物分別灌胃給予受試藥物3 d,每日2次,0.3 mL/次。根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,選取80%90%小鼠致死量(LD80-90)的3×10-4億/mL的肺炎雙球菌,以0.5 mL腹腔注射感染小鼠,以1周內(nèi)死亡存活鼠數(shù)進行2檢驗以判斷藥物保護劑量。肺炎雙球菌由山西醫(yī)科大學(xué)微生物教研室提供,用血清作系列稀釋1