RPHPLC法測定泛昔洛韋分散片的含量及有關物質

1、RPHPLC法測定泛昔洛韋分散片的含量及有關物質         【摘要】  目的 建立高效液相色譜法分離測定泛昔洛韋分散片的含量及有關物質的 方法 。方法 采用Kromasil C18(4.6mm×250mm，5m)色譜柱；流動相：乙腈0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(2575)；流速：1.0ml/min；有關物質測定檢測波長為220nm，含量測定檢測波長為305nm；進樣量20l。結果 泛昔洛韋濃度在29.4088.20g/ml范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.99998；平均回收率為

2、100.1%，RSD為0.30%，n=9；泛昔洛韋與有關物質能完全分離。結論 本方法簡便、準確、專屬性強，可用于泛昔洛韋分散片的含量及有關物質的測定。 【關鍵詞】  福建省藥品檢驗所， 福州350001   Determination of famciclovir and its related substances in   ABSTRACT  Objective  To develop an RPHPLC method for the determination of famciclovir and its relate

3、d substances in famciclovir dispersible tablets.  Methods  The chromatographic analysis was performed on Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm, 5m) column. The mobile phase consisted of acetonitrile0.02mol/L phosphate buffer (2575). The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was at

4、305nm for the content determination of famciclovir and it was 220nm for the analysis of its related substances, with 20 l injection volume.  Results  A good linearity was obtained in the range of 29.4088.20g/ml (r=0.99998). The average recovery of famciclovir was 100.1% (n=9) with RSD 0.30

5、%. The related substances were separated from famciclovir.  Conclusion  The method was simple, accurate and specific, and could be used for the quality control of famciclovir dispersible tablets.   KEY WORDS  RPHPLC;  Famciclovir dispersible tablets;  Content deter

6、mination;  Related substances   泛昔洛韋是一種開環(huán)核苷類新型高效、低毒抗病毒藥物。本品口服吸收快，體內在酶促條件下，經脫酯和嘌呤環(huán)的氧化作用迅速轉化為噴昔洛韋而發(fā)揮藥效。它對單純皰疹I型和II型(HSV1，HSV2)、水痘、帶狀皰疹病毒(VZV)均有抗病毒活性1，也可用于阿昔洛韋 治療 無效或不敏感的嚴重皰疹病毒感染和乙型肝炎2。泛昔洛韋分散片為該藥的新劑型，它崩解快，起效迅速，效果明顯。本文用反相高效液相色譜法測定泛昔洛韋分散片的含量及有關物質，專屬性強，準確簡便，結果滿意。   1  儀器與試藥&#

7、160;  HP1100型高效液相色譜儀(G1311A四元泵，G1379A脫氣機，G1316A柱溫箱，G1313A自動進樣器，G1314A紫外檢測器)、Ver0801 chemistation色譜站(Agilent公司)。Cary100分光光度計(VARIAN公司)。   泛昔洛韋對照品，含量98.9%；泛昔洛韋分散片，批號05010001、 05010003、05010005(廈門建發(fā)制藥有限公司提供)；乙腈為色譜純，其余試劑均為 分析 純。    2  方法與結果   2.1  色譜條件與系

8、統(tǒng)適用性試驗   色譜柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5m)(大連依利特 科學 儀器有限公司)，Varian C18(4.6mm×250mm，5m)(美國Varian公司)；流動相：乙腈0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(2575)；流速1.0ml/min；有關物質測定檢測波長為220nm，含量測定檢測波長為305nm；進樣量20l。在有關物質測定的色譜中， 理論 板數按泛昔洛韋峰計為14369，泛昔洛韋主峰與相鄰的峰的分離度大于3。   2.2  檢測波長的選擇   精密稱取泛昔洛韋

9、對照品和樣品細粉，用流動相溶解并制成每1ml含泛昔洛韋10g的溶液，分別在400200nm波長范圍內掃描，結果泛昔洛韋對照品及樣品在220、242與305nm波長處有最大吸收。確定220nm為有關物質測定的波長，305nm為含量測定波長。   2.3  有關物質測定   (1)樣品有關物質  取樣品按上述測定方法測定，3批樣品有關物質分別為0.76%、0.82%和0.85%，雜質峰與泛昔洛韋主峰均能分離(Fig.1A)。   (2)酸破壞試驗  稱取本品細粉38.80mg，加0.1mol/L鹽酸溶液5ml

10、，放置1h，中和后依法稀釋并測定，記錄的色譜圖顯示泛昔洛韋主峰面積減小，雜質峰面積明顯增大，雜質峰總面積為原來未破壞樣品雜質峰總面積的9倍多，但各個峰之間均能較好地分離(Fig.1B)。   (3)堿破壞試驗  取本品細粉38.55mg，加入0.05mol/L氫氧化鈉溶液1ml，放置30min，中和后依法稀釋并測定，色譜圖顯示泛昔洛韋主峰面積減小，出現三個峰面積較大的新的雜質峰，原雜質峰面積明顯增大，雜質峰總面積約為原來未破壞樣品雜質峰面積的48倍。說明本品在堿中很容易破壞，在堿性下破壞后主成分被部分降解，并產生一些其它的雜質(Fig.1C)。 

11、0; (4)高溫破壞試驗  取本品細粉置90加熱6h，放冷，稱取37.52mg，同法測定，色譜圖中泛昔洛韋主峰面積減少，出現了一些新的小雜質峰，雜質峰總面積約為原來雜質峰面積的2倍。說明高溫對泛昔洛韋稍有 影響 。   (5)高濕試驗  取本品，依 文獻 3進行吸濕性試驗，結果顯示本品吸濕性強。稱取適量，同法溶解并稀釋，進樣測定，色譜圖中泛昔洛韋主峰面積減小并產生一個面積很大的新雜質峰，且原雜質峰面積明顯增大。說明濕度對泛昔洛韋影響大(Fig.1D)。   (6)氧化破壞試驗  稱取樣品37.47mg，進行氧化破壞試驗后，取

12、適量加流動相使溶解并稀釋，同法測定，圖中顯示，主峰面積減小，出現三個新雜質峰，原雜質峰面積明顯增大(Fig.1E)。   (7)光照試驗  取本品細粉適量，依文獻4進行光照試驗并測定，結果顯示主峰面積減少很多，產生一個面積很大的新雜質峰，且原雜質峰面積明顯增大，說明長時間光照對泛昔洛韋影響很大(Fig.1F)。   綜上所述，酸、堿、高溫、高濕、氧化、光照等破壞對泛昔洛韋分散片影響大，且均有降解產物產生，產生的雜質大多能分離。另按處方配制除泛昔洛韋以外的其他成分和輔料制成陰性溶液，按上述選定的方法進行測定，色譜圖顯示陰性溶液在泛昔洛韋的主峰位置

13、沒有出現其他的雜質峰，說明此方法可避免其他成分和輔料的干擾。            D: 10d in heavy moisture;  E: Destroyed by oxidization;  F: 10d with illumination   Fig.1   HPLC chromatograms of related substances test for famciclovir dispersible tablets 

14、;  5m)兩種色譜柱對泛昔洛韋分散片中有關物質進行測定，記錄的色譜峰形均良好， 理論 板數按泛昔洛韋峰計均為10000以上，泛昔洛韋峰與相鄰的峰的分離度均在1.5以上，耐用性好。   2.4  含量測定   A=25.017C+0.4402  r=0.99998   表明泛昔洛韋濃度在29.4088.20g/ml范圍內與A: Reference;  B: Sample   Fig.2   HPLC chromatograms of famciclovir

15、   dispersible tablets   Fig.3   Linear relationship of the sample concentration   and peak area   峰面積呈良好的線性關系。   按處方配制三種不同濃度的溶液各3份，共9份，按上述選定的方法測定，計算回收率。結果見Tab.1。   3  討論   (1)本文中的含量測定方法采用305nm為檢測波長，避免可能產生的雜質的干擾；而采用

16、220nm波長測定其有關物質，在此波長下更靈敏，可有效測定已產生的雜質。   (2)試驗表明，本文介紹的HPLC色譜條件，對泛昔洛韋及其相關物質相互間均有良好分離度，互不干擾檢測。   (3)泛昔洛韋為堿性藥物，實驗中選擇磷酸二氫鉀溶液作為流動相的水相，有利于泛昔洛韋的出峰。選擇磷酸二氫鉀溶液濃度為0.02mol/L，峰形對稱，柱效高，基線平穩(wěn)。   (4)泛昔洛韋分散片作為需快速崩解分散的藥物劑型，所用輔料與普通片劑不同，輔料多達九種，但在本方法色譜條件下，輔料不出峰，不干擾泛昔洛韋的含量和有關物質的測定。   (5)在酸、堿、氧化破壞試驗中表明，本品易受這些條件的 影響 ，光照與濕度也易影響本品的質量，故應注意本品的儲藏條件和使用的期限。   (6)實驗結果表明，